海麗萍，王雪芹（1.河南省直屬機關(guān)第一門診部，鄭州450003；2.河南省食品藥品檢驗所，鄭州450003）

在藥品制劑中添加塑化劑可增強囊殼的韌性和片劑薄膜衣的包衣穩(wěn)定，使制劑不易破損且效果較好。但近年來關(guān)于增塑劑鄰苯二甲酸酯類（Phthalates，簡稱PAEs）對環(huán)境造成危害的報道[1-3]屢見不鮮。鄰苯二甲酸酯類被歸類為內(nèi)分泌破壞性物質(zhì)，并表現(xiàn)出生物累積性，可改變?nèi)梭w荷爾蒙中的雌激素水平，從而導致嚴重的健康問題，例如癌癥、生殖及發(fā)育損害等。增塑劑的檢測及污染研究已在國內(nèi)引起人們的重視，但有關(guān)藥品中增塑劑的研究文獻報道較少。國家食品藥品監(jiān)督管理局（以下簡稱藥監(jiān)局）、中國食品藥品檢定研究院于2011年6月召開了“藥品中鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)應急檢驗工作會議”，要求對國家評價性抽驗重點品種進行塑化劑檢測。為了解藥品中鄰苯二甲酸酯類增塑劑的情況，筆者參照有關(guān)要求[4-6]，采用全掃描（SCAN）和選擇離子監(jiān)測（SIR）模式，結(jié)合有機溶劑提取等前處理方法，建立了測定雷尼替丁制劑中鄰苯二甲酸酯類的氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）方法，以期能更準確、更全面地了解藥品中鄰苯二甲酸酯類的污染情況，及時為藥監(jiān)局制訂監(jiān)督方案提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料

1.1 儀器

Finnigan TRAGE-DSQ GC/MS氣質(zhì)聯(lián)用儀（美國熱電公司）。

1.2 藥品與試劑

17成分混標（德國Dr.Ehrenstorfer公司提供，批號：01025HE，每種成分均為1 000 μg/ml，以正己烷為稀釋溶劑）；塑化劑檢測專用3個單標對照品即鄰苯二甲酸二苯酯、鄰苯二甲酸二異壬酯和鄰苯二甲酸二異癸酯（中國食品藥品檢定研究院，純度：以100%計）；甲醇為色譜純。

285批樣品，包括281批雷尼替丁膠囊和4批雷尼替丁片（規(guī)格均為：每粒/片150 mg，批號略，來自國內(nèi)106個不同廠家；4批片劑中有1批來自河南省食品藥品檢驗所）均為各省藥監(jiān)局在全國醫(yī)藥市場上按照正常抽樣程序抽取的流通樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為DB-5MS毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；載氣為氦氣，流速為1.0 ml/min；自動進樣，分流比為10∶1；進樣量為1 μl；進樣口溫度為250℃；柱溫為程序升溫：60℃保持1 min，以20℃/min的速率升至220℃保持1 min，以5℃/min的速率升至300℃保持7 min。

EI（電子轟擊）電離方式；電子轟擊能為70 eV；傳輸線溫度為280℃；離子源溫度為230℃；溶劑延時3.00 min。

試驗中各組分的定性分析采用SCAN模式，掃描質(zhì)量范圍為50～650 amu；定量測定采用SIR模式。

2.2 溶液制備

2.2.1 標準溶液的制備。用甲醇將3個單標對照品分別溶解并稀釋制成1 mg/ml的溶液，再分別吸取17成分混標和3個單標溶液用甲醇稀釋成各含40 μg/ml的混標溶液，依次稀釋成質(zhì)量濃度均為30、20、10、4、2 μg/ml的混合標準工作液。

2.2.2 樣品的制備。取待測樣品研細（囊殼剪碎），取細粉（碎片）1 g置于10 ml離心管中，準確加入甲醇5 ml，超聲30 min，靜置后取上清液（必要時濾過）作為供試品溶液，整個試驗過程不能接觸塑料設(shè)備。

2.3 檢測方法

2.3.1 提取溶劑的選擇。分別試驗了正己烷和甲醇等常用提取溶劑，結(jié)果均對鄰苯二甲酸酯有良好的提取效果?？紤]到甲醇的揮發(fā)性毒性相對較小，且易得到色譜純試劑，故選用甲醇作為提取溶劑。

2.3.2 標準色譜圖。按質(zhì)譜分析條件對20種鄰苯二甲酸酯類的混合標準工作液（質(zhì)量濃度40、4 μg/ml）進行分析，結(jié)果，20種鄰苯二甲酸酯類化合物的總離子流SCAN色譜圖見圖1，SIR色譜圖見圖2。

圖1 20種鄰苯二甲酸酯類總離子流-SCAN色譜圖（40 μg/ml）Fig1 TIC-SCAN chromatograms of 20 kinds of phthalates（40 μg/ml）

圖2 20種鄰苯二甲酸酯類總離子流-SIR色譜圖（4 μg/ml）Fig 2TIC-SIR chromatograms of 20 kinds of phthalates（4 μg/ml）

由圖1、圖2可見，在此條件下20種鄰苯二甲酸酯均能良好地分離。20種化合物的特征離子見表1。

2.3.3 線性范圍與檢測限。利用外標法將峰面積與18種（除鄰苯二甲酸二異壬酯、鄰苯二甲酸二異癸酯外）鄰苯二甲酸酯類濃度之間的關(guān)系進行定量。結(jié)果，18種鄰苯二甲酸酯類檢測質(zhì)量濃度線性范圍為2～40 μg/ml，相關(guān)系數(shù)均大于0.99。

以信噪比為3確定方法檢測限，得18種鄰苯二甲酸酯類的檢測限均大于2 μg/g（g指樣品質(zhì)量）。

2.3.4 精密度試驗。將質(zhì)量濃度為4 μg/ml的20種鄰苯二甲酸酯類混合標準工作液重復進樣6次，結(jié)果，峰面積的RSD均＜10%。

表1 20種鄰苯二甲酸酯的特征檢測離子Tab1 Mass ion of 20 kinds of phthalates

2.3.5 準確度試驗。取本品1 g，加入20種鄰苯二甲酸酯類的混合標準工作液適量，照“2.2.2”項下方法處理樣品，進樣檢測，計算回收率。結(jié)果，18種成分的回收率在79%～99%間。

2.4 鹽酸雷尼替丁制劑中鄰苯二甲酸酯類化合物的檢測結(jié)果

分別對不同廠家的285批樣品（片劑4批、膠囊劑281批），經(jīng)“2.2.2”項下方法處理后，采用SCAN方式對鄰苯二甲酸酯類化合物的種類進行定性，用SIR方式對檢出陽性成分進行定量研究。依據(jù)待測樣品色譜峰的保留時間和特牲離子并結(jié)合計算機NIST譜庫檢索進行定性；分別用表1中的特征離子作為20種成分的監(jiān)測離子，以色譜峰面積外標法進行定量。檢測結(jié)果見表2。

表2 樣品檢測結(jié)果Tab2 Results of the determination of samples

檢測結(jié)果顯示，285批樣品中，有1批檢出鄰苯二甲酸二乙酯，此批樣品為薄膜衣片（此為驗證建立的方法是否可行而制備的陽性對照樣品），原因是在包衣過程中為使包衣效果更好而使用了該物質(zhì)；其他制劑中均未檢出20種塑化劑成分。

3 討論

（1）本文建立的方法適用于口服固體制劑中塑化劑的監(jiān)測，及時為國家藥監(jiān)局對口服固體制劑中塑化劑的監(jiān)管工作提供了強有力的技術(shù)和數(shù)據(jù)支持。檢測限和檢出濃度均能滿足要求。選用既有揮發(fā)性、毒性較小、又容易得到色譜純級別的甲醇作為提取溶劑，利于監(jiān)測工作的進行。

（2）塑化劑成分對液相色譜和液質(zhì)聯(lián)用儀器的污染和殘留比較大；而選用氣相質(zhì)譜聯(lián)用法可以同時測定多種塑化劑成分，同時對儀器和色譜柱的污染和殘留較小，且樣品處理簡單，方法快速、靈敏、簡便易行。由于塑化劑的各成分存留于塑料制品中幾率較大，因此整個試驗過程中禁止使用塑料容器。

（3）本色譜條件下（見圖1、圖2）保留時間在20～25 min的一簇色譜峰為鄰苯二甲酸二異壬酯、鄰苯二甲酸二異癸酯等系列同系物的混合峰，若樣品中明顯檢出色譜峰，應再進一步單標定位檢測；定量時暫不考慮表1中的19、20號峰。

[1]趙文紅.酞酸酯類增塑劑毒理研究進展[J].環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學，2003，20（2）：135.

[2]王小逸，林光桃，容慧明，等.北京地區(qū)家庭中鄰苯二甲酸酯類環(huán)境污染物的調(diào)查[J].環(huán)境與健康雜志，2007，24（10）：820.

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[4]蔡智鳴，史馨，張前龍，等.GC-MS測定人血清中酞酸酯類環(huán)境污染物[J].理化檢驗：化學分冊，2006，42（2）：115.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄31、78.

[6]中國食品藥品檢定研究院.2011年國家評價性抽樣品種塑化劑檢測任務(wù)工作手冊[S].2011.