王華明 沈明華 黃玉萍 任 凱 葉仁貴 何春花

（1.江蘇省揚(yáng)中市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，揚(yáng)中 212200；

2.江蘇省揚(yáng)中市農(nóng)委，揚(yáng)中 212200）

新型豬口蹄疫O型疫苗應(yīng)用效果試驗(yàn)

王華明1沈明華1黃玉萍1任 凱1葉仁貴1何春花2

（1.江蘇省揚(yáng)中市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，揚(yáng)中 212200；

2.江蘇省揚(yáng)中市農(nóng)委，揚(yáng)中 212200）

為有效防控生豬口蹄疫，我國(guó)采取了以免疫為核心的防治措施，取得了較好的效果。20世紀(jì)90年代，以口蹄疫全病毒滅活苗為主，進(jìn)入21世紀(jì)后，以濃縮苗為主。為結(jié)合揚(yáng)中市實(shí)際，制定切實(shí)有效的生豬口蹄疫免疫程序，進(jìn)一步提升生豬口蹄疫科學(xué)防治水平，2011年9月～2012年10月，我們使用O型滅活苗（O/MAY98/BY/2010株）和O型合成肽疫苗在揚(yáng)中市油坊、西來(lái)橋二個(gè)鎮(zhèn)的3個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行了分組試驗(yàn)，現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)豬

揚(yáng)中市良友畜禽養(yǎng)殖有限公司、揚(yáng)中市眾康養(yǎng)殖場(chǎng)、揚(yáng)中市西來(lái)橋鎮(zhèn)海鑫養(yǎng)殖場(chǎng)3個(gè)生豬養(yǎng)殖場(chǎng)里各選取的250頭45日齡健康仔豬。3個(gè)豬場(chǎng)試驗(yàn)豬品種均為杜×長(zhǎng)×大。

1.1.2 試驗(yàn)疫苗

豬口蹄疫O型滅活苗（O/MAY98/BY/2010株）。生產(chǎn)廠家：中農(nóng)威特生物科技股份有限公司。批號(hào)：H111268J。

豬口蹄疫O型合成肽疫苗。生產(chǎn)廠家：新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司。批號(hào)：2011028。

豬口蹄疫O型合成肽疫苗。生產(chǎn)廠家：中牧實(shí)業(yè)股份有限公司蘭州生物藥廠。批號(hào)：1111002。

1.1.3 主要儀器與試劑

酶標(biāo)儀 680型 北京元業(yè)伯樂(lè)；單道微量加樣器10～100 μl，20～200 μl；多道微量加樣器50～300 μl ，上海大龍；電熱培養(yǎng)箱 HPX-9082MBE 上海博迅；濕盆；量筒；燒杯；

豬口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)診斷試劑盒。生產(chǎn)廠家：上海優(yōu)耐特生物醫(yī)藥有限公司。批號(hào)：201012004。

豬O型口蹄疫抗體液相阻斷ELISA診斷試劑盒。生產(chǎn)廠家：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。批號(hào)：2012091901。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)豬選擇

分別在3個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)隨機(jī)選擇250頭45日齡健康仔豬作為對(duì)比試驗(yàn)對(duì)象。

1.2.2 試驗(yàn)步驟

將試驗(yàn)豬隨機(jī)平均分成2組，第1組、第2組于45日齡分別注射口蹄疫合成肽疫苗、口蹄疫試驗(yàn)滅活苗各1 ml。65日齡前腔靜脈采血5 ml，同時(shí)第1組注射口蹄疫合成肽疫苗1 ml，第2組注射試驗(yàn)滅活苗1 ml。試驗(yàn)豬85日齡時(shí)，前腔靜脈采血5 ml。血樣以3 000r/min離心20 min，吸出血清，4℃保存。選擇2012年2月27日試驗(yàn)豬作為疫苗抗體跟蹤組群，于二免后6周、9周、12周，即105日齡、130日齡、150日齡分別在前腔靜脈采血5 ml。血樣以3 000 r/min離心20 min，吸出血清，4℃保存。

1.2.3 免疫抗體檢測(cè)

口蹄疫合成肽疫苗免疫豬的抗體采用豬口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)。

口蹄疫濃縮疫苗免疫豬的抗體采用O型口蹄疫抗體液相阻斷ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)。

表1 揚(yáng)中市良友畜禽養(yǎng)殖有限公司免疫抗體

表2 揚(yáng)中市眾康養(yǎng)殖場(chǎng)免疫抗體

表3 揚(yáng)中市西來(lái)橋鎮(zhèn)海鑫養(yǎng)殖場(chǎng)免疫抗體

表4 65、85日齡免疫抗體匯總表

表5 抗體跟蹤檢測(cè)匯總表

2 結(jié)果

2.1 免疫抗體

對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物免疫抗體進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果詳見(jiàn)表1。

2.2 數(shù)據(jù)分析

首免后20 d的抗體合格率：合成肽免疫組3個(gè)點(diǎn)均為100%，滅活苗免疫組3個(gè)點(diǎn)分別為：85.6%、84.25%、86.5%，平均85.22%；加強(qiáng)免疫后20 d抗體合格率：合成肽組3個(gè)點(diǎn)均為100%，滅活苗組3個(gè)點(diǎn)分別為94.35%、94.3%、91.93%，平均95.53%。第1次、第2次免疫抗體合格率合成肽組比滅活苗組分別高14.78個(gè)百分點(diǎn)、4.47個(gè)百分點(diǎn)。水平看，合成肽苗免疫后抗體產(chǎn)生速度快，抗體合格率高，免疫效果要優(yōu)于滅活苗。因本次試驗(yàn)免疫抗體分多批檢測(cè)，試驗(yàn)中不可避免的會(huì)產(chǎn)生一定的誤差，但是對(duì)評(píng)價(jià)2種疫苗的免疫效果仍有一定的參考意義。

105、130、150日齡合成肽組抗體合格率分別為：100%、83.33%46.67%；滅活苗組分別為：90%、80%、40%；2種疫苗2次免疫后9周內(nèi)抗體合格率均保持在80%以上，2免后12周時(shí)抗體合格率低于50%。

3 討論

使用2種不同的豬口蹄疫疫苗免疫的750頭仔豬，在首免后3周內(nèi)抗體陽(yáng)性率均達(dá)到江蘇省農(nóng)委動(dòng)物防疫部門的要求（陽(yáng)性率80%以上）。其中合成肽疫苗免疫組，在免疫后3周內(nèi)抗體陽(yáng)性率為100%，滅活苗（O/MAY98/BY/2010株）免疫組，在免疫后3周內(nèi)抗體陽(yáng)性率為89.33%。2種疫苗經(jīng)過(guò)2次注射均能達(dá)到較好的效果，從免疫抗體水平看，合成肽苗免疫后抗體產(chǎn)生速度快，抗體合格率高，免疫效果要優(yōu)于滅活苗。因本次試驗(yàn)免疫抗體分多批檢測(cè)，試驗(yàn)中不可避免的會(huì)產(chǎn)生一定的誤差，但是對(duì)評(píng)價(jià)2種疫苗的免疫效果仍有一定的參考意義。2種苗免疫后12周合格率都低于50%，我們認(rèn)為第2次免疫后第10周需進(jìn)行加強(qiáng)免疫。

2種苗副反應(yīng)都很輕，養(yǎng)豬場(chǎng)（戶）容易接受，但合成肽疫苗成本較高，試驗(yàn)苗和對(duì)照的合成肽疫苗價(jià)格相差較大，合成肽疫苗沒(méi)有價(jià)格優(yōu)勢(shì)，在部分地區(qū)推廣有一定難度，如果考慮政府財(cái)政狀況我們使用的滅活苗也是很好的選擇。

限于條件我們沒(méi)有進(jìn)行攻毒試驗(yàn)。我們計(jì)劃跟有關(guān)部門合作開(kāi)展動(dòng)物攻毒試驗(yàn)，這樣將更能科學(xué)地評(píng)價(jià)2種疫苗的免疫效果。

江蘇省2011年農(nóng)業(yè)三新工程項(xiàng)目[SX（2011）183]。