李衛(wèi)林

（1.武夷學(xué)院生態(tài)與資源工程系生物教研室，福建 武夷山 354300；2.武夷學(xué)院綠色化工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 武夷山354300；3，鄭州大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院，河南 鄭州 450052）

黃酮廣泛存在于自然界的某些植物和漿果中，其分子結(jié)構(gòu)不盡相同如蕓香苷、橘皮苷、櫟素、綠茶多酚、花色糖苷、花色苷酸等都屬黃酮。柚皮苷即是其中一種，廣泛存在于柑橘屬類(lèi)水果中。其具有很強(qiáng)的抗氧化作用，可以改善血液循環(huán)，實(shí)驗(yàn)顯示可以降低小鼠血液中的膽固醇、降血壓[1]，大劑量的柚皮素會(huì)降低大鼠的骨密度損失[2]、預(yù)防敗血癥、抗炎癥效果[3-4]。

甌柑（Citrus Suavissina Hort.et Tanaka）屬于柑橘屬果類(lèi)，果實(shí)顏色呈現(xiàn)鮮艷的金黃色，肉細(xì)多汁，略帶苦味，耐儲(chǔ)存并能保持營(yíng)養(yǎng)成分，藥理上對(duì)高血壓等癥狀有一定的食療效果。通過(guò)兩種方法提取甌柑橘中黃酮類(lèi)物質(zhì)，并采用紫外光譜法和紅外光譜法對(duì)提取的黃酮進(jìn)行分析研究。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果將為南平坎下果場(chǎng)生產(chǎn)的歐柑橘的應(yīng)用和加工提供信息，以提高歐柑橘種植加工的經(jīng)濟(jì)效益。

1 材料與方法

1.1 材料

歐柑橘（福建省南平坎下農(nóng)場(chǎng)）；

乙醚、石油醚、乙醇、甲醇、冰醋酸、溴化鉀等均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

TDL-5-A 低速大容量離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器；DS-101S 集熱式恒溫加熱磁力攪拌器、SHZ-D（III）型不銹鋼臺(tái)式：河南省予華真空設(shè)備；DGX-9073B2 鼓風(fēng)干燥箱：上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備；UV-2550 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：蘇州島津儀器；Nicolet AVATAR 330 FT-IR傅里葉變換紅外光譜儀：美國(guó)熱電產(chǎn)品。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 乙醚-乙醇提取法[5]

歐柑橘皮清洗干凈，烘干粉碎，取干燥處理好的原料粉末15 g，無(wú)水乙醚250 mL（質(zhì)量體積比1∶17）浸提4 d，抽濾，室溫下晾干。干燥后的粉末重新裝入燒瓶，量取體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇250 mL，置于裝有回流裝置的圓底燒瓶，在70 ℃回流加熱2 h，趁熱過(guò)濾后，將濾液55 ℃～65 ℃恒溫減壓濃縮至20 mL 左右；加入50 mL 蒸餾水靜置數(shù)小時(shí)后，可看到淡黃色沉淀。減壓抽濾，用10 mL 無(wú)水乙醚洗滌連續(xù)洗滌直至沒(méi)有黃色濾液流出，對(duì)過(guò)濾所得濾渣進(jìn)行逐步干燥，在140 ℃恒重，然后稱(chēng)量。

1.3.2 石油醚-甲醇提取法[6]

原料皮清洗干凈，烘干粉碎，取干燥處理好的原料粉末15 g，加入裝有回流冷凝管的圓底燒瓶中，加入250 mL 石油醚（質(zhì)量體積比1∶17），55 ℃～60 ℃水浴加熱1 h，并用布氏漏斗熱濾，粉末室溫下晾干。干燥后的粉末重新裝入燒瓶，加入250 mL 甲醇，65 ℃加熱回流3 h。然后趁熱過(guò)濾，并用100 mL 熱甲醇沖洗。減壓濃縮濾液，濃縮物用200 mL10%稀醋酸結(jié)晶。

1.4 甌柑橘皮黃酮提取物紅外分析

以傅里葉變換紅外光譜儀對(duì)所得樣品進(jìn)行分析，采用溴化鉀壓片制樣，比例1∶100（mg），掃描范圍4 000 cm-1～400 cm-1。

1.5 甌柑橘皮黃酮提取物紫外分析

UV-2550 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)對(duì)所得樣品進(jìn)行掃描，以乙醇為溶劑，并以乙醇作為空白對(duì)照，掃描范圍為200 nm～760 nm。

2 結(jié)果與討論

2.1 紅外圖譜

所得產(chǎn)品的紅外光譜圖如圖1 所示。

圖1 歐柑橘皮提取物的紅外圖譜Fig.1 IR spectrum of flavonoid from Citrus Suavissina Hort.et Tanaka Peel

3 400 cm-1處為vO-H伸縮振動(dòng)吸收峰，但同時(shí)在該位置附近處3 500 cm-1和3 270 cm-1出現(xiàn)兩個(gè)肩峰；2 920 cm-1處為糖甙中甲基和亞甲基的碳?xì)渖炜s振動(dòng)吸收峰；1 650 cm-1處為較強(qiáng)的vC=O伸縮振動(dòng)吸收峰；1 621 cm-1、1 586 cm-1、1 519 cm-1、1 442 cm-1為苯環(huán)的骨架振動(dòng)吸收峰。樣品的紫外圖譜及紅外圖譜與葉翠層等[7]的研究結(jié)果對(duì)照均顯示，經(jīng)乙醚-乙醇溶劑體系的提取物是柚皮甙化合物。

2.2 紫外圖譜

所得產(chǎn)品用乙醇溶解后進(jìn)行紫外掃描，所得掃描圖譜如圖2。

圖2 歐柑橘皮提取物的乙醇溶液紫外光譜圖Fig.2 UV spectrum of flavonoid from Citrus Suavissina Hort.et Tanaka Peel

從圖2 譜可以看出在283 nm 處出現(xiàn)強(qiáng)吸收峰，在326 nm 處出現(xiàn)低強(qiáng)度吸收峰。

2.3 兩種溶劑體系提取結(jié)果比較

以歐柑橘皮為原料，采用兩種方法提取黃酮，提取結(jié)果與從橙皮中提取總黃酮比較，平均粗提率如表1。

表1 兩種方法提取黃酮粗品的提取率比較Table 1 Extraction rate of crude flavonoids with different method

圖3 兩種黃酮類(lèi)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)比較Fig.3 Structures of two flavonoids

可以看出：采用乙醚-乙醇溶劑體系提取歐柑橘皮黃酮有較好效果，但是該方法在提取橙皮中黃酮時(shí)產(chǎn)品的產(chǎn)率非常低；而采用石油醚-甲醇溶劑體系提取時(shí)，歐柑橘皮中黃酮的提取情況很差，反而提取橙皮中黃酮的情況比較好。根據(jù)前面的分析和文獻(xiàn)結(jié)果，甌柑橘皮中所提黃酮為柚皮苷，橙皮中提取物為橙皮苷。

從圖3 中兩種黃酮類(lèi)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)可以看出，橙皮苷的C 環(huán)上3’上羥基和4’位上甲氧基的存在可能會(huì)對(duì)提取所用的溶劑體系的極性有較高的要求，由于甲醇的極性比乙醇高[8]，甲醇分子能夠在橙皮苷分子的酚羥基和甲氧基之間很好地嵌合，而且甲醇水溶液的極性更高，因此甲醇在提取橙皮苷時(shí)表現(xiàn)出很大的優(yōu)勢(shì)；而柚皮苷的C 環(huán)上的4’位僅有一個(gè)羥基，隨后的甌柑橘皮渣用高純度乙醇和高純度甲醇處理提取黃酮時(shí)結(jié)果出現(xiàn)較大的差別，在石油醚-甲醇溶劑體系中粗提率很差，而柚皮苷在乙醚-乙醇溶劑體系中的提取率較好，歸因于柚皮苷脫離甌柑橘皮結(jié)構(gòu)需要較小的極性環(huán)境。從實(shí)驗(yàn)的結(jié)果分析，不同的黃酮物質(zhì)在提取的時(shí)候需要合適極性的溶劑，而在針對(duì)不同的黃酮類(lèi)物質(zhì)時(shí)應(yīng)該采用不同的溶劑體系。

3 結(jié)論

本文通過(guò)乙醚-乙醇溶劑體系和石油醚-甲醇溶劑體系提取歐柑橘皮中的黃酮類(lèi)物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)顯示：黃酮類(lèi)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)差異在一定程度上會(huì)在不同溶劑體系的提取效果上表現(xiàn)出了，甌柑橘皮中黃酮在乙醚-乙醇溶劑體系的提取效果明顯好于石油醚-甲醇溶劑體系，平均提取率可達(dá)到4.8%。

經(jīng)過(guò)紫外可見(jiàn)分光光度法掃描，在328 nm 和283 nm 處有吸收峰；紅外光譜掃描的結(jié)果與文獻(xiàn)比較證明所得產(chǎn)物為柚皮苷。

[1]Ohtsuki K,Abe A,Mitsuzumi H,et al."Glucosyl hesperidin improves serum cholesterol composition and inhibits hypertrophy in vasculature"[J].J Nutr Sci Vitaminol,2003,49(6)：447-450

[2]Chiba H,Uehara M,Wu J,et al."Hesperidin,a citrus flavonoid,inhibits bone loss and decreases serum and hepatic lipids in ovariectomized mice"[J].J Nutr,2003,133(6)：1892-1897

[3]Kawaguchi K,Kikuchi S,Hasunuma R,et al."A citrus flavonoid hesperidin suppresses infection-induced endotoxin shock in mice"[J].Biol Pharm Bull,2004,27(5)：679-683

[4]Emim JA,Oliveira AB,Lapa AJ."Pharmacological evaluation of the anti-inflammatory activity of a citrus bioflavonoid,hesperidin,and the isoflavonoids,duartin and claussequinone,in rats and mice"[J].J Pharm Pharmacol,1994,46(2)：118-122

[5]Charles E.Sando,H H.Bartlett.Rutin,the flavone pigment of escholtzia californica cham[J].Journal of Biological Chemistry,1920,41(4)：495-503

[6]王俊儒.天然產(chǎn)物提取分離與鑒定技術(shù)[M].西北農(nóng)林科技大學(xué)出版社,2006：106-109

[7]葉翠層,周盡花,吳宇雄,等.柚皮中柚皮甙的提取純化及結(jié)構(gòu)鑒定[J].中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào),2010,30(10)：121-124

[8]馬軍營(yíng).高等學(xué)校教材有機(jī)化學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2007：164-164