（昆明醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)院法醫(yī)物證教研室，云南 昆明 650500）

石蠟包埋骨組織切片標(biāo)本是臨床病理和法醫(yī)鑒定中重要的個人實物檔案，由于特殊需要，有時需對石蠟骨組織切片標(biāo)本進行同一認(rèn)定，與常規(guī)的血痕、唾液斑及新鮮組織不同，骨組織經(jīng)甲醛等化學(xué)試劑固定、脫鈣處理后的DNA更容易降解，石蠟包埋的骨組織切片能否有效提取出DNA是成功進行同一認(rèn)定的關(guān)鍵。針對這一問題，本研究采用酚-氯仿法對石蠟包埋骨組織切片進行DNA檢測，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 樣本

某醫(yī)院送檢石蠟包埋骨組織切片5份，分別編號為：1號（骨組織中見腺癌）、2號（骨組織中見可疑上皮樣細胞團）、3號（骨組織中見可疑腫瘤）、4號（骨組織中未見可疑腫瘤）、5號（正常骨組織）。

1.2 方法

按編號把石蠟切片小心剝離，放入1.5mL離心管中，54℃干燥箱中靜置2 h，加入1 mL二甲苯于干燥箱中過夜，以離心半徑5cm，10000r/min，離心5min，棄上清液，留沉淀。沉淀加1.5mL 95%乙醇溶液，室溫靜置 30 min，以離心半徑 5 cm，10 000 r/min，離心5min，棄去上清液。再分別用80%、75%、70%乙醇溶液各洗滌1次。待乙醇揮干后加TES液1.5mL，振蕩，以離心半徑5cm，10000r/min，離心10min，棄去上清液，留沉淀。把上述脫蠟后的樣本用酚-氯仿法提取DNA備用。

采用PCR擴增、PAGE電泳銀染的方法對上述檢材進行分析，檢測9個常染色體基因座分別為D3S1359、D10S2325、D12S391、D19S253、D19S400、FABP、D21S2055、LPL、PLA2A。

2 結(jié)果與討論

1號、2號、3號樣本均獲得了8個常染色體STR基因座的分型結(jié)果，4號樣本獲得了7個常染色體STR基因座的分型結(jié)果，5號樣本獲得全部常染色體STR基因座的分型結(jié)果。因1～4號切片樣本是非正常骨組織，本身存在變異，故未檢出全部基因座可能性大；5號切片樣本是正常組織，故檢出全部基因座。

脫蠟洗滌是能否成功提取DNA非常關(guān)鍵的步驟。對于石蠟包埋組織的DNA提取必須保證石蠟完全融化，處理前先將包埋組織置于54℃恒溫箱中靜置2h，過夜使包埋組織石蠟充分融化，加入足量二甲苯溶解并過夜，保證石蠟充分溶解于二甲苯。用梯度乙醇溶液洗滌，確保有效提取DNA。

骨組織的石蠟切片中提取的DNA通常是低拷貝DNA，DNA降解嚴(yán)重，導(dǎo)致有些基因座不能有效擴增。在法醫(yī)鑒定中微量、污染的檢材，可以使用酚-氯仿法、Chelex-100結(jié)合純化法[1]、多重置換擴增技術(shù)[2]、硅珠法[3]、載體法[4]等DNA提取技術(shù)。

[1]嚴(yán)江偉，唐暉，王靜，等.DNA提取方法和PCR循環(huán)次數(shù)對STR擴增成功率的影響[J].中國法醫(yī)學(xué)雜志，2005，20（3）：151-153.

[2]陳玲，劉超，王慧君，等.多重置換擴增技術(shù)用于法醫(yī)學(xué)微量 DNA 檢測效果[J].證據(jù)科學(xué)，2008，16（6）：752-756.

[3]劉雅誠，王靜，嚴(yán)江偉，等.硅珠法提取骨組織DNA[J].中國法醫(yī)學(xué)雜志，2002，17（1）：38-40.

[4]毛坤云，周建清，顧西蒙，等.載體法檢驗微量檢材DNA[J].法醫(yī)學(xué)雜志，2008，24（6）：439-441.