王玉龍 胡仁莉

（1.江蘇省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，南京 210000；

2.江蘇省蘇州市畜牧獸醫(yī)站，蘇州 215000）

家畜口蹄疫雙價(jià)疫苗免疫效果評(píng)估

王玉龍1胡仁莉2

（1.江蘇省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，南京 210000；

2.江蘇省蘇州市畜牧獸醫(yī)站，蘇州 215000）

為了對(duì)現(xiàn)用的口蹄疫雙價(jià)苗免疫效果進(jìn)行有效評(píng)估，我們選擇了不同疫苗生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的疫苗對(duì)家畜進(jìn)行免疫，對(duì)同一疫苗生產(chǎn)廠家疫苗選擇不同劑量免疫，并用不同檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)?，F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)比較結(jié)果報(bào)告如下：

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

蘇州市種羊場(chǎng)提供的湖羊和蘇州云蘭牧場(chǎng)提供的奶牛。

1.2 疫苗

由中農(nóng)威特生物科技股份有限公司和中牧股份有限公司提供。

1.3 檢測(cè)試劑

檢測(cè)試劑由蘭州獸醫(yī)研究所提供；實(shí)驗(yàn)操作和結(jié)果判定按說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。

1.4 分組方法及免疫劑量

試驗(yàn)湖羊和奶牛均隨機(jī)分成2組，首次免疫分別按廠家推薦劑量和加倍量進(jìn)行免疫。

1.5 不同廠家生產(chǎn)的疫苗免疫效果比較

另各選取湖羊和奶牛用中牧股份生產(chǎn)的疫苗進(jìn)行免疫，并跟蹤監(jiān)測(cè)抗體水平，對(duì)使用兩個(gè)生產(chǎn)廠家的疫苗的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，進(jìn)行平行對(duì)比試驗(yàn)。

1.6 不同檢測(cè)方法檢測(cè)抗體的相關(guān)性比較

隨機(jī)選取了湖羊和奶牛血清樣品進(jìn)行兩種不同的抗體檢測(cè)方法的相關(guān)性比較。以正向間接血凝試驗(yàn)（HA）為基礎(chǔ)，HA檢測(cè)為陽(yáng)性的樣本中液相阻斷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（LB-ELISA）的陽(yáng)性檢出率為二者的陽(yáng)性符合率，HA檢測(cè)為陰性的樣本中LBELISA方法的陰性檢出率為二者的陰性檢出率，兩種方法檢測(cè)同為陽(yáng)性或陰性的血清樣本占檢測(cè)總樣本的比率為二者的總體符合率。

2 結(jié)果與分析

2.1 湖羊分組后按正常推薦劑量和加倍劑量免疫的抗體消長(zhǎng)結(jié)果

湖羊以推薦劑量和加倍劑量免疫后通過(guò)LB-ELISA檢測(cè)O型口蹄疫抗體的OD值，以50%的阻斷計(jì)算效價(jià)。

2.1.1 羔羊首免后分兩組免疫后抗體消長(zhǎng)情況檢測(cè)結(jié)果，詳見(jiàn)表1、表2。平均滴度 239 677 648 487 277 132合格率（%） 72.6 100 100 96.8 88.7 73.2

表1 羔羊推薦計(jì)量首免后O型抗體檢測(cè)結(jié)果（1∶X）

表2 羔羊加倍劑量首免后O型抗體檢測(cè)結(jié)果（1∶X）

2.1.2 犢牛首免后分兩組免疫后抗體消長(zhǎng)情況檢測(cè)結(jié)果，詳見(jiàn)表3、表4。

表3 犢牛推薦計(jì)量首免后O型抗體檢測(cè)結(jié)果（1∶X）

表4 犢牛加倍劑量首免后O型抗體檢測(cè)結(jié)果（1∶X）

2.2 不同疫苗生產(chǎn)廠家疫苗免疫后的O型口蹄疫抗體消長(zhǎng)結(jié)果

中牧股份生產(chǎn)的疫苗免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果如下，中農(nóng)威特生物股份有限公司生產(chǎn)的疫苗抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果見(jiàn)結(jié)果2.1。

2.2.1 湖羊血清樣品通過(guò)LB-ELISA檢測(cè)O型口蹄疫抗體的OD值，以50%的阻斷計(jì)算效價(jià)。

2.2.1.1 羔羊母源抗體消長(zhǎng)情況檢測(cè)結(jié)果，詳見(jiàn)表5。

表5 羔羊口蹄疫O型母源抗體檢測(cè)結(jié)果（1∶X）

2.2.1.2 羔羊中牧股份生產(chǎn)疫苗首免后抗體消長(zhǎng)情況檢測(cè)結(jié)果，詳見(jiàn)表6。

表6 羔羊口蹄疫O型首免后抗體檢測(cè)結(jié)果（1∶X）

2.2.1.3 羔羊中牧股份生產(chǎn)疫苗二免后抗體消長(zhǎng)情況檢測(cè)結(jié)果，詳見(jiàn)表7。

表7 羔羊口蹄疫O型二免后抗體檢測(cè)結(jié)果（1∶X）

2.2.2 奶牛血清樣品通過(guò)LB-ELISA檢測(cè)O型口蹄疫抗體的OD值，以50%的阻斷計(jì)算效價(jià)。

2.2.2.1 犢牛母源抗體消長(zhǎng)情況檢測(cè)結(jié)果，見(jiàn)表8。

表8 犢?？谔阋逴型母源抗體檢測(cè)結(jié)果（1：X）

2.2.2.2 犢牛中牧股份生產(chǎn)疫苗首免后抗體消長(zhǎng)情況檢測(cè)結(jié)果，見(jiàn)表9。

表9 犢?？谔阋逴型首免后抗體檢測(cè)結(jié)果（1：X）

2.2.2.3 犢牛中牧股份生產(chǎn)疫苗二免后抗體消長(zhǎng)情況檢測(cè)結(jié)果，見(jiàn)表10。

表10 犢?？谔阋逴型二免后抗體檢測(cè)結(jié)果（1∶X）

2.3 LB-ELISA和HA方法的檢測(cè)符合率

2.3.1 兩種方法檢測(cè)湖羊O型口蹄疫抗體的檢測(cè)符合率 詳見(jiàn)表11。表中可見(jiàn)LB-ELISA和HA兩種方法對(duì)所有檢測(cè)血清樣品的陽(yáng)性符合率為77.1%，陰性符合率為61.8%，陰陽(yáng)性符合率為74.5%。

表11 LB-ELISA和HA方法的檢測(cè)湖羊O型口蹄疫抗體符合率分析結(jié)果

2.3.2 兩種方法檢測(cè)奶牛O型口蹄疫抗體的檢測(cè)符合率 詳見(jiàn)表12。表中可見(jiàn)LB-ELISA和HA兩種方法對(duì)所有檢測(cè)血清樣品的陽(yáng)性符合率為75.8%，陰性符合率為65.1%，總符合率為73.5%。

表12 LB-ELISA和HA方法的檢測(cè)奶牛O型口蹄疫抗體符合率分析結(jié)果

3 討論

3.1 從上面的結(jié)果中可以看出，加倍劑量免疫的抗體水平比正常推薦劑量的抗體水平稍高，換算成平均滴度的話，平均高1～2個(gè)滴度水平，并不存在特別高的抗體水平的差異[1～2]，因此，我們?cè)谶M(jìn)行免疫時(shí)還是建議采用廠家推薦的劑量進(jìn)行。

3.2 在本試驗(yàn)過(guò)程中，我們也進(jìn)行了不同廠家疫苗的比較性試驗(yàn)，從試驗(yàn)結(jié)果我們可看出，這兩家廠家生產(chǎn)的疫苗的免疫效果也不存在顯著差異，因?yàn)槲覀冊(cè)囼?yàn)所用的疫苗均為我國(guó)正規(guī)廠家所生產(chǎn)的，有合格的生產(chǎn)批號(hào)，從一定程度上也可說(shuō)明我國(guó)正規(guī)廠家生產(chǎn)的疫苗還是可以信賴的，但由于本試驗(yàn)時(shí)間及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限所以我們只是做了兩個(gè)生產(chǎn)廠家的疫苗進(jìn)行了比較，要想得出這種結(jié)論還需進(jìn)一步的試驗(yàn)證明。

3.3 本試驗(yàn)中，我們還采用了LB-ELISA和HA兩種檢測(cè)方法進(jìn)行了相關(guān)性的比較，從比較的結(jié)果可以看出這兩種方法在檢測(cè)O型口蹄疫抗體中還是存在一定的相關(guān)性的，其中有一部分的檢測(cè)差異可能的原因有：首先，HA試驗(yàn)本身就有假陽(yáng)性的非特異性反應(yīng)存在，而LB-ELISA是比HA更敏感、特異性更強(qiáng)的試驗(yàn)方法；其次，這兩種方法所檢測(cè)的口蹄疫抗體不同，HA檢測(cè)的主要是口蹄疫病毒的全抗體，而LB-ELISA檢測(cè)的是口蹄疫病毒的中和抗體，兩種方法相比LB-ELISA可能更有助于真實(shí)反映機(jī)體的全部免疫應(yīng)答效果。

3.4 由于本試驗(yàn)中所需要的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量太大，所以在不同劑量分組免疫試驗(yàn)、不同廠家疫苗的平行對(duì)比試驗(yàn)中，我們對(duì)原來(lái)設(shè)計(jì)的試驗(yàn)方案要求稍做了改變，但改動(dòng)后我們所采用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物樣本數(shù)完全符合統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[3]，可能對(duì)試驗(yàn)結(jié)果存在一些影響，但這并不影響我們對(duì)現(xiàn)用口蹄疫雙價(jià)苗免疫效果的評(píng)估。

[1] 萬(wàn)莉，郭鎖鏈，昌尚民，等.家畜口蹄疫疫苗免疫效果的觀察及注苗反應(yīng)淺析[J].內(nèi)蒙古畜牧科學(xué)，2002，（2）：29-30.

[2] 潘鑫，詹松鶴，江定豐，等.家畜免疫O型口蹄疫普通滅活疫苗后的應(yīng)激反應(yīng)及抗體變化[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2006，36（S1）：5-10.

[3] 楊永欽，李 樂(lè).口蹄疫病毒滅活的研究[J].中國(guó)畜禽傳染病學(xué)，1995，（2）：32-34.