侯小明，元淑巧，胡俊平，趙 達(dá)，馮 穎，令曉玲

蘭州大學(xué)第一醫(yī)院，甘肅蘭州 730000 1腫瘤內(nèi)科；2病理科

肺癌是目前死亡率較高的惡性腫瘤之一，確診的肺癌中約有80%為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)。研究表明，腫瘤細(xì)胞DNA修復(fù)相關(guān)基因的異常表達(dá)與肺癌耐藥性密切相關(guān)。DNA切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1(excision repair crosscomplementation group1，ERCC1)和核苷酸還原酶M1(ribonudeotide reductuse M1，RRM1)是DNA修復(fù)密切相關(guān)的兩個(gè)基因，其在晚期非小細(xì)胞肺癌中的高表達(dá)與抗癌藥物的耐藥性相關(guān)，從而不同程度影響患者的生存期。本文回顧性研究60例NSCLC組織中ERCC1和RRM1蛋白的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系。

資料和方法

1 資料 收集2009年6月-2011年6月在蘭州大學(xué)第一醫(yī)院確診并有完整隨訪資料的晚期NSCLC患者60例，其中男性43例，女性17例；年齡32~72歲，平均52歲。60例中，鱗癌28例，細(xì)支氣管肺泡癌11例，腺癌19例，腺鱗癌2例；根據(jù)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)所有患者均為Ⅳ期，其中肝臟轉(zhuǎn)移38例，骨轉(zhuǎn)移22例；所有病例均經(jīng)病理確診。

2 主要試劑 DAB顯色試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司；ERCC1及RRM1單克隆抗體、既用型免疫組化SP試劑盒、PBS緩沖液及枸櫞酸鹽抗原修復(fù)緩沖液均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

3 方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)患者支氣管鏡或經(jīng)皮穿刺活檢組織標(biāo)本中ERCC1及RRM1的表達(dá)情況；每例選取腫瘤組織4張4μm厚的切片行HE和免疫組化SP法染色。染色步驟嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。以已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，以PBS液置換一抗作陰性對(duì)照。用低倍和高倍鏡觀察全片，ERCC1主要為細(xì)胞核染色，RRM1為細(xì)胞漿及細(xì)胞核染色；陽(yáng)性表達(dá)為黃色、棕色、棕褐色顆粒。60例均行GP(吉西他濱+順鉑)方案化療4~6周期，化療結(jié)束后進(jìn)行嚴(yán)格隨訪，統(tǒng)計(jì)1年生存率；截止2012年8月，隨訪時(shí)間為1~3年。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，組間比較應(yīng)用χ2檢驗(yàn)和Fishers精確概率法，組間的關(guān)系用Spearman等級(jí)相關(guān)分析；生存分析采用Cox回歸法；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 ERCC1、RRM1在晚期肺癌組織中的表達(dá)ERCC1在晚期NSCLC組織中均為細(xì)胞核表達(dá)(圖1)，陽(yáng)性率為45.00%(27/60)；RRM1在晚期NSCLC組織中為細(xì)胞漿及細(xì)胞核表達(dá)(圖2)。陽(yáng)性率為53.33%(32/60)。

2 ERCC1和RRM1的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系NSCLC組織中ERCC1和RRM1的表達(dá)與患者的年齡、性別、組織學(xué)類型和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)，見(jiàn)表1。

3 ERCC1、RRM1在NSCLC組織中表達(dá)的相互關(guān)系應(yīng)用Spearman相關(guān)性分析顯示，ERCC1和RRMI的表達(dá)呈正相關(guān)，Spearman相關(guān)系數(shù)為0.251，P=0.035，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 ERCC1和RRM1的表達(dá)與生存率的關(guān)系 60例晚期非小細(xì)胞肺癌患者，隨訪時(shí)間為1~3年，生存期3~27月，中位生存期13月。應(yīng)用Cox回歸模型分析， ERCC1和RRM1表達(dá)陽(yáng)性皆是獨(dú)立危險(xiǎn)因素。ERCC1及RRM1陽(yáng)性表達(dá)者1年生存率分別為25.93%及28.13%，陰性表達(dá)者1年生存率分別為36.36%及42.86%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

圖1 IHC， ERCC1在肺癌中的表達(dá) SP×400

圖2 IHC， RRM1在肺癌中的表達(dá) SP×400

表1 晚期非小細(xì)胞肺癌ERCC1和RRM1表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

表2 非小細(xì)胞肺癌組織中ERCC1及RRM1的Cox回歸分析

討 論

以鉑類藥物為基礎(chǔ)的化療在非小細(xì)胞肺癌化療中的地位無(wú)可置疑，其抗腫瘤作用主要是通過(guò)形成鉑-DNA加合物，導(dǎo)致DNA結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，進(jìn)而影響DNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及翻譯，而達(dá)到抗腫瘤作用。DNA基因修復(fù)主要是由和鏈間交聯(lián)完成的，而ERCC1是其中一個(gè)關(guān)鍵因素[1-2]，是參與NER過(guò)程并與順鉑耐藥緊密相關(guān)的關(guān)鍵因子[3]。有研究表明，在早期NSCLC患者中ERCC1陽(yáng)性表達(dá)者生存期明顯延長(zhǎng)；而在接受鉑類化療的晚期NSCLC患者中，ERCC1陰性表達(dá)者生存期較陽(yáng)性表達(dá)者明顯延長(zhǎng)[4]。ERCC1表達(dá)與化療療效呈負(fù)相關(guān)，這與ERCC1在DNA修復(fù)過(guò)程中的作用相關(guān)，更重要的是ERCC1能清除順鉑誘導(dǎo)的DNA絡(luò)合物[5]，從而降低其療效。我們發(fā)現(xiàn)，在晚期NSCLC組織中，ERCC1表達(dá)陽(yáng)性率為45.00%(27/60)，與相關(guān)報(bào)道相近[6]；1年生存率為25.93%，陰性表達(dá)者1年生存率為36.36%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

吉西他濱作用靶點(diǎn)之一的核苷酸還原酶(ribonucleotide reductase，RR)是DNA合成通路中的限速酶，它能使二磷酸核苷酸轉(zhuǎn)化為二磷酸脫氧核苷酸，后者是DNA合成和修復(fù)所必不可少的原料，其包括RRM1和RRM2兩個(gè)亞單位。有研究報(bào)道，當(dāng)吉西他濱作用于腫瘤細(xì)胞時(shí)，RRM1的表達(dá)陽(yáng)性會(huì)使腫瘤細(xì)胞對(duì)吉西他濱的耐藥性增加，患者預(yù)后較差。Ceppi等[7]對(duì)70例晚期NSCLC患者進(jìn)行回顧性研究，證實(shí)在RRM1低表達(dá)組中位生存期明顯延長(zhǎng)。也有不同的報(bào)道，廖日強(qiáng)等[8]研究顯示，RRM1的表達(dá)不能作為NSCLC的預(yù)后因子，研究?jī)H定位在對(duì)化療療效的預(yù)測(cè)上。

本研究結(jié)果表明，在晚期NSCLC組織中RRM1表達(dá)陽(yáng)性率為53.33%(32/60)，1年生存率為28.57%，陰性表達(dá)者1年生存率為41.67%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Cox回歸生存分析顯示：對(duì)于晚期非小細(xì)胞肺癌患者，ERCC1及RRM1均是獨(dú)立危險(xiǎn)因素；因此我們認(rèn)為，晚期NSCLC組織中ERCC1及RRM1的表達(dá)是具有預(yù)后評(píng)估意義的指標(biāo)。在本研究中，我們也發(fā)現(xiàn)，ERCC1和RRM1的表達(dá)呈正相關(guān)，其具體機(jī)制尚不明確。今后，還須進(jìn)行多中心、大樣本研究，以進(jìn)一步驗(yàn)證ERCC1及RRM1在晚期非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后中的意義。

1 Fisher LA， Bessho M， Bessho T. Processing of a psoralen DNA interstrand cross-link by XPF-ERCC1 complex in vitro［J］. J Biol Chem， 2008， 283（3）： 1275-1281.

2 Bergstralh DT， Sekelsky J. Interstrand crosslink repair： can XPFERCC1 be let off the hook?［J］. Trends Genet， 2008， 24（2）：70-76.

3 Gazdar AF. DNA repair and survival in lung cancer--the two faces of Janus［J］. N Engl J Med， 2007， 356（8）： 771-773.

4 Gandara DR， Kawaguchi T， Crowley J， et al. Japanese-US common-arm analysis of paclitaxel plus carboplatin in advanced non-small-cell lung Cancer： a model for assessing population-related pharmacogenomics［J］. J Clin Oncol， 2009， 27（21）： 3540-3546.

5 Ota S， Ishii G， Goto K， et al. Immunohistochemical expression of BCRP and ERCC1 in biopsy specimen predicts survival in advanced non-small-cell lung Cancer treated with cisplatin-based chemotherapy［J］. Lung Cancer， 2009， 64（1）： 98-104.

6 Azuma K， Sasada T， Kawahara A， et al. Expression of ERCC1 and class III beta-tubulin in non-small cell lung Cancer patients treated with carboplatin and paclitaxel［J］. Lung Cancer， 2009， 64（3）：326-333.

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8 廖日強(qiáng)， 林嘉穎， 喬貴賓， 等. 非小細(xì)胞肺癌組織芯片中RRM1表達(dá)和預(yù)后因子分析［J］.中國(guó)肺癌雜志， 2006， 9（5）：423-427.