郭明衛(wèi)，陳麗敏

(1、沙河市人民醫(yī)院檢驗科，河北 沙河 054100；2、邢臺縣中心醫(yī)院檢驗科，河北 邢臺054000)

生物參考區(qū)間是解釋分析檢驗結(jié)果的依據(jù)和程度[1]，由于孕婦體內(nèi)一系列的特殊生理性變化，正常人群的血清胱抑素C(CysC)生物參考區(qū)間能否沿用正常人生物參考區(qū)間有待驗證。根據(jù)ISO15189：2003《醫(yī)學(xué)實驗室-質(zhì)量和能力的專用要求》，實驗室必須建立自己的生物參考區(qū)間并定期評審，以確保依據(jù)的生物參考區(qū)間的有效性。我們結(jié)合ISO15189條款要求和已有的推薦方法[2]，驗證并探討該人群生物參考區(qū)間，以保證生物參考區(qū)間的可靠選用。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 2012年6月1日至2012年12月31日來我院門診檢查的健康孕婦，年齡23~37歲，平均為26.3歲。將健康孕婦分為3組，孕1~12周為早期妊娠組，孕13~27周為中期妊娠組，孕38周以上為晚期妊娠組，排除高血壓、糖尿病等其他疾病，且肝功能、腎功能無異常，尿蛋白陰性。

1.2 標(biāo)本采集 對入選的參考個體按《檢驗標(biāo)本采集手冊》抽取孕婦靜脈血3~4ml于促凝管中(湖南安信醫(yī)用高分子材料有限公司生產(chǎn))，及時送檢分離血清，標(biāo)本要求無溶血、無脂血，于標(biāo)本采集2h內(nèi)檢測完畢。

1.3 儀器 長春迪瑞CS800全自動生化分析儀，試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品由北京華宇億康生物工程技術(shù)有限公司提供。操作過程嚴(yán)格遵守SOP文件，操作人員固定，儀器運轉(zhuǎn)狀態(tài)良好，試劑在有效期內(nèi)使用。

1.4 方法

1.4.1 驗證條件的確定 本文選擇孕婦妊娠早、中和晚期，參照NCCLS C28-42推薦方法對血清CysC進行驗證。

1.4.2 對生物參考區(qū)間的驗證 分別收集各期孕婦血清標(biāo)本40份，在經(jīng)過性能評價驗證可靠的檢測系統(tǒng)上檢測，檢測結(jié)果95%(38名)內(nèi)落在現(xiàn)用的參考區(qū)間內(nèi)，判定現(xiàn)用生物參考區(qū)間有效。若試驗數(shù)據(jù)有3名或3名以上的檢測結(jié)果落在參考現(xiàn)用的生物參考區(qū)間外，先檢查檢測系統(tǒng)性能、檢測程序是否正確，之后考慮該項目是否具有人群生物特性，再進一步調(diào)查。重新收集120名健康參考個體，進行測定，檢測結(jié)果先做離群點的判斷，數(shù)據(jù)中的疑似離群點的判斷：將疑似離群點和其相鄰點的差值(D)和全距(R)相除，D/R應(yīng)≦1/3,＞1/3考慮為離群點。若有2個或以上疑似離群點，將最小的疑似離群點如上處理，若＞1/3則所有點都刪去，若≦1/3則保留所有數(shù)據(jù)，若有離群點被刪除后應(yīng)立即將其他數(shù)據(jù)補上[2]。

1.4.3 檢測系統(tǒng)/方法準(zhǔn)備 參考區(qū)間驗證前需掌握檢測系統(tǒng)的性能和使用的檢測方法，對檢測系統(tǒng)/方法分析性能進行有效驗證和評價，確保實驗室檢測系統(tǒng)性能的關(guān)鍵指標(biāo)如不精密度和不準(zhǔn)確度的評價方法和可接受標(biāo)準(zhǔn)，確保檢測系統(tǒng)/方法準(zhǔn)確穩(wěn)定。檢測系統(tǒng)采用配套的質(zhì)控，并且在檢測系統(tǒng)在控的狀態(tài)下檢測試驗標(biāo)本，記錄試驗數(shù)據(jù)，保證驗證項目結(jié)果的可靠。

2 結(jié)果

本文檢測的孕婦妊娠早、中和晚期CysC生物參考區(qū)間驗證結(jié)果見表1。

表1 妊娠婦女妊娠早、中和晚期CysC生物參考區(qū)間驗證結(jié)果

3 討論

CysC是一種含120個氨基酸殘基多肽鏈的低分子非糖基化堿性蛋白。人體幾乎所有的有核細(xì)胞均可持續(xù)合成，并分泌到細(xì)胞外液如血液、精液和腦脊液[3]。在正常情況下CysC產(chǎn)生比較恒定，且不受年齡、性別和肌肉的影響[4]。文獻(xiàn)報道，CysC在檢測腎小球濾過率(GFR)方面有更高的敏感性和特異性，有可能取代血清肌酐(SCr)和肌酐清除率(CCr)成為常規(guī)指標(biāo)，臨床上已廣泛用于各類高血壓、糖尿病等腎臟損害的早期診斷。近年來有研究表明，CysC是反映妊娠婦女腎臟功能的良好指標(biāo)[5]，故驗證妊娠婦女各期的正常參考區(qū)間十分必要。

本文顯示，孕婦妊娠早、中期的生物參考區(qū)間不適用于現(xiàn)用生物參考區(qū)間，經(jīng)驗證其參考區(qū)間分別為(0.63±0.21)mg/L 和(0.66±0.24)mg/L,妊娠晚期的生物參考區(qū)間適用于現(xiàn)用參考區(qū)間，各期檢驗結(jié)果低于鄒海瑞等[6]報告，可能與檢測系統(tǒng)不一致有關(guān)，但與其比較，各期檢驗結(jié)果分布趨勢基本一致。正常孕婦外周血容量顯著增加，腎小球產(chǎn)生高灌注，腎小球維持在較高的水平，Davision等[7]報道妊娠婦女腎小球濾過率較非妊娠期增加50%，在孕早期即出現(xiàn)，持續(xù)到孕6個月。本文顯示，部分孕婦妊娠早期血中CysC濃度低于現(xiàn)用生物參考區(qū)間，并一直持續(xù)到中期都維持在較低濃度，證實了腎小球濾過率在此間的變化。但到晚期CysC接近于現(xiàn)用參考區(qū)間，可能是妊娠晚期基礎(chǔ)代謝率較妊娠早中期增高，CysC生成增多，提示在妊娠晚期，孕周已不再是影響腎小球濾過率的因素[8]。

本文驗證表明，在對妊娠婦女檢查CysC時應(yīng)考慮其特殊的生理變化。臨床醫(yī)師應(yīng)熟練了解和掌握妊娠婦女不同時期的生物參考區(qū)間，對鑒別診斷孕產(chǎn)婦是否患有腎臟疾病及病理妊娠非常必要。

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[2]陳桂山,楊有業(yè)，梁錦勝，等.臨床醫(yī)學(xué)生物實驗室生物參考區(qū)間的建立[J].檢驗醫(yī)學(xué)，2008,23(4):421-424.

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[4]Filler G,Bokenkamp A,Hofmana W,et al.Cystatin C as a marker of GFR-history,indications and future research[J].Clin Biochem,2005,38(1):1-8.

[5]陳淑芹,徐瑋，李愷，等.血清胱抑素C測定用于孕婦腎功能監(jiān)測的探討[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2009,19(10):2353-2354.

[6]鄒海瑞,覃冠德.血清胱抑素C在妊娠期生理變化的驗證性研究[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2012,30(6):603-605.

[7]Davison JM.Kidney function in pregnant women[J].Am J Kidney Dis,1987,9(4):248-252.

[8]鄢斌.血清胱抑素C在早、中、晚各期妊娠中水平調(diào)查[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2009,17(8):47.