楊春梅 王勝文 劉 兵 陳 杰 趙學(xué)忠 徐 斌

(武警吉林省總隊(duì)醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130052)

血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(ARB)以其對(duì)靶器官的保護(hù)作用及臨床副作用小等特點(diǎn)，在治療老年心腦血管疾病中越來越受到重視〔1〕，已成為臨床治療高血壓、充血性心力衰竭的一線藥物，其治療糖尿病性腎病、防治心臟與血管病理性重構(gòu)以及抗動(dòng)脈粥樣硬化等作用也得到廣泛證實(shí)。然而，它對(duì)急性心肌梗死的治療尚未完全成熟或療效尚有爭(zhēng)議。厄貝沙坦(又名伊白沙坦，Erbesartan)為洛沙坦的同類物，其雜環(huán)部分為4-螺環(huán)戊烷-5-酮-咪唑，它的AT1拮抗作用比洛沙坦強(qiáng)大數(shù)倍，但其抗急性心肌梗死作用尚未見實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道。本文擬觀察厄貝沙坦的抗實(shí)驗(yàn)性心肌缺血作用，并從自由基及體內(nèi)血管活性因子等變化分析其可能的作用機(jī)制，為其臨床治療急性心肌梗死提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠，雌雄各半，體重220～250 g，由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥品和試劑 厄貝沙坦由南京長(zhǎng)澳制藥有限公司生產(chǎn)，以0.5%羧甲基纖維素鈉配制成所需濃度;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)測(cè)試盒均購(gòu)于南京建成生物技術(shù)研究所;前列環(huán)素(PGI2)及血栓素A2(TXA2)放免藥盒購(gòu)于中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院東亞免疫技術(shù)研究所。

1.3 動(dòng)物分組與給藥 30只Wistar大鼠，雌雄各半，按體重隨機(jī)分成假手術(shù)組、模型組及厄貝沙坦組，每組10只。厄貝沙坦組大鼠灌胃厄貝沙坦100 mg/kg，假手術(shù)組及模型組給予0.5%羧甲基纖維素鈉，灌胃容量均為5 ml/kg體重，1次/d，連續(xù)3 d。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法及觀測(cè)指標(biāo) 于末次給藥后30 min按文獻(xiàn)〔2〕方法將Wistar大鼠乙醚麻醉，仰位固定于手術(shù)臺(tái)上，測(cè)定大鼠Ⅱ?qū)?lián)正常心電圖后，正中剃毛，以10號(hào)線做荷包縫合，以手術(shù)刀正中切開，用止血鉗剝離肋間肌肉，自左側(cè)3～4肋間開胸，暴露心臟，在肺動(dòng)脈圓錐及左心耳間找出左冠狀動(dòng)脈前降支，于左心耳下2～3 mm處用0號(hào)線立即結(jié)扎之，將心臟送回胸腔，迅速擠出胸腔內(nèi)氣體，拉緊荷包縫合線結(jié)扎關(guān)閉胸腔，整個(gè)開胸時(shí)間不超過30 s，假手術(shù)組不結(jié)扎而只置手術(shù)線。結(jié)扎冠脈24 h后，以戊巴比妥鈉30 mg/kg腹腔靜脈麻醉，腹主動(dòng)脈插管取血，用COBAS-FARA自動(dòng)生化分析儀測(cè)血清肌酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)及乳酸脫氫酶(LDH)活性，按試劑盒方法測(cè)血清MDA含量、SOD及GSH-Px活性。取加有肝素的抗凝血以3 000 r/min離心10 min，取上層血漿用放免法測(cè)血漿PGI2和TXA2水平。取血后剖取大鼠心臟，用生理鹽水洗凈心腔內(nèi)積血，去掉心房組織及脂肪，稱重，將左心室心肌橫切4～5片，然后浸入氯化硝基四氮唑藍(lán)(N-BT)磷酸緩沖液中，置37℃恒溫水浴，待染色完全后取出，正常組織染色，缺血組織不染色。切下缺血心肌稱重，用缺血心肌與左心室濕重的百分比計(jì)算心肌梗死面積(MIS)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 厄貝沙坦對(duì)急性心肌梗死大鼠MIS、血清CK-MB、AST及LDH活性的影響 與假手術(shù)組相比，模型組MIS、血清CK-MB、AST及LDH活性均明顯增加(P＜0.05～P＜0.001)。與模型組相比，厄貝沙坦能明顯縮小 MIS，降低血清CK-MB、AST及LDH活性(P＜0.05或P＜0.01)。見表1。

2.2 厄貝沙坦對(duì)急性心肌梗死大鼠血清MDA含量及SOD、GSH-Px活性的影響 與假手術(shù)組相比，模型組血清MDA含量明顯增加，SOD及GSH-Px活性明顯降低(P＜0.05或 P＜0.01)。與模型組比較，厄貝沙坦可明顯降低血清MDA含量，并明顯提高血清SOD及GSH-Px活性(P＜0.05或P＜0.01)。見表2。

表1 厄貝沙坦對(duì)急性心肌梗死大鼠MIS及血清CK-MB、AST、LDH活性的影響(x ± s，n=10)

表2 厄貝沙坦對(duì)急性心肌梗死大鼠血清MDA、SOD及GSH-Px的影響(x ± s，n=10)

2.3 厄貝沙坦對(duì)急性心肌梗死大鼠血漿PGI2及TXA2水平的影響 與假手術(shù)組相比，模型組血漿TXA2水平明顯升高，PGI2水平及PGI2/TXA2比值明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)。與模型組比較，厄貝沙坦可使大鼠血漿PGI2水平及PGI2/TXA2比值明顯升高(P＜0.05)，對(duì)血漿TXA2水平無明顯影響(P＞0.05)。見表3。

表3 厄貝沙坦對(duì)急性心肌梗死大鼠血漿PGI2及TXA 2水平的影響(x ±s，n=10，pg/ml)

3 討論

MIS大小是預(yù)示急性心肌梗死患者近期和遠(yuǎn)期預(yù)后的主要決定性因素〔3〕。有資料表明，急性心肌梗死后，MIS與左室舒張期末壓之間呈平行關(guān)系，而與直接反映心功能狀態(tài)的心搏出量及心臟指數(shù)之間呈負(fù)相關(guān)。左心室MIS愈大，左室舒縮性能降低愈明顯，恢復(fù)愈差〔4〕。當(dāng)梗死范圍＜左心肌的30%時(shí)，心功能可被剩余健全心肌代償;如梗死范圍＞30%時(shí)，就可發(fā)生具有臨床表現(xiàn)的心力衰竭，若心?。?0%時(shí)，就可發(fā)生心源性休克〔5〕。因此，縮小MIS，從而改善心肌舒縮功能已作為抗心肌缺血藥物的主要療效指標(biāo)。心肌發(fā)生缺血壞死，除組織學(xué)的病理改變外，其生理機(jī)能、生化代謝方面也隨之發(fā)生相應(yīng)變化。一般認(rèn)為，阻斷冠脈血流20～30 min內(nèi)重新供血，心肌病變可以逆轉(zhuǎn)。超過此時(shí)間可引起不可逆性細(xì)胞損傷及隨后的細(xì)胞壞死、膜失去完整性，線粒體被破壞，各種酶被釋放出來，引起血中AST、CK-MB、LDH含量增加，其升高程度與心肌梗死程度相平行。通過測(cè)定外周血中心肌三酶活性可間接推測(cè)MIS大小，相關(guān)系數(shù)很高。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，厄貝沙坦可明顯縮小MIS，并降低血清AST、CK-MB及LDH活性，提示其對(duì)急性缺血心肌具有明顯保護(hù)作用。

MDA是氧自由基引發(fā)脂類過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，其含量高低反映氧自由基水平和脂質(zhì)過氧化的強(qiáng)度和速度，是了解氧自由基致機(jī)體組織細(xì)胞損傷的重要指標(biāo)之一。而機(jī)體存在的抗氧化防護(hù)系統(tǒng)中，主要的是內(nèi)源性抗氧化酶，而其中以SOD、GSHPx最受重視，可以不同程度地減少M(fèi)IS。缺血心肌產(chǎn)生的氧自由基可進(jìn)入到血循環(huán)而使外周血中氧自由基含量增多，因此可以通過MDA含量的變化評(píng)定氧自由基對(duì)機(jī)體造成的損傷程度，同時(shí)測(cè)定血液中的SOD、GSH-Px活性來反映機(jī)體抗氧化活性〔6〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:厄貝沙坦能明顯降低血清MDA含量，升高血清SOD及GSH-Px活性，提示其可通過某種機(jī)制使脂質(zhì)過氧化過程受到抑制，同時(shí)又通過提高內(nèi)源性抗氧化酶活性而減輕氧自由基對(duì)心肌的損傷。此抗氧化作用可能也是其保護(hù)缺血心肌的機(jī)制之一。

細(xì)胞膜的磷脂中有花生四烯酸(AA)存在。TXA2和PGI2都是AA代謝中調(diào)節(jié)生理功能的最重要產(chǎn)物，分別由血小板和血管內(nèi)皮細(xì)胞合成。TXA2具有強(qiáng)烈的促血小板黏附聚集和收縮冠脈血管的作用，而PGI2相反，是目前已知的體內(nèi)最強(qiáng)的血小板凝集抑制劑，具有直接擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈和抑制氧自由基產(chǎn)生的細(xì)胞保護(hù)作用〔7〕。正常時(shí)兩者在血中保持平衡。急性心肌梗死時(shí)，動(dòng)脈內(nèi)皮受損，使主要產(chǎn)生于冠狀動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的PGI2合成受干擾，含量下降，血小板黏附聚集于內(nèi)皮下膠原組織，過度激活生成大量TXA2等縮血管物質(zhì)。TXA2通過抑制腺苷酸環(huán)化酶，使血小板和血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)cAMP減少或作為Ca2+載體直接促進(jìn)Ca2+內(nèi)流和致密管道系統(tǒng)Ca2+釋放，從而促進(jìn)血小板聚集和局部血管收縮，加重內(nèi)皮損傷。因此，TXA2與PGI2的平衡失調(diào)是加劇心肌缺血損傷壞死的重要因素〔8〕。厄貝沙坦可明顯降低血漿TXA2水平，并能明顯增高PGI2/TXA2比值，提示其可能通過糾正PGI2與TXA2之間的平衡失調(diào)發(fā)揮抗心肌缺血作用。

1 黃若文，姜 馨，呂卓人.對(duì)血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑的爭(zhēng)議和熱點(diǎn)問題的評(píng)估〔J〕.中華老年心腦血管病雜志，2006;8(10):710-3.

2 李洪坤，于曉風(fēng)，曲紹春，等.碟脈靈注射液對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗死的保護(hù)作用及其機(jī)制〔J〕.吉林大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2006;32(2):293-6.

3 孟永霞，李建國(guó)，吳 菁，等.急性心肌梗死面積與血脂、前列腺素代謝相關(guān)關(guān)系之探討〔J〕.解放軍保健醫(yī)學(xué)雜志，2003;5(1):19-21.

4 武 毅，于曉風(fēng)，曲紹春，等.人參果皂苷對(duì)犬實(shí)驗(yàn)性心肌梗死的保護(hù)作用〔J〕.中國(guó)藥學(xué)雜志，2007;42(5):345-8.

5 楊建業(yè)，張迎春，王明江，等.大鼠左冠狀動(dòng)脈不同結(jié)扎時(shí)間對(duì)心肌梗死面積及心功能的影響〔J〕.鄖陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006;25(2):74-6.

6 李 艷，張純潔，林孟戈.生物化學(xué)檢驗(yàn)——理論與臨床〔M〕.北京:人民衛(wèi)生出版社，2003:305.

7 Bridgman P，Aronovltz MA，Kakkar R，et al.Gender-specific patterns of left ventricular and myocyte remodeling following myocardial infarction in mice deficient in the angiotensin Ⅱ type 1a receptor Am〔J〕.J Physiol Heart Circ Physio1，2005;289(2):H586-92.

8 劉 洪，李榮亨.前列腺素類物質(zhì)與冠心病〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2005;25(8):988-90.