文 / 周慶民 馮萬宇 侯美如 徐 馨 秦 博 黃 健

（黑龍江省獸醫(yī)科學(xué)研究所）

奶牛隱性乳房炎是奶牛生產(chǎn)中最常見、最多發(fā)的疾病之一，給牧場帶來的經(jīng)濟損失巨大。奶牛發(fā)生隱性乳房炎時，從外觀上不能診斷，但乳汁中體細胞數(shù)量增多，因此，檢測牛乳中的體細胞數(shù)是判斷奶牛隱性乳房炎發(fā)生的主要依據(jù)。本試驗分別采用凝乳試驗反應(yīng)法和體細胞自動計數(shù)儀檢測法對牛乳體細胞數(shù)量進行檢測，并以體細胞自動計數(shù)儀檢測的牛乳體細胞數(shù)為基準，用凝乳試驗反應(yīng)法檢測的牛乳體細胞數(shù)與其對比，確定凝乳試驗反應(yīng)法檢測牛乳體細胞數(shù)的準確性。

1 材料與方法

1.1 試驗牛只

黑龍江省齊齊哈爾市郊區(qū)一大型奶牛場，選擇496 頭無乳房炎臨床癥狀的中國荷斯坦泌乳牛，年齡、胎次、體重、泌乳月、產(chǎn)奶量等不限，時間為2010年8月23日。

1.2 診斷液及體細胞自動計數(shù)儀

凝乳試驗反應(yīng)法診斷液由本研究室研制。體細胞自動計數(shù)儀為FossMatic 5000。

1.3 日糧與飼養(yǎng)管理

一切按原生產(chǎn)管理方法和飼養(yǎng)方式進行。

1.4 試驗設(shè)計與方法

取每頭牛的混合奶樣，同時用凝乳試驗反應(yīng)法和體細胞自動計數(shù)儀進行檢測，然后統(tǒng)計、對比檢測結(jié)果。

1.4.1 奶樣的采集

擦洗乳房后，每個乳頭棄去頭二把奶，然后各擠出5 mL奶，混合均勻，每頭牛的奶樣為20 mL，檢測之前低溫保存。

1.4.2 凝乳試驗反應(yīng)法

取混合奶樣2 mL放入檢驗盤中，加入2 mL診斷液（用定量加液器或刻度吸管），輕輕旋轉(zhuǎn)檢驗盤，隨著搖動進行判定（在奶與診斷液混合10～25 s內(nèi)判定），記錄判定結(jié)果。

判定標(biāo)準如下：“－”，混合物呈液狀，杯底無沉淀物可見；“±”，混合物呈液狀，杯底可出現(xiàn)微量沉淀，繼續(xù)搖晃即消失。“+”，杯底出現(xiàn)少量粘性沉淀，但不成膠狀，流動性大，搖動時，沉淀物散布于杯底，并有一定的粘附性?！?+”，杯底出現(xiàn)較多粘稠沉淀，呈膠狀，傾斜檢驗杯時，沉淀物有明顯粘附于杯底面，并難以流動，旋轉(zhuǎn)檢驗盤時，膠狀物有聚中心傾向?！?++”，混合物幾乎完全形成膠狀物，并粘附于杯底、旋轉(zhuǎn)檢驗盤時難以散開?！?+++”，混合物立即呈膠狀物，牛奶尚未與診斷液完全混合就已凝成膠狀，牛奶出現(xiàn)夾心現(xiàn)象。

1.4.3 體細胞自動計數(shù)儀檢測法

按照FossMatic 5000體細胞自動計數(shù)儀檢測方法分別對每份奶樣進行體細胞數(shù)檢測，記錄檢測結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 FossMatic 5000檢測情況

從表1可以看出，在檢測的496 頭奶牛中，體細胞數(shù)在50 萬個/mL以上的有167 頭，占33.67%。

2.2 凝乳試驗反應(yīng)法檢測情況

從表2可以看出，在檢測的496頭奶牛中，體細胞數(shù)在“+”以上的176 頭，占35.48%。

2.3 凝乳試驗反應(yīng)法檢測與FossMatic 5000檢測結(jié)果的比較

從表3可以看出，在FossMatic 5000檢測體細胞數(shù)0～49 萬個/mL的329 頭奶牛中，凝乳試驗反應(yīng)法檢測“-”或“±”的奶牛為317 頭，相符率為96.35%；FossMatic 5000檢測體細胞數(shù)在50 萬個/mL以上的167 頭奶牛中，凝乳試驗反應(yīng)法檢測一個“+”以上的奶牛為161 頭，相符率為96.41%。

從表4可以看出，體細胞數(shù)在29 萬個/mL以上，凝乳試驗無反應(yīng)，可判斷為“-”；體細胞數(shù)在30 萬～49 萬個/mL，凝乳試驗略有變化，可判斷為“±”；體細胞數(shù)在50 萬～79 萬個/mL，凝乳試驗反應(yīng)輕微，反應(yīng)緩慢，可判斷為“+”；體細胞數(shù)在80 萬～149 萬個/mL，凝乳試驗反應(yīng)明顯，反應(yīng)速度較快，可判斷為“++”；體細胞數(shù)在150 萬～499 萬個/mL，凝乳試驗反應(yīng)較重，反應(yīng)速度快，可判斷為“+++”；體細胞數(shù)在500 萬個/mL以上，凝乳試驗反應(yīng)嚴重，反應(yīng)瞬間完成，可判斷為“++++”。

表1 FossMatic 5000檢測牛乳體細胞數(shù)情況

表2 凝乳試驗反應(yīng)法檢測牛乳體細胞數(shù)情況

表3 凝乳試驗反應(yīng)法與FossMatic 5000檢測結(jié)果對比

3 討論與結(jié)論

3.1 牛奶中體細胞的主要成分是白細胞，健康乳腺奶中不同類型的體細胞百分比不同，其中巨噬細胞占60%，淋巴細胞占25%，嗜中性或多型核嗜中性白細胞占15%，國際上通常用每毫升奶中體細胞數(shù)（SCC/mL）來表示。奶牛的免疫系統(tǒng)通過釋放中性粒細胞吞噬和破壞細菌，幫助修復(fù)由于感染而受損的乳腺分泌組織，乳房感染發(fā)炎后，大量白細胞進入乳腺，部分上皮細胞脫落，使乳汁中體細胞數(shù)顯著升高，因此，在被感染的乳腺中體細胞的數(shù)量增多。本次試驗中隨著乳中體細胞數(shù)量的增加，凝乳試驗反應(yīng)程度增強，表明凝乳試驗判斷隱性乳房炎的可靠性、準確性和可行性。

3.2 正常情況下，牛奶中含體細胞數(shù)為2 萬～20 萬個/mL，國際上將每毫升50 萬個體細胞數(shù)定為乳房炎的基準。根據(jù)本試驗結(jié)果，采用FossMatic 5000檢測法，得到的隱性乳房炎診斷率是33.67%，凝乳試驗反應(yīng)法診斷率是35.48 %，兩種方法診斷率接近，差異不顯著，而且體細胞數(shù)量的變化與凝乳試驗反應(yīng)法的奶樣變化程度基本相符，都能準確地反映出奶牛隱性乳房炎的發(fā)病率。其數(shù)據(jù)的差異可能是凝乳試驗反應(yīng)法存在眼觀判斷誤差造成的。

3.3 以FossMatic 5000檢測的體細胞數(shù)為基準，凝乳試驗反應(yīng)法隱性乳房炎陰性診斷相符率為96.35%，隱性乳房炎陽性診斷相符率為96.41%，由此可以確定凝乳試驗反應(yīng)法診斷準確率在96%以上。