涂 瓊，盧慶紅

（江西省兒童醫(yī)院藥劑科，南昌 330006）

七葉蓮又名七角楓，是五加科大參屬植物，在我國西南部和長江中下游的廣大地區(qū)均有分布。七葉蓮全草入藥，有驅熱散風、解毒消腫、散瘀接骨之功效，常用于治療骨折、風濕性關節(jié)炎、跌打損傷等各種疾病，尤其應用于類風濕性關節(jié)炎的治療取得了很好的效果[1]。近幾年，從七葉蓮的揮發(fā)油中分離了倍半萜烯類化合物并證明其具有抗腫瘤作用[2]，在七葉蓮的其他提取物中分離了三萜皂苷類化合物和有機酸。其有機酸主要成分之一為延胡索酸[3]，與琥珀酸、γ-羥基丁酸共同配制的三丁酸鈉注射液，熱板法鎮(zhèn)痛實驗具有顯著鎮(zhèn)痛作用。為有效反映七葉蓮藥材質量，筆者參考有關文獻[4-5]，建立高效液相色譜法測定七葉蓮藥材中延胡索酸的含量，以期為七葉蓮藥材質量提供實驗基礎。

1 儀器與試藥

LC-10ATvp、島津SPD-10Avp高效液相色譜儀。HHS 21-4B型號電熱恒溫水浴鍋（上海醫(yī)療機械五廠），延胡索酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：1541-200001），七葉蓮藥材于2008年3月采自江西省宜豐縣山區(qū)，由江西中醫(yī)學院中藥鑒定室賴學文副教授鑒定為五加科大參屬植物短梗大M.rosthornii，并粉碎成細粉備用。乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（5∶95）；檢測波長：210 nm，流速 1.0 mL·min-1；進樣量 5 μL；柱溫：35 ℃。在上述色譜條件下，供試品溶液中延胡索酸與其他成分能達到基線分離，與相鄰色譜峰的分離度大于1.5，見圖 1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取延胡索酸對照品適量，加甲醇溶解制成每毫升含1.024 mg的延胡索酸溶液，作對照品儲備液，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品粉末（過 1號篩）約2 g，精密稱定，加70%乙醇200 mL回流提取2 h，提取液濾過，至水浴蒸干，殘渣加石油醚10 mL浸泡2次，每次5 min，棄去石油醚液，蒸干，殘渣用甲醇溶解，移置50 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。

2.3 線性關系考察

精密量取延胡索酸對照品溶液 0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、2、3 mL，置 5 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取5 μL，注入液相色譜儀中，測定延胡索酸峰面積。以進樣量（C）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程：Y=24 365C-272.104，r=0.999 5。結果顯示，延胡索酸的檢測濃度在0.102 4～3.067 2 μg范圍內線性關系良好。

2.4 精密度試驗

取濃度為0.102 4 mg·mL-1的延胡索酸對照品溶液，精密吸取5 μL，在上述色譜條件下,連續(xù)測定5次，結果測得延胡索酸峰面積分別為226 770、216 549、218 967、223 675、221 250，RSD 為 1.79%，表明精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，精密吸取供試品溶液5 μL，在 0、2、4、6、8 h 分別按上述色譜條件進樣測定，結果測得延胡索酸峰面積分別為95 112、95 526、95 091、95 040、95 707，平均峰面積 95 295，RSD 為0.32%，表明樣品在8 h內穩(wěn)定，本方法穩(wěn)定性良好。

2.6 重復性試驗

取同一七葉蓮藥材5份，按“2.2.2”項中方法制備樣品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，并計算含量。結果5份樣品延胡索酸含量的RSD為0.61，符合重復性要求。

2.7 加樣回收試驗

取已知延胡索酸含量的七葉蓮藥材1 g，9份，精密稱定。各樣品分別加入延胡索酸對照品貯備液適量，按“2.2.2”項下方法平行制備。按“2.1”項下色譜條件測定。結果延胡索酸的平均回收率為99.05%，RSD為0.55%。結果見表1。

表1 回收率實驗結果

2.8 樣品測定

取七葉蓮5批樣品，經干燥、粉碎后分別按“2.2.2”項下方法制成供試品溶液，精密吸取延胡索酸對照品溶液和供試品溶液各 5 μL，按“2.1”項下色譜條件，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算延胡索酸的含量。結果顯示，5批樣品中延胡索酸含量分別為0.480%、0.485%、0.478%、0.493%、0.465%。

3 討論

1）波長的選擇:將適量濃度的延胡索酸對照品溶液用紫外分光光度儀在波長200～400 nm范圍內進行掃描，結果延胡索酸在210 nm處有最大吸收。

2）提取溶劑的選擇:曾用 95%、80%、70%、60%乙醇作為溶劑進行提取，結果發(fā)現70%乙醇提取效果相對較高，故選用70%乙醇作為提取溶劑。

3）流動相的選擇：曾用甲醇-0.01 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液（5∶95）、甲醇-0.01 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液（10∶90）、乙腈-0.4% 磷酸二氫鉀（20∶80）、乙腈-0.1%磷酸溶液（5∶95）作為溶劑系統。結果表明，乙腈-0.1%磷酸溶液（5∶95）系統的分離效果最好。

采用HPLC法測定七葉蓮藥材中的延胡索酸含量，簡便、準確、精密度好，平均加樣回收率為99.05%，為更好地控制七葉蓮藥材的質量提供了可靠的方法。

[1] 周菲菲，朱湘生.七葉蓮酒治療類風濕性關節(jié)炎臨床觀察[J].中國農村醫(yī)學，1998，6（5）：44.

[2] 何濤，李林松，康麗潔，等.七葉蓮揮發(fā)油成分的GC/MS分析[J].江西中醫(yī)學院學報，2006，18（4）:51.

[3] 崔向青，蔣燕，楊輝.七葉蓮的研究進展[J].中華中醫(yī)學雜志，2005，20（增刊）：308-309.

[4] 廖建春.高效液相色譜法測定七葉蓮膠囊中延胡索酸的含量[J].藥學與臨床研究，2007,15（5）:421-422.

[5] 劉佳，樸惠順，施溯筠，等.HPLC法測定金頂側耳中延胡索酸的含量[J].中國藥房，2010,21（11）:1018-1019.