靳鐵飛，吳 萍，譚 茜，周牡娜，徐愛良，彭延古

革蘭氏陰性菌（G－）感染是引起內(nèi)毒素休克的常見原因，其所產(chǎn)生的內(nèi)毒素是主要的致病因素。脂多糖（LPS）為G－細胞壁內(nèi)毒素主要成分。內(nèi)毒素通過直接或間接作用于細胞和體液，導(dǎo)致彌散性血管內(nèi)凝血（DIC），并繼發(fā)性纖溶引起獲得性出血綜合征。由于血小板與凝血因子的大量消耗所形成的全身微循環(huán)障礙，使得內(nèi)毒素休克致死率高達50%以上［1］。本實驗觀察全蝎純化液（PLIS）對大鼠內(nèi)毒素休克的影響，并從血漿組織因子（TF）、腫瘤壞死因子（TNF）和組織因子途徑抑制物（TFPI）等環(huán)節(jié)探究其防治休克的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 SD大鼠［合格證編號：SCXK（湘）2009－0004］50只，體重250g～280g，雌雄各半，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司。全蝎干燥藥材購自湖南省醫(yī)藥公司，經(jīng)水煮醇沉、凝膠層析、離子交換等分離純化過程制備成全蝎純化液，凍干備用。TF、TFPI、TNF試劑盒購自美國Assaypro公司。

1.2 實驗方法 SD大鼠50只隨機分為空白組、模型組、全蝎純化液小劑量組（5mg／kg）、全蝎純化液中劑量組（10mg／kg）、全蝎純化液大劑量組（20mg／kg），每組10只。腹腔注射戊巴比妥鈉（40mg／kg）麻醉大鼠，頸部正中切口，常規(guī)氣管插管，全蝎純化液各劑量組由靜脈給予PLIS，15min后，全蝎純化液各劑量組和模型組給予LPS 5mg／kg，空白組給予等量生理鹽水。各組動物左頸動脈插管連接血導(dǎo)生理記錄儀，持續(xù)監(jiān)測平均動脈壓（MAP）。記錄LPS注射前及注射后60min、90min、180 min的MAP。LPS注射后3h，頸總動脈取血，用3.8%的枸櫞酸鈉（1∶9）抗凝。分離血漿于－30℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 檢測指標(biāo)及方法 血漿TF、TFPI及TNF含量測定均采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。嚴(yán)格按照說明書進行操作。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS16.0軟件，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。兩組間比較采用t檢驗，多組間做單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 全蝎純化液對內(nèi)毒素休克大鼠平均動脈壓的影響 空白組MAP在實驗中較平穩(wěn)，模型組則呈進行性下降，180min時降至最低。全蝎純化液各劑量組亦呈進行性下降。但180min時仍較平穩(wěn)，說明全蝎純化液可使MAP逐漸趨穩(wěn)。詳見表1。

表1 全蝎純化液對動脈血壓的影響（±s）kPa

表1 全蝎純化液對動脈血壓的影響（±s）kPa

組別0min 60min 90min 180min空白組17.8±1.2 17.3±2.3 15.9±3.3 14.8±2.7模型組 17.6±1.71） 12.5±2.81） 9.9±1.51） 6.2±1.31）全蝎純化液大劑量組 17.3±1.12） 15.9±2.52） 14.1±2.32） 13.5±2.42）全蝎純化液中劑量組 17.1±1.62） 14.3±3.12） 13.2±1.92） 12.3±1.72）全蝎純化液小劑量組 17.7±2.12） 13.1±2.22） 11.9±1.72） 10.9±1.72）與空白組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01

2.2 全蝎純化液對TF、TFPI、TNF的影響 全蝎純化液大、中、小劑量組TF、TNF均顯著降低，與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.0 1）。TFPI含量差異雖無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），但TFPI／TF均高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。詳見表2、表3。

表2 全蝎純化液對TF、TFPI的影響（±s）

表2 全蝎純化液對TF、TFPI的影響（±s）

TF模型組組別 n TF（μg／L）TFPI（μg／L）TFPI／10 2.16±0.39 15.3±3.9 8.1±1.2全蝎純化液大劑量組 10 1.12±0.251） 20.1±7.3 19.8±2.91）全蝎純化液中劑量組 10 1.29±0.191） 18.6±4.9 16.3±2.61）全蝎純化液小劑量組 10 1.42±0.331） 16.9±5.8 12.9±1.51）與模型組比較，1）P＜0.01

表3 全蝎純化液對TNF的影響（±s）

表3 全蝎純化液對TNF的影響（±s）

組別 n TNF（μg／L）空白組 10 75.2±7.6模型組 10 162.3±31.7全蝎純化液大劑量組 10 80.5±10.31）全蝎純化液中劑量組 10 96.7±19.81）全蝎純化液小劑量組 10 110.3±16.51）與模型組比較，1）P＜0.01

3 討 論

體內(nèi)注射LPS會產(chǎn)生內(nèi)毒素休克，且通常并發(fā)DIC。新近研究表明，炎癥與凝血之間存在網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，因此，使用抗凝物質(zhì)來防治內(nèi)毒素休克似乎是合理的［2］。

近年來，國內(nèi)外研究表明，血漿TF和TFPI的含量變化是導(dǎo)致凝血功能紊亂的重要原因之一［3］。TF是外源性凝血系統(tǒng)的啟動因子。TFPI是組織因子的天然抑制物，是TF直接的生理性抑制物，又是目前發(fā)現(xiàn)的體內(nèi)最強的生理性抗凝物質(zhì)，對于內(nèi)皮細胞的抗凝血功能非常重要［4］，在調(diào)節(jié)TF誘導(dǎo)的血栓形成中發(fā)揮重要作用。正常的血管內(nèi)皮細胞僅微量表達或不表達TF，但卻固有表達 TFPI［5，6］。這就意味著，血管內(nèi)皮正常生理狀態(tài)下以抗凝為主。當(dāng)血管內(nèi)皮細胞受損時，內(nèi)皮下細胞表面組織因子暴露于血液，外源性凝血途徑立即啟動，同時TFPI表達量也開始上升，升高的TFPI抑制TF的釋放，進而抑制外源性凝血。二者之間的失衡在血栓形成中起重要作用。因此血漿TF、TFPI以及TFPI／TF比值的測定，能反映大鼠內(nèi)毒素休克的程度。本實驗結(jié)果表明，TF在內(nèi)毒素休克時，含量急劇升高，注射PLIS對TF升高具有一定的抑制作用，雖然TFPI含量的增加不十分明顯，但TFPI／TF比值差異有統(tǒng)計學(xué)意義。因此，本實驗TFPI／TF比值可以作為反映抗凝作用的特征指標(biāo)。與模型組相比，PLIS各劑量組TFPI／TF比值顯著升高。

TNF是敗血癥發(fā)病機制中第一個被認(rèn)識的細胞因子，是細胞因子爆發(fā)的中心，可引起休克［7］。TNF是內(nèi)毒素休克早期產(chǎn)生的最主要的細胞因子。其結(jié)果提示內(nèi)毒素是誘發(fā)TNF分泌的強烈的刺激物，這與國內(nèi)外許多有關(guān)內(nèi)毒素的體內(nèi)外研究結(jié)果一致［8］。在多種因素的誘導(dǎo)下，內(nèi)皮細胞可以產(chǎn)生TNF。高濃度的TNF可以內(nèi)分泌方式作用于全身，導(dǎo)致發(fā)熱、循環(huán)衰竭、DIC等。在感染性休克、出血性休克、外傷性休克中均表現(xiàn)為TNF的增高，但程度不同［9］。注射內(nèi)毒素后，各組血漿TNF水平有所升高，以模型組升高最為顯著。PLIS可以降低TNF含量，且大劑量組TNF含量與空白組接近。本實驗通過PLIS各劑量組TNF含量測定，表明PLIS對TNF具有一定的抑制作用。

本實驗通過研究全蝎純化液對TF、TFPI及TNF的影響，表明全蝎純化液對內(nèi)毒素休克有一定的抑制作用。其作用機制可能與促進纖溶以及抗凝有關(guān)。

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