沙 莎，陳月云，鐘 民，李 勁，王安才，王 星

原發(fā)性高血壓(essential hypertension，EH)是引起各種心臟血管疾病的主要危險(xiǎn)因素之一。炎癥因子是一類由免疫細(xì)胞及非免疫細(xì)胞分泌，參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、修復(fù)和免疫過(guò)程。希臘ATTICA 研究顯示，與正常血壓組相比較，高血壓前期組患者血液中C 反應(yīng)蛋白 (CRP)、腫瘤壞死因子α(TNF－α)、同型半胱氨酸等與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的一些氧化應(yīng)激標(biāo)志物和炎癥標(biāo)志物水平顯著增高［1］。他汀類藥物能夠降低血脂水平，具有快速增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞功能，穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣斑塊的作用，然而對(duì)高血壓患者心臟重構(gòu)的影響及作用機(jī)制尚不明確。本研究通過(guò)觀察高血壓患者血清球蛋白重鏈14(MHC14)、干擾素調(diào)節(jié)因子－4 (IRF －4)、熱休克蛋白70(HSP70)、熱休克蛋白22 (HSP22)mRNA 表達(dá)及左室結(jié)構(gòu)與功能的變化，旨在探討EH 的發(fā)病機(jī)制及阿托伐他汀的調(diào)脂外作用?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選擇我院門診2011 年首次就診的高血壓患者60 例，均符合《中國(guó)高血壓防治指南2010》［2］診斷標(biāo)準(zhǔn)，并排除繼發(fā)性高血壓，肝、腎、內(nèi)分泌疾病及感染性疾病。選擇同期來(lái)我院體檢的健康志愿者22 例。本試驗(yàn)通過(guò)皖南醫(yī)學(xué)院附屬弋磯山醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。所有受試者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 分組 將符合條件的高血壓患者作為高血壓組(n =60);再將高血壓組隨機(jī)分為:常規(guī)降壓組(n =30):給予常規(guī)降壓(根據(jù)患者血壓水平及檢查指標(biāo)選擇適合降壓藥);常規(guī)降壓+他汀組(n =30):除根據(jù)同樣原則選擇降壓藥外，每晚睡前口服阿托伐他汀(商品名:立普妥，輝瑞制藥有限公司生產(chǎn))20mg，療程均為24 周;將健康體檢者作為對(duì)照組(n=22)。

1.2.2 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT－PCR) 取由臨床采集患者肝素抗凝血樣2ml，采用Trizol 一步法提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA。取2μg 總RNA 作為模板，oligo (dT)作引物，反轉(zhuǎn)錄酶為AMV，反應(yīng)體系為50 μl。PCR 反應(yīng)條件(見(jiàn)表1)。各反應(yīng)條件均經(jīng)過(guò)優(yōu)化，使5 個(gè)指標(biāo)的循環(huán)次數(shù)均處于線性期內(nèi)。配制1%瓊脂糖凝膠，加入終濃度為0.5 μg/ml 的溴化乙錠(EB);取5μl PCR 終產(chǎn)物及DNA marker，以1 ×TAE 為緩沖液，電壓80V，電泳20min，采用Tanon 凝膠成像與分析系統(tǒng)ImageSystem Ver 4.0 測(cè)定擴(kuò)增產(chǎn)物條帶平均光密度值。結(jié)果以目的基因mRNA 與3 磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)mRNA的比值表示，進(jìn)行半定量比較。引物均由上海生工合成，RT－PCR試劑購(gòu)自上海申能博彩生物科技有限公司。

表1 PCR 反應(yīng)條件Table 1 PCR reaction conditions

1.3 監(jiān)測(cè)指標(biāo) 監(jiān)測(cè)用藥前及用藥后8 周、16 周、24 周兩組肝功能、腎功能及肌酸激酶的變化(以明確用藥后有無(wú)明顯的肝腎損害及肌病等不良反應(yīng))。使用iE33 彩色多普勒超聲診斷儀分別測(cè)定兩組治療前后左室內(nèi)徑(LV)、左室后壁厚度(LVPW)、左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)、左房室瓣舒張期血流頻譜(E/A)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以(±s)表示，組間比較采用t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性研究采用直線相關(guān)分析，以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組基本資料比較 常規(guī)降壓組和常規(guī)降壓+他汀組性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、高血壓病程、吸煙、飲酒、血壓、血脂及治療期間使用降壓藥種類比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05，見(jiàn)表2)。

2.2 兩組治療前后血壓、血脂及心臟結(jié)構(gòu)功能指標(biāo)比較 治療前兩組患者血壓、血脂及心臟結(jié)構(gòu)功能指標(biāo)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P ＞0.05)。治療24 周后，兩組三酰甘油、LVPW、LVEF 比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);而血壓、LV、E/A 比較。差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05，見(jiàn)表3)。

表2 兩組基本資料比較Table 2 Comparison of basic information between two groups

表3 兩組治療前后血壓、血脂及心臟結(jié)構(gòu)功能指標(biāo)比較(±s)Table 3 Comparison of blood pressure，blood lipid and cardiac structure and function index between two groups before and after treatment

表3 兩組治療前后血壓、血脂及心臟結(jié)構(gòu)功能指標(biāo)比較(±s)Table 3 Comparison of blood pressure，blood lipid and cardiac structure and function index between two groups before and after treatment

注:LV:左室內(nèi)徑;LVPW:左室后壁厚度;LVEF:左室射血分?jǐn)?shù);E/A:左房室瓣舒張期血流頻譜

組別 例數(shù) 收縮壓(mmHg)治療前治療后常規(guī)降壓組 30 155±13 132±7 96±12 75±7 2.5±0.5 2.4±0.8 48.3±4.1 47.6±4.1 8.9±1.3 8.8±1.4 57.0±4.3 58.0治療后舒張壓(mmHg)治療前治療后三酰甘油(mmol/L)治療前治療后LV(mm)治療前治療后LVPW(mm)治療前治療后LVEF(%)治療前治療后E/A治療前±4.3 0.52±0.15 0.58±0.11常規(guī)降壓+他汀組 30 156±13 129±6 96±12 72±7 2.4±0.6 2.0±0.7 47.2±4.1 46.3±4.1 8.7±1.3 8.0±1.3 55.0±4.4 61.0±4.3 0.56±0.16 0.63±0.14

2.3 各組患者血清MHC14、IRF －4、HSP70、HSP22 mRNA表達(dá) 高血壓組血清MHC14、IRF －4、HSP70、HSP22 mRNA表達(dá)與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.01)。24 周后，常規(guī)降壓+他汀組血清MHC14、IRF－4、HSP70、HSP22 mRNA 表達(dá)與常規(guī)降壓組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05，見(jiàn)圖1、2)。

2.4 血清MHC14、IRF －4、HSP70、HSP22 mRNA 表達(dá)與心臟結(jié)構(gòu)和功能相關(guān)性分析 24 周后，常規(guī)降壓+他汀組血清MHC14、IRF－4、HSP70、HSP22 mRNA 表達(dá)與LVPW 呈正相關(guān)(r 分別為0.386、0.429、0.571、0.607，P ＜0.05)，與LVEF 呈 負(fù) 相 關(guān) (r 分 別 為－ 0.415、 － 0.393、 － 0.528、－0.497，P ＜0.05，見(jiàn)圖3)。

圖1 mRNA 表達(dá)電泳圖譜Figure 1 The electrophoresis of mRNA expression

圖2 各組(MHC14，IRF－4，HSP70，HSP22)/GAPDHFigure 2 (MHC14，IRF－4，HSP70，HSP22)/GAPDH in each group

圖3 (MHC14，IRF－4，HSP70，HSP22)/GAPDH 與LVPW、LVEF的相關(guān)性分析Figure 3 The correlation analysis of (MHC14，IRF － 4，HSP70，HSP22)/GAPDH and LVPW，LVEF

3 討論

相關(guān)研究表明，EH 是一種低度全身性炎性反應(yīng)狀態(tài)(low－grand systemic imflammation condition)，表現(xiàn)為炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生異常和炎性信號(hào)通路的激活［3］。已證實(shí)超敏C 反應(yīng)蛋白(hs－CRP)、白介素1 (IL －1)、TNF －α 等炎性因子可通過(guò)細(xì)胞毒作用，破壞血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的完整性，導(dǎo)致血管重構(gòu)阻力增加，引起血壓增高。Trytko 等［4］發(fā)現(xiàn)CRP 水平增高與左心室質(zhì)量指數(shù)(left ventricular mass index，LVMI)增高密切相關(guān)，檢測(cè)患者CRP 水平有助于評(píng)估左心室肥厚(left ventricular hypertrophy，LVH)。EH 患 者h(yuǎn)s － CRP、IL－1、TNF－α 水平與動(dòng)脈血管僵硬度、冠狀動(dòng)脈舒張功能障礙、LVH 及尿微量清蛋白呈正相關(guān)［5－8］。

MHC 是將儲(chǔ)存在ATP 中的化學(xué)能轉(zhuǎn)化為機(jī)械能的分子馬達(dá)，與信號(hào)傳導(dǎo)、肌肉收縮、趨化性遷移和細(xì)胞形狀的改變等有關(guān)［9］。老年人單核細(xì)胞肌球蛋白減少，可能影響到免疫細(xì)胞的許多功能［10］。

IRF 是一類多功能的轉(zhuǎn)錄因子，在干擾素轉(zhuǎn)錄調(diào)控，病原體免疫反應(yīng)，細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，細(xì)胞增殖調(diào)控以及造血干細(xì)胞的發(fā)育、淋巴細(xì)胞的分化，先天性免疫和適應(yīng)性免疫調(diào)控等方面都起著重要的作用。IRF －4 結(jié)合蛋白(IRF －4 binding protein，IBP)是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的與Th 活化及Th2 極性分化相關(guān)的分子，為自身免疫調(diào)控性疾病的研究提供了新的線索。

HSP 分為很多亞組，在心血管組織中高度表達(dá)，通過(guò)穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)變性的蛋白質(zhì)、減輕細(xì)胞內(nèi)的離子紊亂、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能、干擾應(yīng)激所啟動(dòng)的細(xì)胞凋亡程序等方面來(lái)發(fā)揮作用，作為一重要的抗原被免疫系統(tǒng)識(shí)別，觸發(fā)自身免疫反應(yīng)，參與EH 的發(fā)生和發(fā)展。

本研究發(fā)現(xiàn)高血壓組與對(duì)照組相比，血清MHC14、IRF－4、HSP70、HSP22 mRNA 表達(dá)均有不同程度升高，推測(cè)這可能與免疫炎性損傷參與高血壓的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，因此積極控制血壓亦是對(duì)自身免疫反應(yīng)的保護(hù)性調(diào)控。

他汀類作為調(diào)脂藥物，其調(diào)脂以外的心血管保護(hù)作用近年來(lái)日益受到重視。人們從大量的臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，使用他汀類藥物治療有利于血壓的控制［11］，使收縮壓及舒張壓均明顯下降［12］。李凌等［13］研究發(fā)現(xiàn)阿托伐他汀可部分預(yù)防EH左心室重構(gòu)，其機(jī)制可能與誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡、抑制心肌結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)蛋白表達(dá)有關(guān)。張雪娟等［14］研究表明阿托伐他汀可以防止壓力負(fù)荷增大導(dǎo)致的心肌肥厚，這種保護(hù)作用可能與抑制白介素18 (IL－18)，心肌營(yíng)養(yǎng)素1 (CT－1)等炎性因子的表達(dá)有關(guān)，其抗心肌肥厚作用可能是通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)實(shí)現(xiàn)的，因此使用他汀類藥物對(duì)高血壓早期干預(yù)，可望減輕高血壓LVH 和對(duì)心功能改善起一定作用。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，治療24 周后與常規(guī)治療組相比，他汀治療組血清MHC14、IRF－4、HSP70、HSP22 mRNA 表達(dá)均有不同程度降低，且與LVPW 呈正相關(guān)，與LVEF 呈負(fù)相關(guān)。這與上述阿托伐他汀通過(guò)抑制免疫炎癥損傷，改善高血壓患者心室重構(gòu)及功能結(jié)論一致。

目前炎癥過(guò)程導(dǎo)致EH 的病因仍不清楚，更多炎癥因子與EH 之間的關(guān)系也需要進(jìn)一步的探討。更好地認(rèn)識(shí)EH 的炎癥機(jī)制，有助于研究與制定更好的治療策略，以減少EH 的發(fā)病率、病死率，并且預(yù)防以及延緩EH 患者的靶器官損害。監(jiān)測(cè)血清MHC14、IRF－4、HSP70、HSP22 mRNA 等相關(guān)炎性指標(biāo)對(duì)高血壓進(jìn)行積極干預(yù)，可能為血壓控制、靶器官保護(hù)以及心臟結(jié)構(gòu)及功能的改善提供理論依據(jù)。

申明:本研究與藥品提供公司無(wú)利害關(guān)系。

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