馬波

【摘 要】文章測(cè)定了合成阿魏酸糖脂的抗氧化性，結(jié)果表明用0.62%的阿魏酸糖脂浸泡的蘋(píng)果，阿魏酸葡糖酯抑制效應(yīng)在處理后4天最明顯，抑制率為36.92%，阿魏酸木糖酯抑制效應(yīng)在處理后8天最明顯，抑制率為 19.47%。對(duì)于果實(shí)的內(nèi)源乙烯釋放，經(jīng)阿魏酸葡糖酯和阿魏酸木糖酯處理的蘋(píng)果分別推遲乙烯釋放高峰期6天和4天。

【關(guān)鍵詞】阿魏酸葡糖酯；抗氧化性

植物的衰老行為中的主要矛盾是活性氧，乙烯的產(chǎn)生和脂氧合酶（Lipoxygenase，簡(jiǎn)稱LOX）起了協(xié)同作用，所以抗氧保鮮劑，主要考察對(duì)脂氧化酶活性的抑制，及對(duì)乙烯的抑制作用，這樣可能達(dá)到預(yù)期的效果。由于阿魏酸及其衍生物是一種營(yíng)養(yǎng)性的安全可靠的食品添加劑，本文通過(guò)蘋(píng)果考察了合成阿魏酸葡糖酯的抗氧化性，即利用紫外光譜和氣相色譜法系統(tǒng)的考察了阿魏酸對(duì)脂氧化酶活性的抑制和內(nèi)源乙烯釋放的抑制效果，通過(guò)測(cè)試證實(shí)阿魏酸糖酯具有較好的抗氧化性，探索開(kāi)發(fā)出一種安全高效的果蔬保鮮劑。

1.材料與 儀器

1.1實(shí)驗(yàn)藥品與儀器

阿魏酸葡萄糖酯，阿魏酸木糖脂（天津工業(yè)大學(xué)提供）； 亞油酸（化學(xué)純，許昌元化生物科技有限公司）； 氫氧化鈉（分析純，天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠）；乙酸-乙酸鈉緩沖液（0.1mol/L，pH4.6～5.8）；磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液（0.1mol/L，pH5.8～7.4）；紫外光度計(jì)[UV-2401PC，島津儀器（蘇州）有限公司]；氣相色譜儀（GC-Agilent 6890N，美國(guó)安捷倫科技有限公司）；高速離心機(jī)（LG10-2.4A型，北京醫(yī)用離心機(jī)廠）。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1蘋(píng)果的處理

將5g左右的合成阿魏酸葡糖酯或阿魏酸木糖酯加熱溶于800ml去離子水中待溫度降至室溫時(shí)，將反復(fù)洗過(guò)無(wú)傷、大小均一的最新市售的紅富士蘋(píng)果浸入到濃度約為0.62%的溶液中，待5min后取出，室溫下放置待測(cè)。

1.2.2底物的制備

10mmol/L亞油酸鈉（反應(yīng)底物）溶液的制?。悍Q取70mg的亞油酸鈉， 7mlTritonX-100和4ml無(wú)氧水，用0.5mol/L氫氧化鈉滴定至溶液澄清，定容25ml，分裝于1.5ml的安瓿瓶中，-18℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3粗酶液的提取

稱取2.0g果肉放入研缽中，在液氮中充分研磨，然后將研缽內(nèi)的果肉轉(zhuǎn)移至離心試管中，取9ml緩沖液充分沖洗研缽后將其轉(zhuǎn)至離心試管中。在10000r/min下離心15min，取上層清液。

LOX活性最適pH值的測(cè)定 本文通過(guò)紫外分光光度計(jì)測(cè)定LOX活性最高時(shí)的pH值，具體方法是：將一定pH值的緩沖液作參比進(jìn)行基線測(cè)定，然后取0.025ml 10mmol/L亞油酸鈉溶液，緩沖液2.775ml和相應(yīng)緩沖液下酶液0.200ml混合均勻，在30℃恒溫水浴中反應(yīng)1min。立即測(cè)定吸光度值A(chǔ)1并計(jì)時(shí)，過(guò)1min后，記錄吸光度值A(chǔ)2。兩次測(cè)量的差值（A2-A1）為ΔA。

LOX活性單位：酶活力 果肉質(zhì)量×反應(yīng)時(shí)間

LOX活性單位：ΔOD234nm×g-1min-1

由于每次取果肉為2.0g，ΔOD=ΔA×10002

本實(shí)驗(yàn)以1min內(nèi)3ml體系在234nm的吸光度增加0.001作為一個(gè)酶活力單位（U），波長(zhǎng)設(shè)定為234nm；測(cè)定不同緩沖液下的LOX活性，需要重新校正基線。

阿魏酸糖酯對(duì)LOX活性的影響 分別提取未用阿魏酸糖酯處理的、用阿魏酸葡糖酯處理的及用阿魏酸木糖酯處理的蘋(píng)果果肉的粗酶液，將最適pH值的緩沖液倒入比色皿中，進(jìn)行基線測(cè)定，然后移取0.025ml亞油酸鈉，緩沖液2.775ml，酶液0.200ml于樣品池中，在30℃恒溫水浴中反應(yīng)1min，立即測(cè)量A1并計(jì)時(shí)，過(guò)1min后，再進(jìn)行測(cè)量A2，求出ΔA，每隔2天進(jìn)行測(cè)量1次，持續(xù)22天。

乙烯的定性與定量 本實(shí)驗(yàn)中利用氣相色譜通過(guò)純乙烯對(duì)果肉釋放的乙烯進(jìn)行定性和定量，定量分析采用氣相色譜外標(biāo)法。

氣相色譜條件：進(jìn)樣量8ml，檢測(cè)器 FID。N2流速：35ml/min，H2流速：50ml/min，AIR流速：375ml/min，色譜柱溫：50℃，進(jìn)樣口溫度：120℃，檢測(cè)器溫度：150℃。

阿魏酸糖酯對(duì)乙烯釋放量的影響 將處理過(guò)的蘋(píng)果，每次均勻取果肉10g，放入135ml醫(yī)用藥瓶中，將瓶用膠塞封嚴(yán)。過(guò)13.5h后進(jìn)行氣相色譜測(cè)試，每次進(jìn)樣8ml，通過(guò)氣相色譜的積分面積從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出對(duì)應(yīng)的乙烯體積x。

乙烯釋放量（y）=釋放乙烯的體積（x）果肉質(zhì)量×釋放時(shí)間

[單位：nl/（g·h）]

2.結(jié)果與討論

2.1 LOX活性最適pH值的測(cè)定

本文以離體煙臺(tái)優(yōu)級(jí)紅富士蘋(píng)果試驗(yàn)材料，在pH4.8～7.4范圍內(nèi)測(cè)定了LOX活性變化。最適pH值為6.4，在pH6.4附近，LOX活性也較高。因此應(yīng)選pH=6.4為酶活性測(cè)定的pH值。

2.2未處理、葡糖酯處理、木糖酯處理的LOX活性變化

從圖2可以看出三個(gè)處理LOX活性總體都呈上升趨勢(shì)，未處理的紅富士蘋(píng)果的LOX均高于木糖脂和葡糖酯，阿魏酸葡糖酯抑制效應(yīng)在處理后4天最明顯，抑制率為36.92%，16天后開(kāi)始上升。阿魏酸木糖酯抑制效應(yīng)在處理后8天最明顯，抑制率為 19.47%，12天后開(kāi)始上升。

理的LOX活性變化。由此可以得出阿魏酸葡糖酯和阿魏酸木糖酯對(duì)離體后的紅富士蘋(píng)果的LOX活性有較好的抑制作用，且阿魏酸葡糖酯的抑制作用比阿魏酸木糖酯的效果要更好一些。這是可能是由于葡糖酯有五個(gè)羥基，更容易使脂氧合酶失去活性，而木糖酯有4個(gè)羥基，其抑制效果要遜于葡糖酯。

2.3未處理、葡糖酯處理、木糖酯處理的蘋(píng)果乙烯釋放量變化

通過(guò)在相同色譜條件下測(cè)定純乙烯和果肉釋放氣體，證實(shí)釋放氣體為乙烯。并由不同濃度的純乙烯做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用外標(biāo)法對(duì)不同時(shí)間釋放的乙烯進(jìn)行定量。

蘋(píng)果乙烯釋放量變化。

阿魏酸葡糖酯和阿魏酸木糖酯處理的蘋(píng)果，明顯抑制蘋(píng)果果實(shí)內(nèi)源乙烯發(fā)生，分別推遲釋放乙烯高峰期為6天和4天出現(xiàn)，而且后期抑制釋放量仍是阿魏酸葡糖酯比阿魏酸木糖酯的抑制作用效果更好一些。

3.結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明合成的阿魏酸葡糖酯和阿魏酸木糖酯對(duì)離體后的紅富士蘋(píng)果果實(shí)有一定的抗氧化保鮮效果：其中對(duì)于果實(shí)的LOX（脂氧合酶）活性，阿魏酸葡糖酯抑制效應(yīng)在處理后4天最明顯，抑制率為36.92%，阿魏酸木糖酯抑制效應(yīng)在處理后8天最明顯，抑制率為 19.47%，對(duì)于果實(shí)的內(nèi)源乙烯釋放，阿魏酸葡糖酯和阿魏酸木糖酯分別推遲乙烯高峰期6天和4天出現(xiàn)。結(jié)果表明阿魏酸葡糖酯的抗氧作用比阿魏酸木糖酯的效果要更好。由于阿魏酸本身無(wú)毒，所合成的糖脂也無(wú)毒無(wú)味，對(duì)人體沒(méi)有副作用，可以預(yù)測(cè)該類(lèi)型的食品保鮮劑的開(kāi)發(fā)具有廣闊的前景。