陳日春, 熊文飛, 蔡一楠, 鄭寶東,*

(1.福建農(nóng)林大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院,福建福州 350002;2.福州市食品工業(yè)研究所,福建福州 350013)

大量研究表明,蛋白質(zhì)水解物多具有抗氧化活性,可作為天然的抗氧化劑使用[1].蛋白質(zhì)水解物是包含了肽類和氨基酸的混合物,主要通過酶解或微生物發(fā)酵制備,其中起主要作用的是小分子肽類.此外,與抗氧化酶的作用相比,蛋白質(zhì)水解物的抗氧化活性更高、分子量更小且結(jié)構(gòu)簡單、更易吸收,攝入體內(nèi)具有提高機體抗氧化能力和補充營養(yǎng)的雙重效用[2].

膠原蛋白作為一種結(jié)構(gòu)蛋白,在魚類加工副產(chǎn)物(魚鱗、魚皮、魚骨等)中含量非常豐富,充分利用這些膠原蛋白生產(chǎn)高附加值的活性肽,不僅能夠變廢為寶,還能一定程度上減少環(huán)境污染.膠原蛋白經(jīng)酶水解后主要形成相對分子量較小的膠原蛋白肽,其吸收率更高,并能夠促進蛋白質(zhì)和碳水化合物的吸收[3].目前關(guān)于非魚鱗膠原蛋白肽在動物體內(nèi)抗氧化活性的研究報道較多[4-9],也已有研究表明源于鯉魚魚鱗、羅非魚魚鱗和草魚魚鱗的膠原蛋白肽在體外表現(xiàn)出良好的抗氧化活性[10-12],而針對魚鱗膠原蛋白肽體內(nèi)抗氧化活性的研究尚未見報道.因此本研究首先采用超濾膜對鰱魚魚鱗膠原蛋白肽(sliver carp scale collagen peptides,SCSCP)進行分離分級,通過6種體外抗氧化實驗比較不同超濾組分的抗氧化活性強弱,初步篩選出抗氧化活性較強的組分;繼而采用高脂飼料喂養(yǎng)大鼠,建立高血脂動物模型,對活性較強組分的抗氧化活性進行體內(nèi)驗證,旨在為明確SCSCP的抗氧化活性作用機理及相關(guān)功能性食品的開發(fā)提供理論基礎(chǔ).

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

鰱魚魚鱗,收集于福州市華林永輝超市;胃蛋白酶(1∶3 000),上海源聚生物科技有限公司;堿性蛋白酶(2×105U/g),南寧龐博生物工程有限公司;氯化硝基四氮唑藍(分析純)、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(分析純)、吩嗪硫酸甲酯(分析純),上海源葉生物科技有限公司;1,10-菲啰啉(分析純)、1,1-二苯基-2-苦基肼(分析純),中科瑞泰(北京)生物科技有限公司;鐵氰化鉀、氯化鐵、三氯乙酸、氯化亞鐵、硫氰酸鐵、硫酸氰胺、鐵氰化鉀均為分析純,國藥集團上?；瘜W(xué)試劑有限公司;谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPx)測試盒(比色法)、丙二醛(MDA)測試盒(TBA法)、超氧化物歧化酶(SOD)測試盒(羥胺法測總SOD),南京建成生物工程研究所;血脂康膠囊,北大維信生物科技有限公司;清潔級SD大鼠(雄性,體重110～130 g),上海斯萊克動物實驗中心.

1.2 主要儀器設(shè)備

AR1140型電子天平,梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;XMTD-8222型自動恒溫振蕩器,上海精宏試驗室設(shè)備有限公司;H2050R型臺式高速大容量冷凍離心機,湘儀離心機有限公司;LGJ-10D型冷凍干燥機,北京四環(huán)科學(xué)儀器廠;UV-1600型紫外分光光度計,上海美譜達儀器有限公司;L-8800型氨基酸自動分析儀,日立公司;YW-MIC-03型試驗室微型多功能膜分離設(shè)備,合肥禹王膜工程技術(shù)有限公司.

1.3 實驗方法

1.3.1 鰱魚魚鱗膠原蛋白抗氧化肽的制備

新鮮魚鱗用冰純水清洗除雜后,用EDTA進行脫鈣處理[13],脫鈣后的魚鱗于0.1mol/L氫氧化鈉溶液中浸泡6 h脫除非膠原蛋白,料液比(g/mL)1∶8;將經(jīng)脫鈣和除去非膠原蛋白后的魚鱗浸泡于0.5 mol/L乙酸溶液中,添加0.85%胃蛋白酶,液料比(g/mL)1∶18,提取膠原蛋白;經(jīng)300目濾布過濾得到膠原蛋白提取液,向提取液中添加氯化鈉至其濃度達0.9mol/L,鹽析24 h,然后冷凍離心(10000 r/min,15min)獲得膠原蛋白沉淀物,將沉淀物置于截留分子量為10 ku的透析袋中透析24 h,凍干得到膠原蛋白;將膠原蛋白凍干粉配成質(zhì)量分數(shù)為5.47%的溶液,溶液pH值調(diào)至8.0,添加4 200 U/g堿性蛋白酶于50℃酶解4.24 h,得到膠原蛋白肽溶液備用.

1.3.2 鰱魚魚鱗膠原蛋白抗氧化肽的膜分離分級

在室溫條件下,依次采用截留分子量為5,3,1 ku的三級超濾膜對鰱魚魚鱗膠原蛋白酶解產(chǎn)物進行分離分級.各超濾組分表示為SCSCP-Ⅰ(分子量大于5 ku)、SCSCP-Ⅱ(分子量為 3 ～5 ku)、SCSCP-Ⅲ(分子量為1～3 ku)、SCSCP-Ⅳ(分子量小于1 ku).三級膜分離壓力分別為0.15,0.20,0.25 MPa,料液質(zhì)量濃度均為10 mg/mL.膜分離工藝流程見圖1.

圖1 SCSCP的膜分離工藝流程Fig.1 SCSCPmembrane separation process

1.3.3 DPPH·自由基清除活性的測定

DPPH·自由基清除活性的測定參照Shimada等[14]的方法略作修改.取2.5 mL樣品液置于試管中,加入2.5mL溶于體積分數(shù)為95%乙醇的DPPH溶液(0.1mmol/L),將混合物激烈振蕩10 s,然后置于室溫下反應(yīng)30 min,反應(yīng)結(jié)束后,于517 nm下測量反應(yīng)混合物吸光度,同時以2.5mL蒸餾水代替樣品液做空白對照.樣品液對DPPH自由基清除活性按式(1)計算.

式(1)中:A0為空白對照吸光度,A為樣品吸光度.

1.3.4自由基清除活性的測定

·自由基清除活性的測定參照Wang等[15]的方法略作修改.取1mL樣品溶液置于試管中,加入1mL氯化硝基四氮唑藍(NBT,2.52 mmol/L)和1 mL煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(624 mmol/L),添加1 mL吩嗪硫酸甲酯溶液(PMS,120μmol/L)啟動反應(yīng),于25℃下反應(yīng)5min后測量產(chǎn)物560 nm處吸光度,同時以蒸餾水代替樣品液做空白對照.樣品液對超氧陰離子自由基的清除活性按式(2)計算.

式(2)中:B0為空白對照吸光度,B為樣品吸光度.

1.3.5 ·OH自由基清除活性的測定

·OH自由基清除活性的測定參照Wang等[15]的方法.取1.0mL 1,10-菲啰啉(1.865mmol/L)與2.0mL樣品液于具塞試管中混合,加入1.0 mL FeSO4·7H2O(1.865 mmol/L), 最 后 加 入 1 .0 mL H2O2溶液(體積分數(shù)為0.03%)啟動反應(yīng),將試管置于37℃水浴中反應(yīng)60 min,于536 nm處測量反應(yīng)混合液吸光度,并以蒸餾水代替樣品液做陰性對照,以蒸餾水代替過氧化氫作為空白對照.樣品對羥自由基的清除活性按式(3)計算.

式(3)中:C為樣品吸光度,C1為陰性對照吸光度,C0為空白對照吸光度.

1.3.6 還原力的測定

還原力的測定參照Kaur等[16]的方法.將2mL樣品溶液與5 mL磷酸鹽緩沖液(0.2 mol/L,pH值為6.6)混合,加入5mL質(zhì)量分數(shù)為1%鐵氰化鉀溶液,將混合物在50℃下保溫20min.最后加入5mL體積分數(shù)為10%的三氯乙酸(TCA)溶液,混勻,在3 000 r/min下離心10 min.取2 mL上清液和1 mL蒸餾水混合,加入0.5mL質(zhì)量分數(shù)為0.1% 氯化鐵溶液,于700 nm下測量吸光度,吸光度越高說明樣品的還原能力越強.

1.3.7 金屬離子螯合力的測定

采用樣品對亞鐵離子的螯合能力來評價其對金屬離子的螯合特性[17].取800μL樣品液(20mg/mL)置于試管中,加入10μL氯化亞鐵溶液(2 mmol/L)和20μL菲啰啉溶液(5 mmol/L),混勻后于室溫下反應(yīng)10min,測量反應(yīng)液在波長為562 nm時的吸光度,并采用蒸餾水代替樣品液做空白對照.SCSCP對亞鐵離子的螯合率按式(4)計算.

亞鐵離子螯合率=((1-D/D0)×100%.(4)式(4)中:D為樣品吸光度,D0為空白對照吸光度.

1.3.8 脂質(zhì)氧化抑制活性的測定

脂質(zhì)氧化的抑制能力通過硫氰酸鐵比色法確定[18].取0.5 mL樣品液置于試管中,加入2.0 mL磷酸鈉緩沖溶液(0.2mol/L,pH值為7.0)和2.5mL溶于體積分數(shù)為95%乙醇的亞油酸溶液(2 mg/mL),混勻后置于37℃培養(yǎng)箱中反應(yīng)7 d.每隔24 h取0.1mL反應(yīng)產(chǎn)物置于試管中,加入4.7 mL乙醇溶液(體積分數(shù)為75%),0.1mL硫酸氰胺溶液(質(zhì)量分數(shù)為30%)和0.1mL溶于體積分數(shù)為3.5%鹽酸的氯化亞鐵溶液(20 mmol/L),將該混合物激烈振蕩反應(yīng)3min,于500 nm處測定其吸光度,同時以蒸餾水代替樣品液做空白對照,以二丁基羥基甲基(BHT)做陽性對照.SCSCP對脂質(zhì)氧化抑制活性按式(5)計算.

脂質(zhì)氧化抑制率=((1-E/E0)×100%.(5)式(5)中:E為樣品吸光度,E0為空白對照吸光度.

1.3.9 動物飼料

基礎(chǔ)飼料按照GB14924.3—2010[19]配制;高脂飼料配方:基礎(chǔ)飼料79%、豬油10%、蛋黃粉10%、膽固醇1%.

1.3.10 動物的飼養(yǎng)與分組

實驗動物共分為6組.正常對照組、模型組、SCSCP高中低劑量組,陽性對照組.每組10只清潔級SD大鼠,其中正常對照組喂基礎(chǔ)飼料,其他組均喂高脂飼料.各組每天上午灌胃,正常對照組與模型組以蒸餾水灌胃,陽性對照組以血脂康灌胃,高中低劑量組分別灌胃150,300,600 mg/kg體重的SCSCP水溶液.實驗期間各組大鼠均自由進食和飲水.

1.3.11 樣品采集

實驗期間,每天記錄各組實驗前后大鼠體重及處死后大鼠的肝臟和脾臟質(zhì)量.大鼠持續(xù)喂養(yǎng)6周后,禁食12 h,摘眼球取血,于4℃下4 000 r/min離心10min,制備血清.

1.3.12 GSH-Px、MDA、SOD 的測定

按試劑盒使用說明對大鼠血清中 GSH-Px、MDA、SOD進行測定.

1.3.13 氨基酸組成的測定

取樣品20mg置于6mol/L鹽酸溶液中,于110℃真空條件下酸水解24 h,然后采用氨基酸分析儀測定水解液中氨基酸組成.

1.4 數(shù)理統(tǒng)計

采用DPS7.05軟件進行單因素方差分析,組間比較采用Tukey法,P＜0.05表示差異顯著.實驗結(jié)果以平均值±SD表示.

2 結(jié)果與分析

2.1 不同超濾組分對DPPH·自由基的清除作用

不同超濾組分對DPPH·自由基的清除結(jié)果見圖2.由圖2可知,隨著膠原蛋白肽質(zhì)量濃度的增加,各超濾組分DPPH·自由基清除率不斷上升,表明膠原蛋白肽不同超濾組分對DPPH·自由基的清除率具有密切的量效關(guān)系.當(dāng)膠原蛋白肽各超濾組分質(zhì)量濃度增加到8 mg/mL時,SCSCP-Ⅰ、SCSCP-Ⅱ、SCSCP-Ⅲ、SCSCP-Ⅳ對 DPPH·自由基的清除率分別為(55.72±2.69)%,(67.43±2.34)%,(71.07±1.06)%,(85.06±3.23)%,結(jié)果顯示SCSCP-Ⅳ對DPPH·自由基的清除活性最強(P＜0.05).與同質(zhì)量濃度的 Vc比較,SCSCP-Ⅳ對DPPH·自由基的清除率仍較弱,相差16.98%(P＜0.05).超濾前8mg/mL SCSCP對DPPH·自由基的清除率為(55.55±1.09)%,低于 SCSCP-Ⅱ、SCSCP-Ⅲ、SCSCP-Ⅳ對DPPH·清除活性(P＜0.05).

圖2 膠原蛋白肽不同超濾組分對DPPH·的清除作用Fig.2 DPPH·scavenging activity of different UF fractions of collagen peptides

2.2 不同超濾組分對O-2·自由基的清除作用

不同超濾組分對·自由基的清除結(jié)果見圖3.由圖3可知,隨著膠原蛋白肽質(zhì)量濃度的增加,各超濾組分對·自由基清除率不斷上升,在膠原蛋白肽質(zhì)量濃度由0 mg/mL增加到4 mg/mL的過程中,膠原蛋白肽不同超濾組分對·自由基的清除率具有密切的量效關(guān)系.然而隨著膠原蛋白肽濃度的進一步增加,·自由基清除率并沒有顯著的提高(P＞0.05).當(dāng)膠原蛋白肽各超濾組分質(zhì)量濃度為 4 mg/mL 時,SCSCP-Ⅰ、SCSCP-Ⅱ、SCSCP-Ⅲ、SCSCP-Ⅳ對·自由基的清除率分別為(56.53±2.70)%,(63.20±2.98)%,(63.29±2.45)%,(63.66±1.56)%,結(jié)果顯示SCSCP-Ⅳ對·自由基的清除活性最強,但差異并不顯著(P＞0.05).與同濃度的Vc比較,SCSCP-Ⅳ對·自由基的清除活性仍較弱(P＜0.05),相差54.70%.超濾前4 mg/mL SCSCP對·自由基的清除率為(61.51±1.50)%,低 于 SCSCP-Ⅱ、SCSCP-Ⅲ、SCSCP-Ⅳ 對·清除活性,但差異并不顯著(P＞0.05).結(jié)果表明,不同分子量的鰱魚魚鱗膠原蛋白肽對的清除活性差異不明顯(P＞0.05).

2.3 不同超濾組分對·OH自由基的清除作用

不同超濾組分對·OH自由基的清除結(jié)果見圖4.由圖4可知,隨著膠原蛋白肽質(zhì)量濃度的增加,各超濾組分對·OH自由基清除率不斷上升,表明膠原蛋白肽不同超濾組分對·OH自由基的清除率具有密切的量效關(guān)系.當(dāng)膠原蛋白肽各超濾組分質(zhì)量濃度為 8 mg/mL 時,SCSCP-Ⅰ、SCSCP-Ⅱ、SCSCP-Ⅲ、SCSCP-Ⅳ對·OH自由基的清除率分別為(53.30±1.74)%,(66.08±1.52)%,(74.82±1.46)%,(78.79±1.24)%,結(jié)果顯示SCSCP-Ⅳ對·OH自由基的清除活性最強(P＜0.05).與同質(zhì)量濃度的Vc比較,SCSCP-Ⅳ對·OH自由基的清除率仍較弱(P＜0.05),相差20.92%.超濾前8 mg/mL SCSCP對·OH自由基的清除率為(62.14±1.03)%,低于SCSCP-Ⅱ、SCSCP-Ⅲ、SCSCP-Ⅳ對·OH 清除活性.結(jié)果表明,超濾處理能夠富集鰱魚魚鱗膠原蛋白肽中對·OH自由基清除活性較強的組分,且不同分子量的膠原蛋白肽對·OH自由基的清除活性相差較大(P＜0.05).

圖3 膠原蛋白肽不同超濾組分對·的清除作用Fig.3 ·scavenging activity of different UF fractions of collagen peptides

圖4 膠原蛋白肽不同超濾組分對·OH的清除作用Fig.4 ·OH scavenging activity of different UF fractions of collagen peptides

2.4 不同超濾組分的還原力

不同超濾組分的還原力見圖5.由圖5可知,隨著膠原蛋白肽質(zhì)量濃度的增加,各超濾組分還原力不斷上升,表明膠原蛋白肽不同超濾組分的還原力具有密切的量效關(guān)系.當(dāng)膠原蛋白肽各超濾組分質(zhì)量濃度為 8 mg/mL 時,SCSCP-Ⅰ、SCSCP-Ⅱ、SCSCP-Ⅲ、SCSCP-Ⅳ的還原力分別為0.587±0.012,0.617±0.015,0.667±0.021,0.937±0.047,結(jié)果顯示SCSCP-Ⅳ的還原力最強(P＜0.05).與同質(zhì)量濃度的GSH－比較,SCSCP-Ⅳ的還原力仍較弱(P＜0.05),相差30.20%.超濾前8mg/mL SCSCP的還原力為 0.620±0.010,低于 SCSCP-Ⅲ(P＞0.05)和SCSCP-Ⅳ(P＜0.05)的還原力.結(jié)果表明,超濾處理能夠富集鰱魚魚鱗膠原蛋白肽中還原力較強的組分,且不同分子量的膠原蛋白肽還原力差異較明顯(P＜0.05).

圖5 膠原蛋白肽不同超濾組分的還原力Fig.5 Reducing power of different UF fractions of collagen peptides

2.5 不同超濾組分的金屬離子螯合力

不同超濾組分的金屬離子螯合力見圖6.由圖6可知,隨著膠原蛋白肽質(zhì)量濃度的增加,各超濾組分對亞鐵離子的螯合率不斷上升,表明膠原蛋白肽不同超濾組分對亞鐵離子的螯合率具有密切的量效關(guān)系.當(dāng)膠原蛋白肽各超濾組分質(zhì)量濃度為8mg/mL時,SCSCP-Ⅰ、SCSCP-Ⅱ、SCSCP-Ⅲ、SCSCP-Ⅳ對亞鐵離子的螯合率分別為(55.53±1.62)%,(64.47±2.70)%,(66.10±2.25)%,(73.47±1.50)%,結(jié)果顯示SCSCP-Ⅳ對亞鐵離子的螯合率最強(P＜0.05).與同質(zhì)量濃度的 EDTA比較,SCSCP-Ⅳ對亞鐵離子的螯合率仍較弱(P＜0.05),相差35.97%.超濾前8mg/mL SCSCP對亞鐵離子的螯合率為(62.30±1.28)%,低于SCSCP-Ⅱ(P＞0.05)、SCSCP-Ⅲ(P ＞ 0.05)、SCSCP-Ⅳ(P ＜ 0.05)對亞鐵離子的螯合率.結(jié)果表明,超濾處理能夠在一定程度上富集鰱魚魚鱗膠原蛋白肽中對亞鐵離子的螯合率較強的組分,且分子量小于1 ku的膠原蛋白肽對亞鐵離子的螯合率較為突出(P＜0.05).

2.6 不同超濾組分的脂質(zhì)氧化抑制作用

不同超濾組分對脂質(zhì)氧化的抑制作用見圖7.由圖7可知,隨著膠原蛋白肽質(zhì)量濃度的增加,各超濾組分對脂質(zhì)氧化的抑制率不斷上升,表明膠原蛋白肽不同超濾組分對脂質(zhì)氧化的抑制率具有密切的量效關(guān)系.當(dāng)膠原蛋白肽各超濾組分質(zhì)量濃度為8 mg/mL 時,SCSCP-Ⅰ、SCSCP-Ⅱ、SCSCP-Ⅲ、SCSCP-Ⅳ對脂質(zhì)氧化的抑制率分別為(44.87±2.26)%,(58.83±1.37)%,(63.80±2.08)%,(72.73±0.45)%,結(jié)果顯示SCSCP-Ⅳ對脂質(zhì)氧化的抑制率最強(P＜0.05).與同質(zhì)量濃度的 B HT比較,SCSCP-Ⅳ對脂質(zhì)氧化的抑制率要低24.67%(P＜0.05).超濾前8mg/mL SCSCP對脂質(zhì)氧化的抑制率為(55.57±1.16)%,低于 S CSCP-Ⅱ(P ＞0.05)、SCSCP-Ⅲ(P ＜0.05)、SCSCP-Ⅳ(P ＜0.05)對脂質(zhì)氧化的抑制率.結(jié)果表明,超濾處理能夠在一定程度上富集鰱魚魚鱗膠原蛋白肽中對脂質(zhì)氧化的抑制率較強的組分,且不同分子量的膠原蛋白肽對脂質(zhì)氧化的抑制率的差異較為明顯(P＜0.05).

圖6 膠原蛋白肽不同超濾組分的亞鐵離子螯合活性Fig.6 Fe2+-chelating activity of different UF fractions of collagen peptides

圖7 膠原蛋白肽不同超濾組分對脂質(zhì)氧化的抑制活性Fig.7 Inhibition activity of lipid oxidation of different UF fractions of collagen peptides

2.7 不同超濾組分的氨基酸組成

為闡述氨基酸側(cè)鏈對SCSCP抗氧化活性的影響,分別收集SCSCP各超濾組分進行氨基酸分析,其結(jié)果如表1.各超濾組分中谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、精氨酸、脯氨酸和羥脯氨酸含量均較高,SCSCP-Ⅳ中總疏水性氨基酸含量最高.Chen等[20]報道抗氧化劑的疏水性是其接近疏水性物質(zhì)的重要途徑.對蛋白質(zhì)水解物和肽而言,疏水性的提高可增加在油脂中的溶解性,從而加強其抗氧化活性[21].有報道指出,來源于不同蛋白的抗氧化肽的抗氧化活性與其疏水性的提高密切相關(guān)[22].因此推測SCSCP-Ⅳ較高的抗氧化活性與其總疏水性氨基酸含量較高緊密相關(guān).此外,Chen等[23]研究發(fā)現(xiàn)組氨酸和精氨酸分別含有的較活潑的咪唑環(huán)和胍基能夠有效地與孤對電子結(jié)合,可對抗氧化和螯合金屬離子作出較大貢獻,這也可能是SCSCP-Ⅳ具有較高抗氧化活性的另一原因.

表1 SCSCP不同超濾組分的氨基酸組成Tab.1 Amino acid composition of UF fractions of SCSCP－mg/100 g

2.8 SCSCP-Ⅳ動物體內(nèi)抗氧化試驗結(jié)果分析

根據(jù)體外實驗結(jié)果,SCSCP-Ⅳ的抗氧化活性較強,為進一步驗證其抗氧化性能,設(shè)計動物試驗,考察其在大鼠體內(nèi)的抗氧化活性.

2.8.1 SCSCP-Ⅳ對大鼠體重及肝、脾指數(shù)的影響

SCSCP-Ⅳ對大鼠體重及肝、脾指數(shù)的影響結(jié)果見表2.由表2可知,體重:造模前各組之間的大鼠體重?zé)o顯著差別(P＜0.05),連續(xù)喂養(yǎng)6周后,模型組體重顯著高于其他各組(P＜0.01).肝臟指數(shù):模型組顯著高于正常對照組和SSCP高劑量組(P＜0.01或P＜0.05).脾臟指數(shù):各組與正常對照組之間無顯著差異(P＞0.05),模型組明顯高于SSCP高劑量組與陽性對照組(P＜0.01或P＜0.05).

表2 SCSCP對大鼠體重及肝脾指數(shù)的影響Tab.2 Effects of SCSCP on body weight and index of liver and spleen

2.8.2 SCSCP-Ⅳ對大鼠血清中 MDA含量以及SOD與GSH-Px活力的影響

SCSCP-Ⅳ對大鼠血清中MDA含量以及SOD與GSH-Px活力的影響結(jié)果見表3.由表3可知,與正常對照組比,高脂模型組的MDA含量明顯增高(P＜0.05),SOD與GSH-Px活力明顯降低(P＜0.05);SCSCP劑量組與正常對照組之間的MDA含量與SOD活力無顯著差異(P＞0.05),GSH-Px活力明顯提高(P＜0.05).與高脂模型組比,SSCP各劑量組MDA含量明顯降低(P＜0.05),SOD活力顯著提高(P＜0.05);SCSCP中高劑量組GSH-Px活力顯著提高(P＜0.01).陽性對照組MDA含量明顯降低(P＜0.05),SOD與GSH-Px活力顯著提高(P＜0.01或P＜0.05).

表3 SCSCP對血清中MDA含量以及SOD與GSH-Px活力的影響Tab.3 Effects of SSCP on MDA,SOD and GSH-Px activities in serum

3 結(jié) 論

本研究采用截留分子量分別為5,3,1 ku的超濾膜對鰱魚魚鱗膠原蛋白肽(SCSCP)進行分離分級,采用6種體外抗氧化指標(biāo)評價各超濾組分抗氧化活性的強弱,建立了高脂動物模型,考察體外抗氧化活性較強的超濾組分在大鼠體內(nèi)的抗氧化作用.

1)體外抗氧化實驗結(jié)果表明,SCSCP各超濾組分與體外抗氧化評價指標(biāo)間存在顯著的量效關(guān)系,不同超濾組分的抗氧化活性不同,其中SCSCP-Ⅳ(分子量小于1 ku)的體外抗氧化活性最強(P＜0.05).氨基酸組成分析表明,SCSCP-Ⅳ中總疏水性氨基酸和精氨酸含量均較高,推測可能與其較高的抗氧化活性有關(guān).

2)采用高脂飼料喂食大鼠建立高脂血癥動物模型的研究結(jié)果表明,SCSCP-Ⅳ能顯著提高大鼠血清中抗氧化酶SOD與GSH-Px活力以及降低MDA含量(P＜0.05).表明SCSCP-Ⅳ在大鼠體內(nèi)具有較好的抗氧化作用.

3)本實驗結(jié)果明確了鰱魚魚鱗膠原蛋白肽的體內(nèi)外抗氧化功能,但對于其具體起作用的功效成分和作用機理,以及相關(guān)功能性食品的研究與開發(fā)還有待于進一步研究.

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