解世全 ，孟 輝 ，王一淞 ，趙煥君，趙 琳

（1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600；2.沈陽斯佳生物制藥有限公司，遼寧 沈陽 110168）

川芎為常用的活血化瘀藥,來源于傘形科植物川芎Ligusticumchuanxiong Hort的干燥根莖。臨床用于治療心腦血管、高血壓、粥樣動脈硬化、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫等。

60年代開始，輻照滅菌法應(yīng)用于食品行業(yè)。輻照滅菌大量應(yīng)用于醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)，現(xiàn)在應(yīng)用的輻照滅菌通常利用60Co輻射源放出的γ-射線，γ-射線穿透力強(qiáng)，不僅絕大多數(shù)生物體對射線敏感，而且適用于較厚樣品，特別是已包裝密封物品的滅菌，滅菌效果可靠，并且可有效防止“二次污染”。輻照過程中，被滅菌的物品溫度變化小，一般溫度只升高2～3℃，適用于含揮發(fā)性成分或不耐熱藥品的滅菌。用輻照滅菌法對中藥進(jìn)行滅菌處理是解決中成藥微生物污染問題的有效途徑，已受到重視，并被廣泛應(yīng)用。

輻照滅菌法的應(yīng)用越來越廣泛，但是對其在藥物滅菌方面的使用情況還有很多問題需要明確，什么藥物不能使用輻照滅菌法，可以應(yīng)用輻照滅菌法滅菌的藥物應(yīng)該選擇什么輻照劑量進(jìn)行滅菌。進(jìn)而可以加以深入研究輻照滅菌的影響因素，可能引起藥物成分發(fā)生化學(xué)變化的原因，繼而尋找避免或減少藥物成分被破壞的方法等等。

本課題選擇川芎藥材飲片及粉末分別進(jìn)行一定劑量的輻照滅菌，然后對藥材中阿魏酸成分進(jìn)行含量測定，比較滅菌前后阿魏酸的含量變化，考察應(yīng)用輻照滅菌法進(jìn)行滅菌，是否會導(dǎo)致川芎中阿魏酸含量變化，為今后的深入研究打下基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器及試劑

agilent 1100型安捷倫高效液相儀（美國安捷倫公司）；CP225D型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；DS3120型超聲波清洗器（Tianjin Do-Chrom Technology Co.Ltd）；手提式粉碎機(jī)（浙江中藥機(jī)械有限公司）。

無水甲醇（A.R.）（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；無水甲醇（C.P.）（天津市科密歐化學(xué)制劑有限公司）；H3PO4（A.R.）（津市大茂化學(xué)制劑廠）

1.2 藥材及對照品

川芎藥材，購于安徽亳州藥材市場，為傘形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort的干燥根莖，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)許亮副教授鑒定為正品。

阿魏酸對照品（購于中國藥品生物制品檢定所）。

2 實驗內(nèi)容

2.1 色譜條件

色譜柱：Accurasil-C18（250mm×4.6mm 5um）色譜柱；流動相：甲醇-水-磷酸（30∶70∶0.05）；檢測波長：320nm；體積流量：1.0mL·min-1；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。

在該色譜條件下,阿魏酸色譜峰達(dá)到基線分離。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的阿魏酸適量置于5mL容量瓶內(nèi)，加甲醇定容，制成6.67μg·mL-1的阿魏酸對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 藥品的處理 取川芎飲片若干克，分為3份，將其中一份粉碎約80目，然后將粉末與一份飲片經(jīng)10K格瑞劑量滅菌制成經(jīng)輻照滅菌的粉末及飲片，另一份為未滅菌飲片。

2.3.2 供試品的制備 取3份川芎樣品粉末，各約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲30min，再稱定質(zhì)量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置，取上清液用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性范圍考察

取阿魏酸樣品溶液，依選定的色譜條件進(jìn)樣測定，進(jìn)樣量在4、8、12、16、20μL記錄色譜圖，讀取峰面積，以進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸,得回歸方程為Y=5012.3X+21.596，r=0.9994。

結(jié)果表明，阿魏酸含量在0.02268～0.11340μg范圍內(nèi)，阿魏酸的含量與其峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 精密度考察 取未滅菌的川芎藥材0.5g，按照上述供試品溶液配制的方法制備成供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄阿魏酸的峰面積值，計算其RSD值為1.66%，結(jié)果表明精密度良好。

2.5.2 穩(wěn)定性考察 取川芎粉末，按上述供試品溶液配制的方法制備成供試品溶液，密閉、避光于室溫放置，分別于0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣，測定阿魏酸峰面積值，計算RSD值為1.43%，結(jié)果表明供試品溶液在室溫避光放置10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.3 重復(fù)性試驗 取川芎粉末，精密稱取6份，每份約0.5g，精密稱定，按2.3.2項下方法制備成供試品溶液，進(jìn)行測定，計算RSD值為1.17%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.5.4 加樣回收率 取已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的同批川芎粉末約0.25g，精密稱取6份，置50mL具塞錐形瓶中，加入0.4 mL阿魏酸對照品溶液（6.67μg·mL），再精密加入70%甲醇25mL，按上述供試品溶液配制的方法制備成6份供試品溶液，進(jìn)樣，測定，根據(jù)阿魏酸原有量、測得量、加入量計算平均回收率為101.387%，其RSD為1.52%。結(jié)果表明，加樣回收率良好。

2.6 含量測定

分別各取3種川芎藥材粉末，各約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲30min，再稱定稱質(zhì)量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置，取上清液用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，即得樣品，進(jìn)樣，測定，數(shù)據(jù)見表1。

表1 含量測定Tab.1 Content determination

2.7 結(jié)果分析

采用excel軟件進(jìn)行分析，通過滅菌藥材與未滅菌藥材阿魏酸含量方差分析可知，F(xiàn)值大于F臨界值，P值小于0.05，說明兩組數(shù)據(jù)之間存在著顯著性差異。

通過滅菌藥材與滅菌粉末中阿魏酸含量方差分析表可知，F(xiàn)值大于F臨界值，P值小于0.05，說明兩組數(shù)據(jù)之間有顯著性差異。

3 結(jié)果與討論

（1）將阿魏酸對照品溶液在紫外分光光度計上掃描,發(fā)現(xiàn)在320nm處有最大吸收且干擾較少,故選擇320nm為檢測波長。阿魏酸對照品不穩(wěn)定,受溫度、光線等影響易發(fā)生轉(zhuǎn)化,含量測定時加入一定量的酸可增加阿魏酸的穩(wěn)定性。

（2）在提取溶劑的考察上，分別比較了體積分?jǐn)?shù)50%、60%、70%、80%、90%和100%的甲醇及水等,優(yōu)選出70%的甲醇為溶劑。另外全面考察了不同提取方式、溫度、時間、次數(shù)等諸多因素。所建立的方法簡便可行,易于操作,重現(xiàn)性好。

4 結(jié)論

（1）說明通過輻射滅菌法對川芎進(jìn)行滅菌，其中阿魏酸含量會發(fā)生顯著性降低。故以阿魏酸為指標(biāo)說明川芎藥材不適宜于采用10K格瑞劑量的輻照滅菌法進(jìn)行滅菌。

（2）以粉末形式與藥材形式進(jìn)行滅菌，阿魏酸含量亦有明顯差異，與輻射滅菌穿透力強(qiáng)的特點(diǎn)不吻合。有待于進(jìn)一步研究。

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