赫彩霞，王姣姣，高文惠

（河北科技大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，河北 石家莊 050000）

獸藥被廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)中，其主要作用能預(yù)防、診斷和治療動(dòng)物疾病，有目的地調(diào)節(jié)動(dòng)物生理機(jī)能，預(yù)防和控制人畜共患病的產(chǎn)生和傳播，保障公共衛(wèi)生安全。根據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）和世界衛(wèi)生組織（WHO）獸藥殘留聯(lián)合立法委員會(huì)的定義，獸藥殘留是指動(dòng)物產(chǎn)品的任何可食部分所含獸藥的母體化合物及其代謝物，以及與獸藥有關(guān)的雜質(zhì)。包括獸藥在生態(tài)環(huán)境中的殘留和獸藥在動(dòng)物性食品中任何可食部分的殘留[1]。

豬肉是主要?jiǎng)游镄允称分唬彩侨粘Ｉ畹闹饕笔称?。我國是世界最大豬肉生產(chǎn)、加工及消費(fèi)國之一[2]。豬肉中的獸藥殘留危害極大。獸藥的不斷殘留，當(dāng)達(dá)到一定量時(shí)就會(huì)造成機(jī)體一系列的健康問題。肉中的獸藥殘留被人體攝入后，有部分會(huì)隨著人體的代謝循環(huán)排出體外，但也有部分會(huì)在機(jī)體內(nèi)殘留。在國際畜禽產(chǎn)品貿(mào)易激烈的競(jìng)爭下，藥物殘留超標(biāo)是引發(fā)國際貿(mào)易中非貿(mào)易性技術(shù)壁壘障礙的重要因素之一，畜禽產(chǎn)品因獸藥殘留超標(biāo)給我國造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[3]。

對(duì)豬肉中獸藥殘留的監(jiān)測(cè)與控制已是目前國內(nèi)外獸藥研究開發(fā)與使用管理的重要內(nèi)容，為實(shí)現(xiàn)監(jiān)管的目標(biāo)，有效的檢測(cè)方法必不可少。本文綜述了豬肉中多種獸藥殘留的檢測(cè)方法，為提高獸藥殘留檢測(cè)水平提供依據(jù)，促進(jìn)檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，保障豬肉食品安全。

豬肉中的獸藥殘留來源主要有4 個(gè)方面[4]：1）防治豬疾病時(shí)，所用獸藥質(zhì)量不合格、大劑量或超范圍用藥、使用獸藥時(shí)隨意配伍、違反用藥休藥期規(guī)定等情況造成的獸藥殘留。2）生豬飼養(yǎng)過程中由于過量添加抗生素、促生長激素類添加劑，甚至違法使用違禁獸藥，如瘦肉精等而產(chǎn)生的獸藥殘留。3）飼料在加工、調(diào)配、運(yùn)輸和貯藏過程中受到環(huán)境中重金屬或有害物質(zhì)的污染而造成的獸藥殘留。4）肉品本身加工過程中添加有毒物質(zhì)，如亞硝酸鹽等。

獸藥殘留是當(dāng)前食品安全的重要問題，必須采取有效措施，減少和控制獸藥殘留的發(fā)生。建立快速、有效、靈敏、可靠且實(shí)用的獸藥殘留分析方法對(duì)于食品安全具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

1 豬肉中獸藥殘留的檢測(cè)方法

1.1 生物學(xué)方法

生物學(xué)方法包括免疫分析法和微生物學(xué)分析法。

1.1.1 免疫分析法

自20 世紀(jì)80 年代起，隨著對(duì)固相提取技術(shù)研究的不斷深入，推進(jìn)了從分析物中選擇性萃取目標(biāo)產(chǎn)物為目的的新技術(shù)發(fā)展。

免疫分析法主要是利用抗體能夠與相應(yīng)抗原及半抗原發(fā)生自發(fā)的、高選擇性的特異性結(jié)合這一性質(zhì)，通過將特定抗體（或抗原）作為選擇性試劑來對(duì)相應(yīng)待測(cè)抗原（或抗體）進(jìn)行分析測(cè)定的方法[5]。首先，將特異性的抗體固定在擔(dān)體上,制成免疫親和擔(dān)體，然后填入柱中。分析時(shí)，樣品中的待測(cè)組分與吸附劑上的抗體發(fā)生抗原抗體結(jié)合反應(yīng)而被保留在柱上，其他成分則直接被洗脫。隨后，再使用適當(dāng)?shù)南疵撊軇⒋郎y(cè)組分洗脫下來，進(jìn)行下一步的分析[6]。

在免疫分析中，由于受到抗原抗體特異性結(jié)合的影響，獸藥殘留可分為基于針對(duì)同類藥物和針對(duì)不同種類藥物進(jìn)行檢測(cè)，具體方法有酶聯(lián)免疫測(cè)定法、膠體金免疫測(cè)定法、免疫傳感器等。

1）酶免疫測(cè)定法。酶聯(lián)免疫法（ELISA）近十幾年來用于免疫分析研究方興未艾，以ELISA 為代表的免疫生物學(xué)分析方法與色譜類儀器分析方法相比，具有設(shè)備成本低，對(duì)設(shè)備型號(hào)依賴性不強(qiáng)，設(shè)備的更新速度慢，操作簡便、靈敏度高（可達(dá)到儀器檢測(cè)的靈敏度）、利用現(xiàn)成試劑盒建立新方法的速度快、可實(shí)現(xiàn)大量樣品的通量化檢測(cè)等突出特點(diǎn)[7]。

己烯雌酚酶聯(lián)免疫反應(yīng)測(cè)試盒是用于飼料中己烯和其他相關(guān)的類固醇?xì)埩粑锖投浼合┐品拥亩繖z測(cè)。賈濤[8]探討了飼料中的己烯雌酚的酶聯(lián)免疫法檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果表明目前市場(chǎng)上的飼料產(chǎn)品中沒有添加違禁藥物乙烯雌酚，飼料質(zhì)量安全。檢測(cè)平均回收率≥98.3%，相關(guān)系數(shù)（r 值）≥0.9992，離散系數(shù)（CV 值）≤3.4%，實(shí)驗(yàn)檢測(cè)準(zhǔn)確可靠。

2）膠體金免疫測(cè)定法。膠體金免疫技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白，對(duì)蛋白的生物學(xué)活性則沒有明顯的影響。因此，用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A 蛋白）等作為探針，就能對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位，甚至定量研究。特別適合于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色，因此也適合進(jìn)行光鏡觀察。如應(yīng)用銀加強(qiáng)的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。

Tao Le 等[9]基于膠體金的橫向流動(dòng)免疫分析方法，研究出了一種快速、同步檢測(cè)動(dòng)物性食品中環(huán)丙氨嗪和三聚氰胺的方法。這是第一份免疫層析法同時(shí)定量或半定量檢測(cè)環(huán)丙氨嗪和三聚氰胺的報(bào)告。

3）免疫傳感器。免疫傳感器的原理是傳感器的生物敏感層與樣品中的目標(biāo)化合物之間發(fā)生抗原（抗體）對(duì)抗體（抗原）的識(shí)別作用，產(chǎn)生一些物理化學(xué)變化，這些變化通過不同原理的傳感器轉(zhuǎn)換成電信號(hào)或其他形式的信息輸出并記錄。與傳統(tǒng)的檢測(cè)方法相比，生物傳感器檢測(cè)技術(shù)具有選擇性好、靈敏度高、響應(yīng)快、易于操作、高通量及適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)[10]。

萊克多巴胺是人工合成的β-腎上腺素受體激動(dòng)劑中的一種，用于動(dòng)物營養(yǎng)重新配劑，可以同時(shí)提高動(dòng)物的日增重，提高飼料利用率，提高動(dòng)物的蛋白質(zhì)含量。目前正被作為一種新型瘦肉精被一些養(yǎng)豬場(chǎng)使用。不合理的使用此類藥物時(shí)會(huì)導(dǎo)致急性中毒。Xiao Lu 等[11]利用同樣的方法對(duì)豬肉中萊克多巴胺含量進(jìn)行了檢測(cè)，并建議將這種生物傳感器用于超市、食品工廠和食品監(jiān)管機(jī)構(gòu)的萊克多巴胺的檢測(cè)。

免疫傳感器作為一種新興的生物傳感器，將傳統(tǒng)的免疫分析和生物傳感技術(shù)相結(jié)合，正以其特殊的優(yōu)勢(shì)在獸藥殘留快速分析方面發(fā)揮重要作用。

1.1.2 微生物學(xué)分析法

抗生素和激素已被各國廣泛用于治療動(dòng)物性疾病，現(xiàn)在各檢測(cè)單位普遍使用的方法是先用微生物法進(jìn)行篩選，再用色譜法進(jìn)行定性定量檢測(cè)[12]。微生物抑制法是目前抗生素殘留檢測(cè)常用的方法之一，它根據(jù)抗生素對(duì)特異微生物的生理機(jī)能、繁殖代謝的抑制作用來定性或定量確定樣品中抗微生物藥物殘留量，故又稱微生物抑制試驗(yàn)。

Jung-Bin Lee 等[13]研 究 了 農(nóng) 業(yè)和漁業(yè)產(chǎn)品中13 中抗生素的殘留情況。用微生物法檢測(cè)459 個(gè)樣品，發(fā)現(xiàn)有34個(gè)樣品中可能有抗生素殘留，用高效液相色譜-紫外/熒光檢測(cè)對(duì)該34 個(gè)樣品進(jìn)一步分析，豬肉和鰻魚中土霉素含量分別為0.01 和0.05 mg/kg，低于韓國食品法典推薦的最大殘留限量。該研究可為韓國監(jiān)管部門對(duì)于氨芐青霉素的檢測(cè)提供數(shù)據(jù)支撐。

1.2 理化方法

1.2.1 毛細(xì)管電泳

毛細(xì)管電泳具有分離模式多、分離效率高、分析速度快、試劑和樣品用量少、易于調(diào)控、對(duì)環(huán)境污染小等優(yōu)點(diǎn)，是目前發(fā)展最為迅速的分離分析技術(shù)之一，已在很多領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用，可以滿足肉制品、乳制品等多種食品安全檢測(cè)的要求[14]。

為了提高毛細(xì)管電泳檢測(cè)的敏感性，可采用電動(dòng)場(chǎng)放大樣品堆積技術(shù)（FASS）。Xi-Zhou Hu 等[15]采用FASS 技術(shù)，以毛細(xì)管區(qū)帶電泳（CZE）分析豬的肌肉和肝臟中苯并咪唑類藥物的含量，最低檢測(cè)限分別為1.05～10.42 ng/g，加標(biāo)樣品回收率為81.1%～105.4%，RSD 小于9.3%。

1.2.2 高效液相色譜

高效液相色譜是廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、化工、環(huán)境等領(lǐng)域的分析檢測(cè)技術(shù)，在獸藥殘留檢測(cè)方面應(yīng)用普遍。M.M.L.Aerts 等[16]通過采用低壓連續(xù)流動(dòng)模式和柱切換高效液相色譜系統(tǒng)相結(jié)合的方法，開發(fā)了肉，蛋和奶中磺胺類藥物及其他藥物的自動(dòng)化殘留分析程序。

采用分子印跡與液相色譜法相結(jié)合的方法已成功用于獸藥檢測(cè)。Zhenjuan Duan 等[17]在最佳條件下測(cè)得豬、雞和魚的肌肉中喹喔啉-2-羧酸（QCA）的檢出限分別為0.1，0.3，0.1 μg/kg，3-甲基喹喔啉-2-羧酸（MQCA）檢出限分別為0.2，0.3，0.1 μg/kg。

1.2.3 色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

由于色譜和質(zhì)譜靈敏度相當(dāng)，再加上分離效果很好的色譜可以作為質(zhì)譜的進(jìn)樣系統(tǒng)，質(zhì)譜作為色譜的鑒定儀速度快，分離好，應(yīng)用廣。色譜-質(zhì)譜聯(lián)用成為最好的用于分析微量有機(jī)混合物的儀器。

1）液相-質(zhì)譜聯(lián)用。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）技術(shù)以液相色譜作為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜作為檢測(cè)系統(tǒng)，經(jīng)純化后的樣品在液相色譜和質(zhì)譜部分經(jīng)過分離和離子化，經(jīng)由檢測(cè)器得到質(zhì)譜圖。

LC-MS 常用于檢測(cè)磺胺類藥物的殘留情況。Hui Li 等開發(fā)了一種檢測(cè)分析16 種磺胺類藥物，4 種乙酰類代謝產(chǎn)物及甲氧芐啶的新方法，可用于肉類食品中藥物殘留的定性和定量分析。

液質(zhì)聯(lián)用體現(xiàn)了色譜和質(zhì)譜優(yōu)勢(shì)的互補(bǔ)，結(jié)合了色譜對(duì)復(fù)雜樣品的高分離能力和質(zhì)譜的高選擇性，高靈敏度及能夠提供相對(duì)分子量和結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)點(diǎn)，在藥物分析，食品檢測(cè)等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。

2）氣相—質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法是將氣相色譜（GC）和質(zhì)譜（MS）通過接口連接起來，將復(fù)雜化合物分析分離成單組分之后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行成分檢測(cè)。

MeeKyung Kim 等采用同位素稀釋高分辨氣相色譜—高分辨質(zhì)譜法對(duì)智利產(chǎn)豬肉進(jìn)行二噁英殘留檢測(cè)，調(diào)查結(jié)果顯示飼料中的氧化鋅是豬肉中二噁英污染的主要來源，二噁英是在金屬精煉廠收集氧化鋅時(shí)產(chǎn)生的。

2 控制措施與展望

豬肉中獸藥殘留濃度超標(biāo)后果嚴(yán)重，為保障豬肉食品公共安全的權(quán)利，應(yīng)加強(qiáng)豬肉中獸藥殘留的控制需要各部門在獸藥生產(chǎn)、儲(chǔ)藏、銷售、使用等各個(gè)環(huán)節(jié)加強(qiáng)管理；對(duì)于獸藥質(zhì)量、獸藥用量、獸藥使用方法等方面進(jìn)行監(jiān)督；提高飼養(yǎng)人員，獸醫(yī)人員的專業(yè)知識(shí)水平和職業(yè)道德素質(zhì)。另外，還可建立豬肉質(zhì)量追溯體系，對(duì)有質(zhì)量安全問題的豬肉可快速、準(zhǔn)確的找到問題環(huán)節(jié)，并迅速做出應(yīng)急措施，將危害降到最低。

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