馬孝政

懷化市第一人民醫(yī)院，湖南懷化 418000

乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）是一種在世界范圍內(nèi)流行的感染性疾病，被感染人群中有一部分為慢性HBV 感染患者。慢性HBV 感染的病理發(fā)病機(jī)制受多種因素的影響，許多研究認(rèn)為宿主和病毒間的免疫應(yīng)答反應(yīng)對(duì)于該疾病的發(fā)生和發(fā)展起了關(guān)鍵性的作用。臨床通常使用拉米夫定來對(duì)患者進(jìn)行治療，這是一種核苷類的抗病毒藥物，主要通過抑制病毒DNA的復(fù)制而發(fā)揮作用，但是長期使用該藥物可能導(dǎo)致患者產(chǎn)生耐藥性[1-5]。有研究認(rèn)為長期使用拉米夫定后慢性HBV 患者的免疫反應(yīng)出現(xiàn)了改變，其中Th 細(xì)胞群在該應(yīng)答反應(yīng)中起主要作用。為探討分析拉米夫定治療對(duì)慢性乙型肝炎患者干擾素-γ的變化影響，該院2010年1月—2012年1月針對(duì)這一現(xiàn)象展開調(diào)查，調(diào)查對(duì)象為70例慢性HBV，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取在該院接受治療的乙型肝炎患者70例為研究對(duì)象，患者中男45例，女25例，患者的年齡為23～78歲，平均年齡為45.3歲。所有患者經(jīng)過檢測(cè)均符合慢性乙肝的診斷標(biāo)準(zhǔn)，具體參考Locarnini的標(biāo)準(zhǔn)。并且發(fā)現(xiàn)70例患者中在治療后病毒產(chǎn)生變異和未變異的各為35例，分別將這些患者標(biāo)記為變異組和未變異組，同時(shí)選取同期在該院接受健康體檢的30例體檢者作為對(duì)照組。治療前所有患者都為HbeAg 陽性，其中HBV DNA≥105 copy/mL，患者的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）大于正常值上限的2倍。同時(shí)排除具有以下描述的患者：患者合并有其他肝炎病毒的感染、患者感染HIV 病毒、使用過免疫調(diào)節(jié)劑、患者為肝炎失代償、孕婦或哺乳期婦女。免疫組、未免疫組、對(duì)照組3組年齡、性別、治療前的HBV DNA 和ALT 水平相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P>0.05），見表1。

表1 變異組、未變異組和對(duì)照組一般情況對(duì)比結(jié)果（±s）

表1 變異組、未變異組和對(duì)照組一般情況對(duì)比結(jié)果（±s）

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1.2 方法

所有患者均接受拉米夫定的治療，劑量為100 mg/d，治療時(shí)間為6個(gè)月，治療后變異組發(fā)生病毒變異的平均時(shí)間為（13.45±5.4）個(gè)月。分別采集3組受試者的外肘靜脈血液2 mL，將采集到的血液裝入普通試管和EDTA的抗凝試管，然后分離血清和血漿，檢測(cè)血清中的ALT 水平、細(xì)胞因子；檢測(cè)血漿中的HBV DNA水平。

1.3 HBV 和ALT的檢測(cè)方法

使用熒光定量方法檢測(cè)HBV DNA的含量（儀器采用Life Technology公司的PCR儀器），試劑采用和儀器相配套的試劑。使用全自動(dòng)生化分析儀器對(duì)ALT進(jìn)行分析（儀器使用Life Technology 生產(chǎn)的全自動(dòng)生化分析儀），試劑使用和儀器相配套的試劑。

1.4 IFN-γ的檢測(cè)方法

使用雙抗夾心的ELISA 方法對(duì)IFN-γ的水平進(jìn)行測(cè)定。試劑均購自Life Technology公司，一抗為生物素化抗體，二抗為辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素。樣本的濃度使用標(biāo)準(zhǔn)品繪制的曲線進(jìn)行計(jì)算。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

所有數(shù)據(jù)使用SPSS13.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

未變異組 6 個(gè)月時(shí) IFN-γ 為（52.77±7.32）pg/mL，變異后為（52.93±6.42）pg/mL；變異組 6 個(gè)月時(shí) IFN-γ 為（52.91±5.34）pg/mL，變異后為（25.32±0.76）pg/mL。 對(duì)照組 IFN-γ 為（7.89±4.88）pg/mL。檢測(cè)結(jié)果顯示治療后6個(gè)月時(shí)未變異組的血清IFN-γ和變異組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），在病毒變異后變異組的IFN-γ水平要明顯低于未變異組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

慢性乙肝感染是一種常見的感染性疾病。臨床通常使用拉米夫定對(duì)患者進(jìn)行治療，這種藥物可以抑制HBV的復(fù)制并能夠改善患者肝臟功能和組織病變的情況。研究報(bào)道長期使用拉米夫定可能發(fā)生HBV的變異并最終導(dǎo)致患者對(duì)拉米夫定產(chǎn)生耐藥的現(xiàn)象，患者血清中的HBV DNA 會(huì)再次轉(zhuǎn)陽而肝炎復(fù)發(fā)。這種現(xiàn)象可能是由于病毒對(duì)藥物的敏感性降低所致。變異后肝炎是否會(huì)復(fù)發(fā)主要和宿主以及病毒的自身免疫應(yīng)答水平相關(guān)。特定的免疫應(yīng)答和其效應(yīng)機(jī)制主要涉及了Th 亞細(xì)胞群所分泌的不同細(xì)胞因子， 比如由Th1 細(xì)胞分泌的IL-2、IL-12、IFN-γ，由Th2分泌的IL-4、IL-5 等，這些細(xì)胞因子都具有調(diào)節(jié)人體體液免疫反應(yīng)的功能，對(duì)于預(yù)防細(xì)胞外病原微生物的感染有重要的作用。在治療慢性乙肝的患者時(shí)，抗病毒是一個(gè)重要的過程，這個(gè)過程可以強(qiáng)化機(jī)體清除病毒的能力，細(xì)胞的免疫應(yīng)答在抗病毒的過程中起著核心的作用。研究證明Th1/Th2 細(xì)胞比例的失衡和慢性乙肝感染有關(guān)[1-5]。

該院的研究發(fā)現(xiàn)使用拉米夫定對(duì)患者治療，出現(xiàn)變異后患者的機(jī)體免疫應(yīng)答功能也隨之改變，變異組的IFN-γ水平要明顯低于未變異組?？赡芎筒《痉N群、抗原、免疫細(xì)胞因子的變化有關(guān)。提示筆者利用監(jiān)測(cè)Th1 和Th2相關(guān)細(xì)胞因子的改變可能有助于及時(shí)發(fā)現(xiàn)患者HBV的耐藥性變化。

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