朱紅勝，胡紅心，劉萊，陸惲，張劍峰

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州市立醫(yī)院東區(qū)檢驗(yàn)科，江蘇 蘇州215001)

髄系來(lái)源抑制細(xì)胞(myeloid-derived suppressor cells，MDSCs)于上世紀(jì)80年代初被發(fā)現(xiàn)，是一群缺乏淋巴細(xì)胞標(biāo)志，具有多向分化潛能和免疫抑制功能的異質(zhì)性細(xì)胞。多種研究表明腫瘤患者外周血及腫瘤組織存在MDSCs的大量擴(kuò)增，MDSCs可以通過(guò)多種途徑抑制機(jī)體的獲得性和天然抗腫瘤免疫，逃避免疫系統(tǒng)監(jiān)視，促進(jìn)腫瘤發(fā)展。本文通過(guò)流式細(xì)胞分析術(shù)檢測(cè)胃腸道腫瘤患者外周血MDSCs的變化，探討MDSCs的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 2012年5月至2013年2月蘇州市立醫(yī)院東區(qū)腫瘤外科新診斷的未經(jīng)任何放、化療及手術(shù)處理的59例胃腸道腫瘤患者，其中男性30例(30~80歲，平均62歲)，女性29例(27~75歲，平均58歲)。胃癌37例，腸癌22例，惡性腫瘤繼發(fā)轉(zhuǎn)移13例，同時(shí)患有高血壓、糖尿病者19例。20例健康對(duì)照來(lái)自本院體檢科，22~50歲，平均36歲。

1.2 儀器和主要試劑 流式細(xì)胞儀FACSCalibur，購(gòu)于美國(guó)BD公司。熒光素標(biāo)記的抗體：PE標(biāo)記的抗人CD33，APC標(biāo)記的抗人 CD11b，PERCP標(biāo)記的抗人HLA-DR，F(xiàn)ITC標(biāo)記的抗人Lin1，以及配套的固定液和溶血試劑等，均購(gòu)于美國(guó)BD公司。

1.3 流式細(xì)胞儀分析 取EDTA-K2抗凝靜脈血100μl，分別加入四種單克隆抗體，分別為L(zhǎng)in1 20 μl，HLA-DR 20μl ， CD33 20μl ，CD11b 5μl ，同時(shí)設(shè)同型對(duì)照。室溫避光反應(yīng)15min后，加入溶血?jiǎng)?1.5ml避光反應(yīng) 12min，1500r/min離心 5min，去上清，300μl冷PBS重懸，流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。所有計(jì)量資料用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 健康對(duì)照和消化道腫瘤患者外周血中MDSCs表達(dá)比較 健康對(duì)照和消化道腫瘤患者外周血中均有MDSCs的表達(dá)(見(jiàn)圖1、表1)，且差異明顯。胃腸道惡性腫瘤患者的MDSCs百分比為 (3.99±1.24)%，明顯高于健康人群(1.81±0.74，P<0.01)；同時(shí)通過(guò)公式 (MDSCs的百分比×WBC總數(shù))計(jì)算MDSCs的相對(duì)數(shù)量，WBC總數(shù)由貝克曼血細(xì)胞分析儀LH-750常規(guī)檢測(cè)所得。健康對(duì)照MDSCs(141.38±56.3/μl) 和腫瘤患者 (272.38±72.3/μl，P<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 MDSCs在健康對(duì)照和腫瘤患者外周血中表達(dá)的流式結(jié)果

2.2 腫瘤轉(zhuǎn)移的病人和非轉(zhuǎn)移腫瘤病人的比較伴腫瘤轉(zhuǎn)移者 (5.34±1.54)%和非轉(zhuǎn)移腫瘤患者(3.71±1.46)%比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；胃腸道腫瘤伴繼發(fā)轉(zhuǎn)移者(423.76±105.3/μl)和非轉(zhuǎn)移腫瘤患者(272.38±72.3/μl)相比，有明顯差異(P<0.01)。

表1 健康對(duì)照和腫瘤病人MDSCs檢測(cè)結(jié)果

2.3 胃癌和腸癌患者M(jìn)DSCs的比較 胃癌患者M(jìn)DSCs(3.57±1.59)%和腸癌(4.31±1.71)%相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P>0.05);兩者細(xì)胞數(shù)量 (胃癌241.38±75.1/μl，腸癌 289.71±96.3/μl，P>0.05)差異不明顯。2.4腫瘤患者伴有高血壓、糖尿病和一般腫瘤患者比較 腫瘤患者伴有高血壓、糖尿病(3.62±1.16)%和一般腫瘤患者(3.99±1.24)%比較，無(wú)明顯差異(P>0.05)。

3 討論

近年來(lái)研究表明，MDSCs可通過(guò)多種途徑逃避免疫系統(tǒng)監(jiān)視，促進(jìn)腫瘤發(fā)展。但由于MDSCs缺乏特異性淋巴系標(biāo)志，給研究和鑒別帶來(lái)了較大的難度。

不同組織來(lái)源的腫瘤中發(fā)現(xiàn)了不同表型特征的 MDSCs[1，2]；不同標(biāo)志的 MDSCs在外周血中的表達(dá)量差異也很大[3,4]。目前越來(lái)越多的研究?jī)A向于，MDSCs表達(dá)髓系共同標(biāo)志CD33和髓系抗原CD11b，但不表達(dá)MHCⅡ類(lèi)分子HLA-DR及成熟髓系和淋巴系細(xì)胞的標(biāo)記[2]，因此，在本文中，MDSCs的 表 型 定 義 為 (Lin1-/Lo，HLA DR-，CD33+，CD11b+)。

在本研究中，消化道腫瘤患者外周血中MDSCs的比例和數(shù)量均明顯增高，且出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的患者M(jìn)DSCs增高更明顯，說(shuō)明MDSCs和胃腸道惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移有一定的關(guān)系。不同腫瘤類(lèi)型的患者外周血中MDSCs無(wú)明顯差異，說(shuō)明MDSCs在不同組織來(lái)源腫瘤中的表達(dá)不具有特異性?；颊哂谢A(chǔ)疾病(如高血壓、糖尿病)的腫瘤病人和一般腫瘤患者比較無(wú)明顯差異，表明高血壓、糖尿病等基礎(chǔ)疾病對(duì)MDSCs在影響腫瘤發(fā)生發(fā)展方面無(wú)明顯影響。

MDSCs只有在誘導(dǎo)活化后才能發(fā)揮免疫抑制作用。在機(jī)體發(fā)生細(xì)菌、病毒等感染，以及慢性炎癥和腫瘤時(shí)，慢性炎癥相關(guān)的因子(如PGE、SCF、M-CSF、IL-6等)和腫瘤細(xì)胞及腫瘤基質(zhì)細(xì)胞分泌的因子(如 IFN-γ、IL-4、IL-13 和 TGF-β 等)會(huì)誘導(dǎo)活化MDSCs，通過(guò)多種途徑抑制抗腫瘤免疫應(yīng)答，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)[5,6]。MDSCs可通過(guò)影響精氨酸代謝[7]和半胱氨酸的代謝[8]，抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的特異性抗腫瘤免疫。MDSCs還可通過(guò)膜型TGFβ1抑制NK細(xì)胞受體NKG2D的表達(dá)和IFN-γ的產(chǎn)生，抑制NK細(xì)胞介導(dǎo)的天然抗腫瘤免疫[9]。 (下轉(zhuǎn)第558頁(yè))脈血?dú)怆娊赓|(zhì)Na+、K+結(jié)果和靜脈血電解質(zhì)結(jié)果正相關(guān)，而Ca2+卻無(wú)明顯相關(guān)性，動(dòng)靜脈血Na+、K+相關(guān)度R分別為0.940，0.930，即動(dòng)脈血結(jié)果高和低在總體趨勢(shì)上和靜脈血是一致的，進(jìn)一步的回歸分析顯示兩者檢測(cè)結(jié)果存在線(xiàn)性關(guān)系，其關(guān)系可以用具體公式表達(dá)出來(lái)，靜脈血Na+(mmol/L)=1.04×動(dòng)脈血 Na++0.170，靜脈血 K+(mmol/L)=1.083×動(dòng)脈血K++0.360。與上述Budak YU 等[6]，Lee YJ等[7]研究結(jié)果一致。

因此在臨床上不可以直接用動(dòng)脈血?dú)夥治龅碾娊赓|(zhì)結(jié)果判斷患者有無(wú)電解質(zhì)紊亂，但可以通過(guò)動(dòng)靜脈血電解質(zhì)結(jié)果快速和較準(zhǔn)確判斷出患者是否存在電解質(zhì)失衡，對(duì)于指導(dǎo)臨床搶救和診治有重要意義。由于動(dòng)脈血?dú)夥治鰞x器型號(hào)多樣，所用的肝素抗凝劑種類(lèi)和計(jì)量不一致，所以檢測(cè)出的結(jié)果也不一定完全相同，另外本研究也存在一些局限性，首先樣本量較小，難免發(fā)生機(jī)遇偏倚和誤差增加的情況；另外，由于采用單中心研究，納入病例均為本院住院部患者，這使得本研究人群分布不均，可能存在選擇性偏倚。據(jù)此做出的回歸方程對(duì)于判斷可能有一定差異。仍需多中心、大樣本的隨機(jī)對(duì)照研究進(jìn)一步加以驗(yàn)證。

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