聶益軍，吳紅

(1、南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 南昌330006；2、江西省血液中心，江西 南昌330077)

血清抗體鑒定是臨床輸血前一項(xiàng)重要的檢測工作。血清抗體通常采用聚凝胺法和間接抗人球法檢測，間接抗人球法是經(jīng)典的IgG抗體檢測方法，但由于耗時(shí)較長(約1h)，在緊急情況下，采用此方法易耽誤病人的診斷與治療，LIM間接抗人球法檢測血清IgG抗體可大大縮短檢測時(shí)間。為了對(duì)上述3種檢測方法進(jìn)行評(píng)判，我們實(shí)驗(yàn)室特將聚凝胺法、間接抗人球法、LIM間接抗人球法進(jìn)行比較，分析評(píng)價(jià)這3種方法的優(yōu)缺點(diǎn)。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 選取本院已確定的抗-D、抗-E及抗-Tja(效價(jià)分別為 1：4、1：16、1：32)3 種抗體。 3 種抗體分別來自：⑴抗-D抗體—孕期為16周的孕婦，有1次生育史及1次流產(chǎn)史；⑵抗-E抗體—患地中海貧血的6歲男孩，有多次輸血史；⑶抗-Tja抗體—有一次流產(chǎn)史的女性。

1.2 試劑與儀器 儀器：離心機(jī)KA-2200(日本)、電熱恒溫水浴箱(廣東汕頭)。試劑均由上海血液生物醫(yī)藥有限公司提供：抗人球蛋白試劑 (批號(hào)為20130116)；譜細(xì)胞(批號(hào)為 20130419)；改良凝聚胺試劑盒(批號(hào)為20121212)。

1.3 方法 將抗-D、抗-E及抗-Tja血清分別倍比稀釋至第8管，每管加入含相應(yīng)抗原的2%~3%的紅細(xì)胞懸液，分別采用聚凝胺法、間接抗人球法和LIM間接抗人球法3種方法進(jìn)行檢測[1]。將各種稀釋的抗血清做血清抗體鑒定試驗(yàn)。

2 結(jié)果

觀察能檢出最后1+的凝集強(qiáng)度為標(biāo)準(zhǔn)的稀釋管號(hào)為判定結(jié)果，即后一管則達(dá)不到1+的凝集強(qiáng)度。結(jié)果見表1。

表1 稀釋后的抗體鑒定結(jié)果

3 討論

血清抗體分為完全抗體(IgM類)和不完全抗體(IgG類)，其中完全抗體多為天然產(chǎn)生的，而不完全抗體多為免疫抗體，通常由輸血和妊娠免疫刺激產(chǎn)生[2]，本次調(diào)查的含有血清抗體的人群也均有妊娠史或輸血史(見材料1.1)。不完全抗體(IgG類)檢測方法常用酶法、間接抗人球蛋白試驗(yàn)、聚凝胺法和微柱凝膠技術(shù)等。由于酶法檢測抗體時(shí)必須要考慮不同的酶對(duì)不同血型系統(tǒng)的影響不盡相同甚至是迥然不同[3]，所以在臨床一般是針對(duì)性的應(yīng)用。微柱凝膠技術(shù)靈敏性較高，但所需儀器設(shè)備及檢測費(fèi)用較高，不適宜在基層醫(yī)院開展應(yīng)用。臨床上較為常用的檢測IgG類抗體的方法是聚凝胺法和間接抗人球法。

凝聚胺(Polybrene)是帶有正電荷的大分子物質(zhì)，能夠中和紅細(xì)胞膜唾液酸組成的負(fù)電荷，減少細(xì)胞間靜電斥力，使細(xì)胞間距縮短，離心后可見凝集反應(yīng)，非特異性的凝集可被帶負(fù)電荷的重懸液(枸櫞酸鈉)消除，而特異性的抗體引起的免疫性凝集則不會(huì)散開。聚凝胺法具有操作簡便、快速、易推廣的特點(diǎn)。從表1可以看出，凝聚胺法的靈敏度較高，相對(duì)間接抗人球法而言平均高出2個(gè)滴度(2管)[4]，可應(yīng)用于效價(jià)較低的抗體檢測。但由于聚凝胺法在判定結(jié)果時(shí)需要反向觀察，即從凝集塊輕輕搖動(dòng)直至其散開，判讀結(jié)果時(shí)對(duì)結(jié)果的凝集程度不易把控，而且按要求在1min內(nèi)觀察，對(duì)于臨界時(shí)間也不易判斷結(jié)果。因此聚凝胺法在判定結(jié)果時(shí)受主觀因素的影響較大，結(jié)果的準(zhǔn)確性方面不及間接抗人球法客觀。

臨床常用的不規(guī)則抗體篩查技術(shù)中抗人球蛋白法被認(rèn)為是理論上最明確、最準(zhǔn)確的方法，是檢測血清中IgG類不規(guī)則抗體的金標(biāo)準(zhǔn)，在與聚凝胺法結(jié)果存在不一致時(shí)，通常以間接抗人球法為準(zhǔn)[1]。但由于費(fèi)時(shí)，在時(shí)間緊迫或臨床搶救時(shí)其臨床運(yùn)用受限。在間接抗人球法的基礎(chǔ)上加上LIM使試驗(yàn)方法更加敏感。利用低離子強(qiáng)度溶液降低離子強(qiáng)度，加速分子運(yùn)動(dòng)，減弱紅細(xì)胞靜電斥力，減少紅細(xì)胞周圍的陽離子云，縮短紅細(xì)胞間距，從而促進(jìn)血清 (漿)中的抗體與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合，37℃孵育時(shí)間大大縮短 (從30min減少至10min)，檢測結(jié)果與經(jīng)典的間接抗人球蛋白法完全一致，見表1。因此在通常情況下采用LIM間接抗人球法可以替代間接抗人球法。由于采用LIM間接抗人球法時(shí)需要等比例加入LIM溶液，因此在有些試驗(yàn)中難以實(shí)現(xiàn)LIM溶液與血清等體積時(shí)，建議不采用此種方法進(jìn)行試驗(yàn)，如抗體鑒定檢測(血清在不斷稀釋)，ABO放散液檢測(放散液的體積隨紅細(xì)胞的量而改變)。

[1]胡麗華.臨床輸血學(xué)檢驗(yàn)[M].第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2012:47-53.

[2]劉福昌,陳火玲,王小紅.聚凝胺法篩選和鑒定不規(guī)則抗體的應(yīng)用[J].江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn),2005,22(2):176-177.

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[4]陳和平,向東,朱俊,等.改良聚凝胺方法對(duì)4份弱抗體特異性的檢測[J].中國輸血雜志,2001,14(3):158-159.