姜朝新，潘開拓，曾令恒，葉振望，王陳龍

（廣東省佛山市南海區(qū)第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 528244）

冠心病是當(dāng)今威脅人類健康的主要疾病之一，其中急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是冠心病中最為嚴(yán)重的一種［1］，由于其起病急，病死率高，更加受到重視。而內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs，即內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞）在體內(nèi)可以轉(zhuǎn)化為內(nèi)皮細(xì)胞，在修復(fù)心肌缺血損傷方面發(fā)揮非常重要的作用，已成為近期的研究熱點(diǎn)?，F(xiàn)將研究AMI患者120例外周血不同病變程度的內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量和功能的變化等臨床應(yīng)用價(jià)值報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年6月至2012年12月南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院收治的住院AMI患者120例為AMI組，其中，男79例，女41例，年齡43～60歲，平均（51.6±8.6）歲；雙支病變38例，多支病變32例。選擇同期體檢的健康者20例作為對(duì)照組，其中，男12例，女8例，年齡41～59歲，平均（48.8±10.1）歲。本研究患者均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：近期有創(chuàng)傷、手術(shù)史、皮膚潰瘍、炎癥、腫瘤和血液系統(tǒng)疾病等患者。

1.2 方法 所有患者入院時(shí)采集外周血20mL，肝素抗凝，4h內(nèi)處理標(biāo)本，對(duì)照組清晨抽血，同樣處理。密度梯度離心法獲得外周血單個(gè)核細(xì)胞，RMPI－1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，DiL－acLDL和FITC－UEA－I熒光雙染色法鑒定，雙染色陽(yáng)性細(xì)胞為EPCs。同時(shí)采用貼壁法檢測(cè)其黏附，改良的Boyden小室檢測(cè)其遷移能力。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理分析，計(jì)量資料以表示，組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，多組間比較采用F檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 細(xì)胞形態(tài) 光學(xué)顯微鏡下觀察，對(duì)照組細(xì)胞變大變圓，出現(xiàn)較多的小桿形細(xì)胞和梭形細(xì)胞（圖1）。AMI組細(xì)胞數(shù)目較對(duì)照組明顯減少。

2.2 熒光雙染色細(xì)胞鑒定 AMI組患者內(nèi)皮祖細(xì)胞分離獲得的單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)7d后形成了梭形的內(nèi)皮樣細(xì)胞。用acLDL－DiL和UEA－I雙染色后，通過(guò)共聚焦顯微鏡鑒定，acLDL－DiL和UEA－I雙染色陽(yáng)性細(xì)胞被認(rèn)為是正在分化的EPCs。

2.3 EPCs數(shù)量、集落形成單位及白細(xì)胞介素－18（IL－18）濃度AMI組患者的IL－18、集落數(shù)量與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。AMI組中EPCs數(shù)量與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 AMI患者治療不同病變程度EPCs數(shù)量、集落形成單位和IL－18濃度的變化

表1 AMI患者治療不同病變程度EPCs數(shù)量、集落形成單位和IL－18濃度的變化

＊：P＜0.05，與對(duì)照組比較。

組別 n EPCs數(shù)量 IL－18（pg／mL）20 57.1±2.1 20.5±9.7 31.10±1.90 AMI組單支病變 50 48.5±7.3 135.6±86.9＊ 15.60±4.79＊雙支病變 38 36.5±5.6 151.2±90.8＊ 12.14±7.31＊多支病變 32 18.9±3.9＊ 266.8±122.4＊ 8.00±4.80集落數(shù)量對(duì)照組＊

圖1 培養(yǎng)7d后EPCs數(shù)量及形態(tài)的變化影像學(xué)表現(xiàn)（光學(xué)顯微鏡，×200）

3 討 論

EPCs是一種多能干細(xì)胞，能循環(huán)、增殖并分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞，但尚未表達(dá)成熟血管內(nèi)皮細(xì)胞的表面特征［2］。EPCs不僅參與人胚胎血管生成，還可以分化為成熟內(nèi)皮細(xì)胞參與出生后血管新生和內(nèi)皮損傷后的修復(fù)過(guò)程［3－5］，EPCs可以遷移到損傷局部分化成成熟的血管內(nèi)皮細(xì)胞，還可以通過(guò)旁分泌機(jī)制分泌出血管生成的物質(zhì)［6］［如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF），肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepatocyte growth factor，HGF），胰島素樣生長(zhǎng)因子－1（insulin－like growth factors，IGF－1），堿 性 成 纖 維 細(xì) 胞 生 長(zhǎng) 因 子 （basic fibroblast growth factor，bFGF）和鞏膜成纖維細(xì)胞（guinea pig scleral fibroblast，GSF）等］，從而促進(jìn)EPCs的增殖分化和促進(jìn)血管新生。多項(xiàng)研究表明AMI患者存在不同程度的內(nèi)皮損傷，損傷相關(guān)因子與修復(fù)相關(guān)因子呈動(dòng)態(tài)的此消彼長(zhǎng)狀態(tài)。本研究發(fā)現(xiàn)，AMI患者血清EPCs水平顯著低于健康對(duì)照組（P＜0.05），這與Eizawa等研究結(jié)果一致。崔斌等［7］研究發(fā)現(xiàn)，隨著冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)的增加，循環(huán)EPCs的水平逐漸降低，冠狀動(dòng)脈病變（單支、雙支、3支）組循環(huán)EPCs水平均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），3支病變組EPCs水平明顯低于單支病變組（P＜0.05），與本研究結(jié)果一致。動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致循環(huán)血中EPCs數(shù)量功能改變的機(jī)制可能包括以下幾種途徑：（1）形成動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素可增強(qiáng)氧化應(yīng)激，直接影響EPCs的動(dòng)員或生存時(shí)間；（2）由于EPCs參與內(nèi)皮損傷后的修復(fù)過(guò)程，持續(xù)的內(nèi)皮損傷和內(nèi)皮功能障礙可導(dǎo)致EPCs過(guò)量消耗甚至衰竭；（3）動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素可能會(huì)通過(guò)抑制其促進(jìn)因子的分泌［如粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（granulocyte－macrophage colony－stimulating factor，GM－CSF）、VEGF、bFGF等］，同時(shí)動(dòng)員其抑制因子的合成，從而抑制骨髓EPCs的動(dòng)員作用而間接減少EPCs數(shù)量；（4）冠心病的危險(xiǎn)因素常可通過(guò)影響其他信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑而調(diào)節(jié)EPCs的分化和動(dòng)員。內(nèi)皮功能障礙的本質(zhì)是內(nèi)皮損傷和修復(fù)之間動(dòng)態(tài)平衡的破壞，EPCs是修復(fù)損傷血管的細(xì)胞庫(kù)，EPCs在血管修復(fù)和維持內(nèi)皮功能完整中具有重要作用。因此，EPCs可作為了解血管功能和血管危險(xiǎn)因素的一個(gè)生物學(xué)指標(biāo)。

近年來(lái)，有研究認(rèn)為，動(dòng)脈粥樣硬化與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，其發(fā)病機(jī)制與炎癥的機(jī)制存在較多相似乎之處［8］。IL－18作為重要的促炎性細(xì)胞因子，在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的發(fā)生、發(fā)展及粥樣斑塊破裂的過(guò)程中起重要作用。有文獻(xiàn)報(bào)道，冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊處多種促炎性細(xì)胞因子顯著增加，表明其可能對(duì)斑塊形成有一定的作用。本研究也得到同樣結(jié)果。并且本研究發(fā)現(xiàn)EPCs和IL－18與AMI病變程度相關(guān)，同時(shí)二者之間顯著負(fù)相關(guān)。由此可見，對(duì)AMI患者而言，隨著炎癥反應(yīng)不斷增強(qiáng)，損傷因子——促炎性細(xì)胞因子表達(dá)上升，而修復(fù)因子——EPCs大量消耗，造成血管損傷進(jìn)一步加重。目前，許多研究結(jié)果表明心肌梗死后脂質(zhì)代謝異常，細(xì)胞因子過(guò)度表達(dá)，血管緊張素和醛固酮過(guò)度激活等與心肌梗死后心室重塑有密切的關(guān)系，且均能抑制心臟功能［9－12］。因此，早期診斷其損傷程度并采取適當(dāng)干預(yù)措施將有利于病情好轉(zhuǎn)或延緩其迅速惡化［13－16］。所以，EPCs和IL－18的監(jiān) 測(cè) 在 AMI患者早 期 診斷、治療和預(yù)后判斷中有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

［1］ Hur J，Yoon CH，Kim HS，et al.Characterization of two types of endothelial progenitor cells and their different contributions to neovasculogenesis［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2004，24（2）：288－293.

［2］ Gulati R，Jevremovic D，Peterson TE，et al.Diverse origin and function of cells with endothelial phenotype obtained from adult human blood［J］.Circ Res，2003，93（11）：1023－1025.

［3］ Bompais H，Chagraoui J，Canron X，et al.Human endothelial cells derived from circulating progenitors display specific functional properties compared with mature vessel wall endothelial cells［J］.Blood，2004，103（7）：2577－2584.

［4］ Yoon CH，Hur J，Park KW，et al.Synergistic neovascularization by mixed transplantation of early endothelial progenitor cells and late outgrowth endothelial cells：the role of angiogenic cytokines and matrix metalloproteinases［J］.Circulation，2005，112（11）：1618－1627.

［5］Ingram DA，Mead LE，Tanaka H，et al.Identification of a novel hierarchy of endothelial progenitor cells using human peripheral and umbilical cord blood［J］.Blood，2004，104（9）：2752－2760.

［6］ Shintani S，Murohara T，Ikeda H，et al.Mobilization of endothelial progenitor cells in patients with acute myocardial infarction［J］.Circulation，2001，103（23）：2776－2779.

［7］ 崔斌，黃嵐，宋耀明，等.冠心病患者循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞與相關(guān)危險(xiǎn)因素及冠狀動(dòng)脈病變的關(guān)系［J］.中華心血管病雜志，2005，33（9）：785－788.

［8］ 張冬會(huì).冠狀動(dòng)脈支架置入患者血清炎癥因子表達(dá)及血管再狹窄［J］.中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2011，15（3）：559－562.

［9］ 郭東梅，胡蓉.冠心病新的危險(xiǎn)因素研究進(jìn)展［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2011，40（24）：2462－2465.

［10］舒嫻，傅春江.血清胱抑素C與冠狀動(dòng)脈病變相關(guān)性研究［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2010，39（2）：197－199.

［11］王安偉，羅素新，向睿.266例冠心病患者經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療的臨床分析［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2010，39（12）：1582－1583.

［12］牛穎，羅先潤(rùn)，梁鵑.自體外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞移植聯(lián)合PPAR激動(dòng)劑治療大鼠急性心肌梗死的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)循證心血管醫(yī)學(xué)雜志，2009（3）：169－172.

［13］張玉龍，方靖琴，張偉國(guó)，等.兔骨髓來(lái)源內(nèi)皮祖細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2011，40（10）：952－953.

［14］王代紅，袁發(fā)煥.內(nèi)皮祖細(xì)胞與腎臟病［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2009，38（22）：2898－2901.

［15］徐承平，張華蓉，陳飛蘭，等.內(nèi)皮祖細(xì)胞在膠質(zhì)瘤新生血管中的募集和整合作用［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2008，37（21）：2424－2426.

［16］王代紅，李芙蓉，張瑩，等.內(nèi)皮祖細(xì)胞移植對(duì)單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎小管周毛細(xì)血管重建的影響［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2009，38（23）：2294－2996.