朱紅勝，胡紅心，劉萊，陸惲，張劍峰

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州市立醫(yī)院東區(qū)檢驗科，江蘇 蘇州215001)

髄系來源抑制細胞(myeloid-derived suppressor cells，MDSCs)于上世紀80年代初被發(fā)現(xiàn)，是一群缺乏淋巴細胞標志，具有多向分化潛能和免疫抑制功能的異質(zhì)性細胞。多種研究表明腫瘤患者外周血及腫瘤組織存在MDSCs的大量擴增，MDSCs可以通過多種途徑抑制機體的獲得性和天然抗腫瘤免疫，逃避免疫系統(tǒng)監(jiān)視，促進腫瘤發(fā)展。本文通過流式細胞分析術(shù)檢測胃腸道腫瘤患者外周血MDSCs的變化，探討MDSCs的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 研究對象 2012年5月至2013年2月蘇州市立醫(yī)院東區(qū)腫瘤外科新診斷的未經(jīng)任何放、化療及手術(shù)處理的59例胃腸道腫瘤患者，其中男性30例(30~80歲，平均62歲)，女性29例(27~75歲，平均58歲)。胃癌37例，腸癌22例，惡性腫瘤繼發(fā)轉(zhuǎn)移13例，同時患有高血壓、糖尿病者19例。20例健康對照來自本院體檢科，22~50歲，平均36歲。

1.2 儀器和主要試劑 流式細胞儀FACSCalibur，購于美國BD公司。熒光素標記的抗體：PE標記的抗人CD33，APC標記的抗人 CD11b，PERCP標記的抗人HLA-DR，F(xiàn)ITC標記的抗人Lin1，以及配套的固定液和溶血試劑等，均購于美國BD公司。

1.3 流式細胞儀分析 取EDTA-K2抗凝靜脈血100μl，分別加入四種單克隆抗體，分別為Lin1 20 μl，HLA-DR 20μl ， CD33 20μl ，CD11b 5μl ，同時設(shè)同型對照。室溫避光反應(yīng)15min后，加入溶血劑 1.5ml避光反應(yīng) 12min，1500r/min離心 5min，去上清，300μl冷PBS重懸，流式細胞分析儀檢測。1.4統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析。所有計量資料用平均數(shù)±標準差(x±s)表示，兩組間比較采用t檢驗，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 健康對照和消化道腫瘤患者外周血中MDSCs表達比較 健康對照和消化道腫瘤患者外周血中均有MDSCs的表達(見圖1、表1)，且差異明顯。胃腸道惡性腫瘤患者的MDSCs百分比為 (3.99±1.24)%，明顯高于健康人群(1.81±0.74，P<0.01)；同時通過公式 (MDSCs的百分比×WBC總數(shù))計算MDSCs的相對數(shù)量，WBC總數(shù)由貝克曼血細胞分析儀LH-750常規(guī)檢測所得。健康對照MDSCs(141.38±56.3/μl) 和腫瘤患者 (272.38±72.3/μl，P<0.05)，有統(tǒng)計學(xué)意義。

圖1 MDSCs在健康對照和腫瘤患者外周血中表達的流式結(jié)果

2.2 腫瘤轉(zhuǎn)移的病人和非轉(zhuǎn)移腫瘤病人的比較伴腫瘤轉(zhuǎn)移者 (5.34±1.54)%和非轉(zhuǎn)移腫瘤患者(3.71±1.46)%比較，有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)；胃腸道腫瘤伴繼發(fā)轉(zhuǎn)移者(423.76±105.3/μl)和非轉(zhuǎn)移腫瘤患者(272.38±72.3/μl)相比，有明顯差異(P<0.01)。

表1 健康對照和腫瘤病人MDSCs檢測結(jié)果

2.3 胃癌和腸癌患者MDSCs的比較 胃癌患者MDSCs(3.57±1.59)%和腸癌(4.31±1.71)%相比，無統(tǒng)計學(xué)意義 (P>0.05);兩者細胞數(shù)量 (胃癌241.38±75.1/μl，腸癌 289.71±96.3/μl，P>0.05)差異不明顯。2.4腫瘤患者伴有高血壓、糖尿病和一般腫瘤患者比較 腫瘤患者伴有高血壓、糖尿病(3.62±1.16)%和一般腫瘤患者(3.99±1.24)%比較，無明顯差異(P>0.05)。

3 討論

近年來研究表明，MDSCs可通過多種途徑逃避免疫系統(tǒng)監(jiān)視，促進腫瘤發(fā)展。但由于MDSCs缺乏特異性淋巴系標志，給研究和鑒別帶來了較大的難度。

不同組織來源的腫瘤中發(fā)現(xiàn)了不同表型特征的 MDSCs[1，2]；不同標志的 MDSCs在外周血中的表達量差異也很大[3,4]。目前越來越多的研究傾向于，MDSCs表達髓系共同標志CD33和髓系抗原CD11b，但不表達MHCⅡ類分子HLA-DR及成熟髓系和淋巴系細胞的標記[2]，因此，在本文中，MDSCs的 表 型 定 義 為 (Lin1-/Lo，HLA DR-，CD33+，CD11b+)。

在本研究中，消化道腫瘤患者外周血中MDSCs的比例和數(shù)量均明顯增高，且出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的患者MDSCs增高更明顯，說明MDSCs和胃腸道惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移有一定的關(guān)系。不同腫瘤類型的患者外周血中MDSCs無明顯差異，說明MDSCs在不同組織來源腫瘤中的表達不具有特異性?；颊哂谢A(chǔ)疾病(如高血壓、糖尿病)的腫瘤病人和一般腫瘤患者比較無明顯差異，表明高血壓、糖尿病等基礎(chǔ)疾病對MDSCs在影響腫瘤發(fā)生發(fā)展方面無明顯影響。

MDSCs只有在誘導(dǎo)活化后才能發(fā)揮免疫抑制作用。在機體發(fā)生細菌、病毒等感染，以及慢性炎癥和腫瘤時，慢性炎癥相關(guān)的因子(如PGE、SCF、M-CSF、IL-6等)和腫瘤細胞及腫瘤基質(zhì)細胞分泌的因子(如 IFN-γ、IL-4、IL-13 和 TGF-β 等)會誘導(dǎo)活化MDSCs，通過多種途徑抑制抗腫瘤免疫應(yīng)答，促進腫瘤生長[5,6]。MDSCs可通過影響精氨酸代謝[7]和半胱氨酸的代謝[8]，抑制T細胞介導(dǎo)的特異性抗腫瘤免疫。MDSCs還可通過膜型TGFβ1抑制NK細胞受體NKG2D的表達和IFN-γ的產(chǎn)生，抑制NK細胞介導(dǎo)的天然抗腫瘤免疫[9]。 (下轉(zhuǎn)第558頁)脈血氣電解質(zhì)Na+、K+結(jié)果和靜脈血電解質(zhì)結(jié)果正相關(guān)，而Ca2+卻無明顯相關(guān)性，動靜脈血Na+、K+相關(guān)度R分別為0.940，0.930，即動脈血結(jié)果高和低在總體趨勢上和靜脈血是一致的，進一步的回歸分析顯示兩者檢測結(jié)果存在線性關(guān)系，其關(guān)系可以用具體公式表達出來，靜脈血Na+(mmol/L)=1.04×動脈血 Na++0.170，靜脈血 K+(mmol/L)=1.083×動脈血K++0.360。與上述Budak YU 等[6]，Lee YJ等[7]研究結(jié)果一致。

因此在臨床上不可以直接用動脈血氣分析的電解質(zhì)結(jié)果判斷患者有無電解質(zhì)紊亂，但可以通過動靜脈血電解質(zhì)結(jié)果快速和較準確判斷出患者是否存在電解質(zhì)失衡，對于指導(dǎo)臨床搶救和診治有重要意義。由于動脈血氣分析儀器型號多樣，所用的肝素抗凝劑種類和計量不一致，所以檢測出的結(jié)果也不一定完全相同，另外本研究也存在一些局限性，首先樣本量較小，難免發(fā)生機遇偏倚和誤差增加的情況；另外，由于采用單中心研究，納入病例均為本院住院部患者，這使得本研究人群分布不均，可能存在選擇性偏倚。據(jù)此做出的回歸方程對于判斷可能有一定差異。仍需多中心、大樣本的隨機對照研究進一步加以驗證。

[1]Girndt M.Diagnosis and treatment of electrolyte balance disorders[J].Dtsch Med Wochenschr,2013,38(13):642-646.

[2]Alexander N,Korolevich,Natali P.Laser correlation spectroscopy for determining biochemical parameters of whole blood [J].Proc.SPIE,1998,3732(98):345-348.

[3]Higgins C.The use of heparin in preparing samples for blood-gas analysis[J].MLO Med Lab Obs,2007,39(10):16-23.

[4]Müller Plathe O,Schreiber R.An electrolyte-adapted heparin solution for the determination of blood gases and electrolytes in whole blood [J].Anasthesiol Intensivmed Notfallmed Schmerzther,1991,26(3):161-164.

[5]Chacko B,Peter JV,Patole S,Fleming JJ,et al.Electrolytes assessed by point-of-care testing Are the values comparable with results obtained from the central laboratory [J].Indian J Crit Care Med,2011,15(1):24-29.

[6]Budak YU,Huysal K,Polat M.Use of a blood gas analyzer and a laboratory autoanalyzer in routine practice to measure electrolytes in intensive care unit patients[J].BMC Anesthesiol,2012,12:17.

[7]Jain A,Subhan I,Joshi M.Comparison of the point-of-care blood gas analyzer versus the laboratory auto-analyzer for the measurement of electrolytes[J].Int J Emerg Med，2009 2(2):117-120.