趙衛(wèi)，周盛杰

（1.中山市沙溪隆都醫(yī)院，廣東中山528471；2.廣東省第二中醫(yī)院，廣東廣州510095）

·論著·

乙型肝炎患者血清標(biāo)志物與HBV-DNA含量的相關(guān)性研究

趙衛(wèi)1，周盛杰2

（1.中山市沙溪隆都醫(yī)院，廣東中山528471；2.廣東省第二中醫(yī)院，廣東廣州510095）

目的探討乙型肝炎患者血清標(biāo)志物與HBV-DNA定量檢測之間的關(guān)系及其臨床意義。方法選擇258例經(jīng)我院確診的乙肝患者，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測患者體內(nèi)血清標(biāo)志物，采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測HBV-DNA含量，比較血清標(biāo)志物與HBV-DNA檢測量之間的關(guān)系。結(jié)果HBsAg+/HBeAg+組與HBsAg+/ HBeAg+/抗-HBc+組HBV-DNA陽性檢出率與含量最高；HBsAg+/抗-HBe+/抗-HBc+、HBsAg+/HBc+、抗-HBs+/抗HBe+/抗-HBc+、抗-HBe+/抗-HBc+、抗-HBs+5種感染模式下HBV-DNA陽性檢測率分別為62.96%、52.94%、37.50%、27.27%、4.35%。結(jié)論乙肝患者血清HBV-DNA陽性率與血清標(biāo)志物存在相關(guān)性；同時(shí)進(jìn)行血清標(biāo)志物的檢測與HBV-DNA定量檢測能較準(zhǔn)確直接地反應(yīng)病毒復(fù)制程度及傳染強(qiáng)度，對于早期診斷、治療及預(yù)后判斷具有指導(dǎo)意義。

乙肝患者；血清標(biāo)志物；HBV-DNA；ELISA；FQ-PCR；相關(guān)性

乙型肝炎(簡稱“乙肝”)是一種以肝臟炎性病變?yōu)橹骼奂捌鞴贀p害的傳染性病癥疾病，常用的診斷指標(biāo)有HBV-DNA與血清標(biāo)志物(乙肝二對半)。為探討乙肝患者體內(nèi)血清標(biāo)志物與HBV-DNA定量之間的關(guān)系，本文選擇258例乙肝患者，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測血清標(biāo)志物，采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR)技術(shù)檢測其血清HBV-DNA的含量，旨在為臨床診斷、治療及預(yù)后判斷提供參考數(shù)據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2008年2月至2009年4月經(jīng)我院確診的258例乙肝患者，男165例，女93例，年齡18～65歲，平均(45.2±9.8)歲；所有患者均符合2000年西安修訂的《病毒性肝炎防治方案》診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]。抽取空腹靜脈血2 ml，分離血清后冷凍保存待測。根據(jù)HBV血清標(biāo)志物感染模式的不同，分為HBsAg+/HBeAg+/抗-HBc+、HBsAg+/抗-HBe+/抗-HBc+、HBsAg+/HBc+、HBsAg+/HBeAg+、抗-HBs+/抗HBe+/抗-HBc+、抗-HBe+/抗-HBc+、抗-HBs+7組。

1.2 方法HBV血清標(biāo)志物采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測，選擇上?？迫A生物公司生產(chǎn)的試劑，嚴(yán)格按照說明書要求操作；HBV-DNA檢測選用美國ABI公司生產(chǎn)的7300型PCR儀，選用中山醫(yī)科大學(xué)達(dá)安公司生產(chǎn)的試劑(批號：2003010)，檢測嚴(yán)格按照PCR儀和試劑說明操作，陽性結(jié)果＞1×103copies/ml。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用Excel數(shù)據(jù)庫和SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量結(jié)果用HBV-DNA對數(shù)表示，計(jì)量數(shù)量用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，行t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBV-DNA水平比較檢驗(yàn)結(jié)果顯示，不同感染模式下，HBV-DNA含量表現(xiàn)是不一樣的，HBsAg+/HBeAg+、HBsAg+/HBeAg+/抗-HBc+平均值較高，均在7 coppies/ml以上，其次為HBsAg+/HBc+、HBsAg+/抗-HBe+/抗-HBc+二種感染模式，平均值在4.5 coppies/ml左右，最少為抗-HBs+/抗HBe+/抗-HBc+、抗-HBe+/抗-HBc+、抗-HBs+三種模式，平均值在4 coppies/ml以上，見表1。

表1 7種感染模式下HBV-DNA水平檢測結(jié)果

表1 7種感染模式下HBV-DNA水平檢測結(jié)果

注：HBsAg+/HBeAg+/抗-HBc+、HBsAg+/HBeAg+與HBsAg+/抗-HBe+/抗-HBc+、HBsAg+/HBc+比較，P＜0.05；HBsAg+/HBeAg+/抗-HBc+、HBsAg+/HBeAg+與抗-HBs+/抗HBe+/抗-HBc+、抗-HBe+/抗-HBc+、抗-HBs+比較，P＜0.01；BsAg+/抗-HBe+/抗－HBc+、HBsAg+/HBc+與抗-HBs+/抗HBe+/抗-HBc+、抗-HBe+/抗-HBc+、抗－HBs+比較，P＜0.05。

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2.2 HBV-DNA陽性率比較HBsAg+/HBeAg+/抗-HBc+、HBsAg+/HBeAg+陽性檢出率最高，HBsAg+/抗-HBe+/抗-HBc+、HBsAg+/HBc+陽性檢出率次之，抗-HBs+23例中僅檢測出1例，陽性檢出率最低，見表2。

表2 7種感染模式下HBV-DNA陽性率檢測結(jié)果比較

3 討論

乙肝血清標(biāo)志物反映出機(jī)體免疫狀態(tài)以及病毒結(jié)構(gòu)蛋白成分，難以準(zhǔn)確表述乙肝病毒的復(fù)制活躍程度。采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測技術(shù)能夠準(zhǔn)確地檢測出乙肝病毒的復(fù)制數(shù)，可以定量測量乙肝病毒核酸含量[2]，同時(shí)PCR管理力度的加強(qiáng)以及嚴(yán)格的準(zhǔn)入制度，使得檢測結(jié)果更加可靠。拉米夫定的應(yīng)用，誘發(fā)了乙肝病毒變異株的產(chǎn)生[3]，導(dǎo)致乙肝血清標(biāo)志物檢測越來越復(fù)雜。因此準(zhǔn)確地檢測出乙肝病毒感染的HBV-DNA含量，對于臨床早期診斷、判定以及治療有著非常重要的意義。

本組資料中，16例HBsAg+/HBeAg+組HBeAg陽性患者，HBV-DNA檢測均呈陽性，HBV-DNA對數(shù)值(7.85±2.12)copies/ml；HBsAg+/HBeAg+/抗-HBc+組HBV-DNA陽性檢出率為95.45%(84/88)，HBV-DNA對數(shù)值為(7.08±2.65)copies/ml，與武堅(jiān)銳等[4]報(bào)道的97.1%基本一致，顯示出HBeAg陽性與HBV-DNA檢出率的一致性，證實(shí)了HBeAg陽性可以作為反應(yīng)病毒復(fù)制的指標(biāo)。4例沒有檢出HBV-DNA，可能與病毒未釋放到血清中有關(guān)；二組HBV-DNA對數(shù)值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，表明病毒感染開始模式為HBsAg+、HBeAg+、抗-HBc+[5]。

27例HBsAg+/HBc+感染模式中陽性檢出率為62.96%，HBV-DNA對數(shù)值為(4.68±1.52)copies/ml；85例HBsAg+/抗-HBe+/抗-HBc+感染模式中陽性檢出率為52.94%，HBV-DNA對數(shù)值為(4.42±2.14)copies/ml。表明患者體內(nèi)病毒復(fù)制的同時(shí)，也存在病毒變異、免疫耐受等現(xiàn)象，說明抗-HBc的出現(xiàn)只能證實(shí)HBV復(fù)制水平的降低，而不能代表HBV復(fù)制的停止[6]。

11例抗-HBs+/抗HBe+/抗-HBc+、8例抗-HBe+/抗-HBc+、23例抗-HBs+不同感染模式陽性檢出率與HBV-DNA對數(shù)值檢測表明，不同的血清標(biāo)志模式均有一定的陽性檢出率，也就是說只要有HBV-DNA+，就有誘發(fā)HBV感染的可能，同時(shí)也說明，DNA既可能存在于血清中，也可能存在于肝細(xì)胞中，僅僅通過血清標(biāo)志物的檢測作為診斷、治療HBV指標(biāo)有一定的局限性，需要同時(shí)定量測量HBV-DNA[7]。

綜上所述，乙肝病患者血清HBV-DNA陽性率與血清標(biāo)志物呈現(xiàn)一定的狀態(tài)關(guān)系，可以用作判斷乙肝病毒復(fù)制的指標(biāo)。在乙肝患者的早期診斷、判別、治療過程特別是療效觀察中，僅僅憑血清標(biāo)志物并不能準(zhǔn)確判斷HBV復(fù)制程度以及傳染性強(qiáng)度，需要同時(shí)進(jìn)行HBV-DNA檢測，定量檢測HBV-DNA對于臨床診斷治療以及預(yù)后判斷有著十分重要的意義。

[1]中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會,肝病學(xué)分會.病毒性肝炎防治方案[J].中華傳染病雜志,2001,19(1):56-62.

[2]Tang YW,Procop GW,Persing DH.Molecular diagnostics of infectious diseases[J].Clin Chem,1997,43:2021-2038.

[3]朱映華,鄭煜煜,李異,等.拉米夫定聯(lián)合干擾素-α2b治療慢性乙型肝炎療效觀察[J].中華現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2001,11(8):53-54.

[4]武堅(jiān)銳,祁春茹.乙型肝炎患者血清標(biāo)志物與HBV-DNA含量關(guān)系的研究[J].臨床醫(yī)學(xué)實(shí)踐,2012,21(3):211-212.

[5]劉宏景,李沛,劉寶根,等.電化學(xué)發(fā)光法檢測乙型肝炎患者血清標(biāo)志物與HBV-DNA定量關(guān)系的研究[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué), 2004,8(5):535-536.

[6]馬健平,余暉.乙型肝炎血清標(biāo)志物聯(lián)合病毒DNA檢測在臨床應(yīng)用中的意義[J].中華醫(yī)護(hù)雜志,2006,3(1):43-44.

[7]Peng XM,Gu L,Chen XJ.Optim ization of competitively differentiated polymerase chain reaction in detection of HBV basalcore promoter mutation[J].World J Gastroenterol,2005,11(23):3614-3618.

Correlation study of serum markers and HBV-DNA levels in hepatitis B patients.

ZHAO Wei1,ZHOU Sheng-jie2. 1.Shaxilongdu Hospital of Zhongshan City,Zhongshan 528471,Guangdong,CHINA;2.Guangdong Second Provincial Traditional Chinese Medicine Hospital,Guangzhou 510095,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the correlation of serum markers and HBV-DNA levels in hepatitis B patients and its clinical significance.MethodsTwo hundred and fifty-eight hepatitis B patients was detected for serum markers by ELISA and HBV-DNA levels by quantitative fluorescent polymerase chain reaction(QF-PCR).The correlation between serum markers and HBV-DNA levels were investigated.ResultsIn HBsAg+/HBeAg+group and HBsAg+/ HBeAg+/anti-HBc+group,the positive rate of HBV-DNA and the levels of HBV-DNA were the highest.For the five infection modes of HBsAg+/anti-HBe+/anti-HBc+,HBsAg+/HBc+,anti-HBs+/anti-HBe+/anti-HBc+,anti-HBe+/anti-HBc+,anti-HBs+,the HBV-DNA positive rates were 62.96%,52.94%,37.50%,27.27%,4.35%,respectively.ConclusionThere is a correlation between the positive rate of HBV-DNA and the serum markers in hepatitis B patients.The detection serum markers combined with the quantitative detection of HBV-DNA can accurately reflect the extent of virus replication and infection intensity,which is of great significance for the early diagnosis,treatment and prognosis of hepatitis B.

Hepatitis B patients;Serum markers;HBV-DNA;ELISA;FQ-PCR;Correlation

R512.6+2

A

1003—6350(2013)01—0049—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.01.0020

2012-05-25)

趙衛(wèi)。E-mail：1778132958@qq.com