徐崢嶸

（甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅 蘭州 730000）

EM是一種復(fù)合微生物菌及相關(guān)技術(shù)，EM中包含了以乳酸菌、酵母菌、光合菌為主的多種多樣有益微生物，通過獨(dú)特的培養(yǎng)技術(shù)，將這些性質(zhì)不同（好氧、厭氧）的微生物有機(jī)地整合在一起，各微生物之間形成互生共長(zhǎng)的依存關(guān)系，形成一個(gè)有機(jī)整體，發(fā)揮“有益分解”作用、“抗氧化”作用［1］。微生物EM菌的主要成分 ：光合菌群、乳酸菌群、酵母菌群（好氣性）、革蘭氏陽性放線菌群（好氣性）、發(fā)酵系的絲狀菌群（嫌氣性）等，各類微生物都各自發(fā)揮著重要作用，核心作用是光合細(xì)菌和嗜酸性乳桿菌為主導(dǎo)，其合成能力支撐著其他微生物的活動(dòng)，同時(shí)也利用其他微生物產(chǎn)生的物質(zhì)，形成共生共榮的關(guān)系，保證EM狀態(tài)穩(wěn)定，功能齊全，發(fā)揮出集團(tuán)軍作戰(zhàn)的強(qiáng)大能量。

EM的主要功能是造就良性生態(tài)。只要施用恰當(dāng)，它就會(huì)與所到之處的良性力量迅速結(jié)合，產(chǎn)生抗氧化物質(zhì)，清除氧化物質(zhì)，消除腐敗，抑制病原菌，形成適于種公牛吸收的有益物質(zhì)，如氨基酸、有機(jī)酸、多醣類、各種維生素、各種生化酶、促生長(zhǎng)因子、抗生素和抗病毒物質(zhì)等，提高動(dòng)植物的免疫功能，促進(jìn)健康生長(zhǎng).可治療消化系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、能有效防止疾病，促進(jìn)生長(zhǎng)［2］。我們用EM技術(shù)技術(shù)處理的種公牛飼料進(jìn)行飼喂可起到事半功倍的效果。

1 試驗(yàn)地點(diǎn)

甘肅省武威市某種公牛場(chǎng)。

2 材料與方法

2.1 前期EM飼草料的準(zhǔn)備

將用于飼喂種公牛的精料和飼草用EM技術(shù)進(jìn)行發(fā)酵，優(yōu)質(zhì)微貯飼料拿到手里感到很松散，質(zhì)地柔軟濕潤(rùn)。發(fā)粘或粘到一塊，以及雖松散，但干燥粗硬，均屬不良飼料。優(yōu)質(zhì)微貯青玉米秸稈飼料色澤呈橄欖綠，麥稻秸稈呈金黃褐色。具有醇香和果香氣味，并具有弱酸味，若有強(qiáng)酸味，表明醋酸過多，這是由于水分過多和高溫發(fā)酵造成。若有腐臭、發(fā)霉味不能飼喂。

2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及有關(guān)指標(biāo)的測(cè)定

2.2.1 種公牛為家畜繁育中心種公牛站飼養(yǎng)的西門塔爾種公牛 從采精種公牛中隨機(jī)抽出20頭，年齡與體況相近，分為兩組，第一組10頭，（牛號(hào)從001至010）為對(duì)照組按照正常的飼喂方式進(jìn)行飼喂，第二組10頭（牛號(hào)從011至020）用經(jīng)過EM技術(shù)處理的飼草料進(jìn)行飼喂，60d以后將量化管理的飼養(yǎng)結(jié)果和采得的精液的鮮精活率、密度、精液量、凍后活率、生產(chǎn)凍精數(shù)、頂體完整率進(jìn)行對(duì)比（見表2和表3）。依據(jù)冷凍精液生產(chǎn)GB4143－2008。

2.2.2 內(nèi)容和方法 精液的采集：當(dāng)公牛性欲旺盛時(shí)采精，采精員右手持假陰道，站在公牛右后方，當(dāng)公牛起跳，前肢爬上臺(tái)牛后左右手配合將公牛陰莖自然地引入假陰道內(nèi)，公牛向前一沖即完成射精動(dòng)作，待公牛前肢落地，緩慢地把假陰道脫出［3］。打開活塞放氣，小心取下集精管，迅速轉(zhuǎn)移至精液檢測(cè)室進(jìn)行檢測(cè)。

精液的檢查：先對(duì)所采得的精液進(jìn)行感官評(píng)定，新鮮精液應(yīng)呈乳白稍帶黃色或奶油色不透明液體，雜質(zhì)太多的精液要廢棄。取一滴原精液加蓋玻片后在400倍的恒溫（37℃）可視顯微鏡下觀察呈直線運(yùn)動(dòng)精子的百分?jǐn)?shù)，活率≥65%可進(jìn)行稀釋封裝（GB 4143－2008）。精液密度的測(cè)定目前常用精子密度測(cè)定儀（法國MIV公司生產(chǎn)），密度測(cè)定儀根據(jù)分光光度計(jì)測(cè)定原理和計(jì)算功能，能迅速測(cè)定出每毫升精液中精子密度，并且可以提供相關(guān)的數(shù)據(jù)如應(yīng)加的稀釋液量、可封裝細(xì)管量等［4］。

精液的稀釋 目前普遍采用的是進(jìn)口稀釋液（德國minitube公司生產(chǎn)），一步稀釋法，認(rèn)為對(duì)精液冷凍后活力影響不大［5］。將稀釋液按照1∶4的比例進(jìn)行稀釋，加稀釋液要緩慢、輕輕搖勻，稀釋液溫度與精液溫度要等溫。凡是精液一降溫、平衡，其溫度不允許再回升［6］。

精液的分裝：使用細(xì)管精液分裝機(jī)（法國IMV卡蘇公司生產(chǎn)），是一套在完成灌裝與封口后即可進(jìn)行噴墨印字的一體化設(shè)備，工作程序在盡可能不被外界污染的情況下完成，對(duì)細(xì)管精液衛(wèi)生質(zhì)量保證極為有利［7］。細(xì)管的容量為0.25mL。

精液的平衡：平衡是稀釋后精子在降溫和在低溫下的一個(gè)適應(yīng)過程，是精細(xì)胞重建離子平衡變化的過程［8］，這個(gè)過程是必須的，不能省略。將分裝完畢的細(xì)管精液碼放在平衡架上，放入4℃的平衡柜中降溫平衡。平衡的時(shí)間一般為2～4h。

精液的冷凍：精子冷凍采用精液冷凍儀（法國IMV卡蘇公司生產(chǎn)），是由計(jì)算機(jī)控制的全自動(dòng)冷凍容器，其理論依據(jù)是在冷凍降溫的過程中，因?yàn)榫?xì)胞內(nèi)的冰晶的形成，使細(xì)胞內(nèi)外發(fā)生一系列的物理變化［9］，不同程度損害精細(xì)胞，因此需要這個(gè)降溫冷凍必須快速越過冰晶危險(xiǎn)區(qū)域（－0～－60℃）進(jìn)入玻璃化狀態(tài)（－130℃以下）［10］這時(shí)可是一種非結(jié)晶的固態(tài)，其性質(zhì)更接近于液態(tài)使精細(xì)胞免受冰結(jié)晶凍害。公牛精液冷凍過程降溫如下表1［11］。

表1 種公牛精液冷凍降溫對(duì)照表

表2 精液品質(zhì)檢測(cè)

3 試驗(yàn)結(jié)果

應(yīng)用excel計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行分析。試驗(yàn)按照牛冷凍精液生產(chǎn)規(guī)則進(jìn)行生產(chǎn)，由上表2、3可以看出，種公牛飼喂經(jīng)過EM技術(shù)處理的飼料后精液品質(zhì)有明顯的改善，組1的鮮精平均活率63%低于試驗(yàn)組2的平均活率67.6%，經(jīng)檢驗(yàn)P＜0.05說明差異顯著，精液密度16.85億／mL與16.65億／mL差異不顯著，精液量對(duì)照組4.33mL，試驗(yàn)組7.06mL，差異顯著，凍后活率25.35%與38.3%，P＜0.05差異顯著，平均凍精數(shù)1組214.4劑，2組425.5劑。頂體完整率16.88%，14.5也差異顯著。

表3 精液品質(zhì)檢測(cè)

4 結(jié)論

將種公牛飼草料用EM技術(shù)處理后，種公牛的精液品質(zhì)有明顯的改變，可使鮮精活率有明顯的提高，種公牛的精液量增加，精子的耐凍能力（精子復(fù)蘇率、凍后活率）提高，凍精產(chǎn)量增加，精子的畸形率下降。但對(duì)提高精液的密度沒有大的改觀。所以在現(xiàn)今飼草料價(jià)格比較昂貴，品種單一，質(zhì)量較差的情況下將飼草料特別是粗飼料用EM技術(shù)發(fā)酵后進(jìn)行飼喂，不失為一種較好的辦法，可降低飼養(yǎng)成本，提高飼料報(bào)酬。

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