焦淑靜

流行病學(xué)研究證實人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)感染是女性宮頸上皮內(nèi)瘤變(Cervical intraepithelial neoplasia，CIN)和宮頸癌的主要病因，對HPV感染的檢測和分型是處理宮頸病變的重要依據(jù)[1]。HPV的不同型別引起細胞病理的類型改變不同，因此，準確的基因分型，及時明確患者感染HPV的基因型別對感染的治療、宮頸病變的預(yù)防及流行狀況的調(diào)查均有重要的意義[2]。我們采用核酸分子快速導(dǎo)流雜交基因芯片分型技術(shù)(HybrMax法)對我院婦科門診796例婦女進行了HPV感染的分型檢測，實驗結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2009年4月至2012年3月在我院婦科門診就診患者796例，采用HybrMax法檢測人乳頭瘤病毒并進行基因分型。隨機選取502例，年齡21～53歲，平均年齡(36±11.5)歲，其中宮頸細胞學(xué)檢查正常者116例，細胞學(xué)異常者386例。對細胞學(xué)檢查異常者在陰道鏡下行宮頸多點活檢進一步作病理學(xué)檢查，診斷標準采用2001年國際癌協(xié)會TBS診斷系統(tǒng)。包括:宮頸慢性炎癥(炎癥組)173例，宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ級(CINⅠ組)92例，上皮內(nèi)瘤變Ⅱ級(CINⅡ組)52例，上皮內(nèi)瘤變Ⅲ級(CINⅢ組)44例，宮頸癌組25例，所有標本采集和診治過程均經(jīng)就診者本人同意。

1.2 實驗方法 HPV分型檢測的標本取樣步驟和要求按宮頸細胞學(xué)取材常規(guī)進行，標本放置在專用樣本收集管內(nèi)，4℃保存兩周內(nèi)檢測。導(dǎo)流雜交基因芯片HPV分型試劑盒由凱普生物化學(xué)有限公司提供，能夠檢測21種基因型;PCR擴增用擴增儀由廈門安普利生物醫(yī)學(xué)有限公司提供。樣本檢測時嚴格按操作程序進行DNA提取、擴增、快速導(dǎo)流雜交，肉眼對樣本結(jié)果進行判讀。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS10.0軟件進行統(tǒng)計分析，組間比較用t檢驗，率的比較采用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 應(yīng)用導(dǎo)流雜交基因芯片法檢測796例患者HPV結(jié)果796例患者標本中，HPV基因檢測陽性率為29.15%(232/796)。

2.2 導(dǎo)流雜交基因芯片與病理組織學(xué)檢查結(jié)果的比對隨機選取的502例患者樣本中，基因芯片技術(shù)檢測HPV基因分型陽性176例，陰性326例。陰性病例以正常細胞學(xué)及低度以下病變(慢性炎癥和CINⅠ)為主，占90.49%，高度病變(CINⅡ、CINⅢ)及宮頸癌占9.5%。陽性病例中隨著病變程度增高，HPV感染率亦逐漸升高，各組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。以病理組織學(xué)結(jié)果為標準，導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)診斷宮頸癌的敏感性為96%，特異性為68.13%，陽性預(yù)測值為13.63%，陰性預(yù)測值為99.69%，結(jié)果見表1。

2.3 不同組別患者導(dǎo)流雜交基因芯片檢測HPV的基因型分布情況176例陽性標本中檢測出14種基因型，其中高危基因型10種，低?；蛐?種。HPV基因型感染率由高到低為:HPV-16(22.7%)、HPV-58(8.5%)、HPV-52(8.5%)、HPV-18(8.0%)、HPV-33(7.4%)、CP8304(6.3%)、HPV-53(5.7%)、HPV-31(5.1%)、HPV-11(5.1%)、HPV-68(4.5%)、HPV-42(4.5%)、HPV-59(3.9%)、HPV-39(3.4%)、HPV-44(2.8%)。前七位均為高?；蛐?，統(tǒng)計顯示宮頸癌組HPV高危基因型感染率為92%，明顯高于炎癥組和CIN組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);HPV-16型感染率最高且與宮頸癌病變嚴重程度正相關(guān)(P＜0.01)。

2.4 不同組別患者導(dǎo)流雜交基因芯片檢測HPV多重感染結(jié)果分析，各組均有多重感染的情況，隨著病變程度的加重，多重感染率越高。其中單一感染率22.3%，雙重感染率10.2%，三重感染率5.2%，四重感染率3.0%，各組感染率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)果見表2。

表1 502例標本依據(jù)病理組織學(xué)分組HybrMax法檢測HPV結(jié)果(例，%)

表2 不同組別患者HPV多重感染結(jié)果表(例，%)

3 討論

流行病學(xué)調(diào)查證實，高危型HPV感染是子宮頸癌和子宮頸上皮內(nèi)瘤變高發(fā)的主要危險因素[3]。HPV感染的檢測已成為預(yù)防、診斷和處理宮頸病變的重要依據(jù)，因此選擇一種準確、快速、實用的HPV檢測方法很有必要。目前，采用分子雜交技術(shù)(HC-Ⅱ法)和PCR定量檢測HPV是主要的兩種篩查方法。但傳統(tǒng)的雜交技術(shù)操作繁雜，需時較長，易出現(xiàn)假陽性和假陰性，且不能判斷多重感染，從而容易造成對患者病情的錯誤評估。導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)(HybrMax法)可彌補上述缺陷，有學(xué)者報道傳統(tǒng)的HC-Ⅱ法和HybrMax法的實驗結(jié)果有很高的一致性[4]。

本文實驗結(jié)果示，796例患者標本HPV感染陽性率為29.14%。所隨機選取的502例標本中，HPV感染率為35.05%。細胞學(xué)檢查正?；颊邩吮局校琀PV感染為12.06%。隨著患者宮頸病變程度的加重，HPV感染率逐漸增高，慢性炎癥組為23.69%，CINⅠ組為33.69%，CINⅡ組為59.61%，CINⅢ組為79.54%宮頸癌組為96.0%，各組間對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，證明HPV感染與CIN和宮頸癌的發(fā)生高度相關(guān)。有文獻報道，HPV感染者只有在病毒靠自身免疫力無法清除并持續(xù)感染狀態(tài)時才會引起宮頸病變。本組實驗資料宮頸癌患者的特異性為68.13%，比郭東輝等報道的資料低，它可能與本組患者年齡結(jié)構(gòu)、地區(qū)差別及樣本量小有關(guān)。

HPV基因型的分布具有明顯的地區(qū)差別，在宮頸癌患者中除HPV16外，HPV45、31、33較常見，多數(shù)亞洲國家的研究提示，HPV52、58 的感染率高于 HPV45、31、33，本組數(shù)據(jù)顯示與其研究結(jié)果一致。本實驗結(jié)果中HPV45的陽性率為零，亦無HPV35和43型，符合亞洲地區(qū)高危型HPV的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果。宮頸上皮內(nèi)瘤變組(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ組)中HPV52型、58型的陽性率高于HPV18型，而宮頸癌組HPV18亞型陽性率最高，提示感染HPV18型的患者可能更易致癌。近來有學(xué)者發(fā)現(xiàn)許多患者存在HPV混合性感染，但混合性感染的類型、作用以及對致病能力的影響尚無確切定論[5]。本文實驗結(jié)果統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，高級別CIN病變患者中有較高的混合性感染，主要為HPV16/18型與31/33型的混合。176例HPV陽性患者標本中，18.4%為混合性感染，主要分布在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌組，且與病變嚴重程度成正比;混合性感染與單一感染相比，兩者宮頸上皮內(nèi)病變發(fā)生率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，說明多重HPV病毒亞型的混合性感染對宮頸慢性炎癥、CIN和宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展可能有累加和促進作用。

綜上所述，采用導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)對HPV感染者進行分型檢測，并結(jié)合細胞學(xué)的檢查，對宮頸癌的早期預(yù)防和治療意義重大，也可作為無臨床癥狀HPV感染者的療效觀察和隨訪檢查手段。

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