徐澤鶴 明少蘭

湖北省鄂州市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 鄂州 436000

阿歸養(yǎng)血糖漿由當(dāng)歸、白芍、黃芪、甘草 (蜜炙)、川芎等九味中藥組成，具有益氣補(bǔ)血的作用，用于氣血虧虛，面色萎黃、眩暈乏力、肌肉消瘦、經(jīng)閉、赤白帶下。近年研究發(fā)現(xiàn)本品可抑制黑色素合成、清除自由基、促進(jìn)膠原蛋白合成和改善血液流變學(xué)及微循環(huán)[1]。該藥收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十二分冊(cè)，為更加有效地控制阿歸養(yǎng)血糖漿的產(chǎn)品質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)采用TCL法對(duì)阿歸養(yǎng)血糖漿中的當(dāng)歸、黃芪進(jìn)行鑒別，利用HPLC法對(duì)阿歸養(yǎng)血糖漿中的白芍進(jìn)行含量測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)所采用的鑒別和含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便易操作，所得結(jié)果令人滿意，可考慮作為該藥品的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

島津SPD－10Avp∕10AVvp;島津LC－10ATvp;島津2010色譜數(shù)據(jù)工作站;BS124S型電子天平。硅膠G(青島海洋化工廠)，乙腈為色譜純，水為純化水，其余試劑為分析純。芍藥苷 (批號(hào):110736－200933)、黃芪甲苷 (批號(hào):110781－200611)對(duì)照品和當(dāng)歸對(duì)照藥材 (批號(hào):120927－200812)均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;阿歸養(yǎng)血糖漿由湖北東信惠濟(jì)堂藥業(yè)有限公司提供 (批號(hào):20090517、20091104、20100326，規(guī)格:200mL)，各陰性對(duì)照品均由本院制劑室 (具備制劑GMP生產(chǎn)許可證)根據(jù)生產(chǎn)工藝和制備方法進(jìn)行生產(chǎn)。

2 成分鑒別

2.1 當(dāng)歸的鑒別 取本品10mL，加乙醚振搖提取3次，每次20mL，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?mL使溶解，作為供試品溶液;按處方取各藥材 (不含當(dāng)歸藥材)，照本品工藝及上述方法制成陰性對(duì)照品溶液;另取當(dāng)歸對(duì)照藥材0.5g，加乙醚15mL，超聲處理5分鐘，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法[2]試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯 (9:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈 (365nm)下檢視。通過(guò)對(duì)供試品色譜檢測(cè)，在供試產(chǎn)品中與對(duì)照產(chǎn)品色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，顯示出了與對(duì)照產(chǎn)品相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。陰性對(duì)照組顯示無(wú)干擾。

2.2 黃芪的鑒別 取阿歸養(yǎng)血糖漿20mL以水飽和正丁醇萃取3次，每次20mL，合并正丁醇，以1%氨水洗滌2次，棄去氨水，正丁醇蒸干，殘?jiān)蛹状?.5mL使溶解，作為供試品溶液;按處方取各藥材 (不含黃芪藥材)，照本品工藝及上述方法制成陰性對(duì)照品溶液;另取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法[2]試驗(yàn)，吸取供試品溶液10μL、對(duì)照品溶液5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿－甲醇－水(13:6:2)10℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液。產(chǎn)品放置在105℃加熱，直至斑點(diǎn)顯色清晰為止。結(jié)果顯示，供試品在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示出相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照組顯示無(wú)干擾。

3 含量測(cè)定

3.1 色譜條件和系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 色譜柱:Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)柱;流動(dòng)相:乙腈 －水 (15:85);流速 1.0mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng) 230nm[3－4];柱溫:30℃;進(jìn)樣量20μL，陰性對(duì)照品無(wú)干擾。理論塔板數(shù)如按照芍藥苷峰計(jì)算，其數(shù)據(jù)不低于2000。

3.2 溶液制備 對(duì)照品溶液制備:按照要求稱取干燥至恒重的芍藥苷6.1mg置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至所需刻度，充分搖勻，即可得到61μg/mL的芍藥苷溶液。供試品溶液制備:稱量5g阿歸養(yǎng)血糖漿，置于50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至所需刻度，充分搖勻，利用0.45μm濾膜過(guò)濾溶液，即得。陰性對(duì)照組溶液制備:按照要求稱取白芍，參照上述供試品的制備方法，制備陰性對(duì)照組。

3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 按照要求吸取芍藥苷對(duì)照品溶液2、4、8、12、16、20μL，分別注入色譜儀中，按照上述的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)作回歸方程分別為:Y=1028.596X+39.48，r=0.9996(n=6)，且在0.122～1.22μg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

3.4 精密度試驗(yàn) 吸取對(duì)照品芍藥苷溶液10μL，并且重復(fù)進(jìn)樣6次，按照上述的色譜條件測(cè)定峰面積，RSD=1.67%，顯示精密度良好。

3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 吸取同一批號(hào)的阿歸養(yǎng)血糖漿6份，按上述方法制備供試品溶液并進(jìn)行測(cè)定，芍藥苷的RSD=1.35%。結(jié)果表明，本試驗(yàn)所采取的方法重復(fù)性良好。

3.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 吸取同一批的供試品阿歸養(yǎng)血糖漿溶液，分別在0、1、2、4、6、8、12h進(jìn)樣20μL，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，RSD=1.78%。結(jié)果表明，本試驗(yàn)設(shè)計(jì)的供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

3.7 專屬性試驗(yàn) 取上述的陰性對(duì)照組溶液10μL，按照上述條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，陰性對(duì)照組樣品無(wú)干擾(見(jiàn)圖1)。

3.8 加樣回收試驗(yàn) 精取已測(cè)知含量 (含芍藥苷0.1628mg/mL)的同一批號(hào)的阿歸養(yǎng)血糖漿2.5g，共6份，再分別精確加入含0.1316mg/mL的芍藥苷對(duì)照品溶液3.0mL，按上述方法制成供試品溶液。按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

圖1 HPLC色譜圖

表1 芍藥苷加樣回收試驗(yàn) (N=6)

3.9 樣品的測(cè)定 分別稱取3批樣品 (批號(hào):20090517、20091104、20100326)，按上述方法制備供試品溶液。吸取20μL供試品阿歸養(yǎng)血糖漿溶液與對(duì)照品芍藥苷溶液10μL，分別依次注入色譜儀中，按照上述的色譜條件進(jìn)行測(cè)定峰面積并計(jì)算。結(jié)果標(biāo)明，阿歸養(yǎng)血糖漿中的芍藥苷含量分別為0.1628、0.1732、0.1563mg/mL.

4 討論

阿歸養(yǎng)血糖漿是屬于滋補(bǔ)性藥品，近年來(lái)又發(fā)現(xiàn)其具有美容功效[1]，是深受女性喜愛(ài)的OTC藥品之一，而其原有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不能滿足其質(zhì)量控制，有必要對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行提高。

在當(dāng)歸的薄層鑒別中，參照中國(guó)藥典 (2010版)四物合劑，陰性的制備應(yīng)同時(shí)去除川芎，考慮到本品中當(dāng)歸投料量 (257g)數(shù)十倍于川芎投料量 (8g)，在實(shí)驗(yàn)中沒(méi)有出現(xiàn)干擾現(xiàn)象，可能是在本品中，川芎的檢出限不以干擾當(dāng)歸的鑒別。所以，在陰性的制備中沒(méi)有去除川芎。

在白芍的含量測(cè)定中，樣品曾先用飽和的正丁醇溶液萃取。濃縮，蒸干，再加甲醇溶解，測(cè)定計(jì)算。結(jié)果表明，采用本方法的測(cè)量值更高，且操作方法簡(jiǎn)單，所以樣品的處理本實(shí)驗(yàn)方法。

[1]徐曉月，張廣偉，李展，等.阿歸養(yǎng)血糖漿美容作用的實(shí)驗(yàn)分析[J].河南大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，28(1):13－16.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典 (一部) [M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:649－650、附錄34－35.