程俊波

【摘 要】目的 制定夏桑菊泡騰顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對其中的夏枯草、野菊花建立質(zhì)量控制方法。方法 用薄層色譜法對夏枯草中熊果酸進(jìn)行鑒別；用HPLC法對野菊花中的蒙花苷進(jìn)行含量測定。色譜柱：Diamonsil C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相：甲醇水冰醋酸（體積比50∶48∶2），流速：1.0mL·min-1，檢測波長：334nm。結(jié)果 夏枯草的薄層鑒別方法快速、靈敏，陰性無干擾；蒙花苷在0.0448～0.448μg范圍內(nèi)呈良好線性（r=0.9999，n=5），平均回收率為99.7%（n=6），RSD為1.2%。結(jié)論 建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可較好地用于夏桑菊泡騰顆粒的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】夏桑菊；質(zhì)量分析

夏桑菊處方組成中有夏枯草、野菊花和桑葉3味藥材，其功能主治是清肝明目、疏風(fēng)散熱、除濕痹、解瘡毒，用于風(fēng)熱感冒、目赤頭痛、高血壓、頭暈耳鳴、咽喉腫、療瘡腫毒等。夏桑菊顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較為簡單，只有化學(xué)反應(yīng)鑒別和鑒別熊果酸兩個鑒別項?！跋纳＞张蒡v顆?！睘槭惺郛a(chǎn)品“夏桑菊顆粒”改泡騰顆粒劑，為了更好地控制該制劑的質(zhì)量，本文選擇測定本品中蒙花苷的含量以控制成藥的內(nèi)在質(zhì)量，并對夏枯草中的熊果酸建立了薄層色譜鑒別方法。

1.儀器與試藥

高效液相色譜儀（Dionex P680A系列，包括P680泵， ASI100自動進(jìn)樣器，UVD 170U紫外檢測器，Chromeleon色譜工作站）。對照品蒙花苷、熊果酸由中國藥品生物制品檢定所提供（批號分別為111528.200605，110742.200415）。夏桑菊泡騰顆粒（批號051015）。甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，水為超純水。

2.方法與結(jié)果

2.1薄層色譜鑒別

取本品6g，加水100mL使溶解，加水飽和正丁醇提取3次（50mL、30mL、30mL），合并正丁醇液，蒸干，殘渣加水100mL使溶解，再加鹽酸15mL，加熱回流2h，放冷，濾過，棄去濾液，殘渣揮干，用乙醚振搖提取3次，每次25mL，濾過，合并乙醚液，回收盡乙醚，殘渣用乙醚2mL 溶解，作為供試品溶液。另取熊果酸對照品，加乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液 5μL、對照品溶液1μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷三氯甲烷醋酸乙酯冰醋酸（體積比20∶5∶8∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照則無此斑點。結(jié)果表明，該鑒別方法專屬性、重現(xiàn)性較好。

2.2含量測定

2.2.1色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相：甲醇水冰醋酸（體積比50∶48∶2），柱溫：30℃，檢測波長：334nm，流速：1.0mL·min-1，進(jìn)樣體積：10μL。在該色譜條件下蒙花苷峰分離效果良好，保留時間約14.8min。

2.2.2蒙花苷對照品溶液的制備

精密稱取蒙花苷對照品適量，加入甲醇，超聲溶解，加甲醇稀釋至刻度，制成每1mL含蒙花苷0.02mg的溶液，即得。

2.2.3供試品溶液的制備

取本品1袋，研成細(xì)粉，精密稱取1.5g，置25mL量瓶，加入甲醇20mL，超聲提取30min，用孔徑為0.4μm的有機(jī)微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4陰性對照溶液的制備

取除野菊花以外的其它兩味藥材，按照處方工藝制成陰性對照泡騰顆粒，按”2.2.3”項下制成陰性對照溶液。

2.2.5線性關(guān)系考察

精密吸取蒙花苷對照品溶液2、5、10、15、20μL進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以蒙花苷對照品進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算得回歸方程：y=30.556x-0.0009，r=0.9999（n=5）。蒙花苷進(jìn)樣量在0.0448～0.448μg范圍內(nèi)與峰面積成良好的線性關(guān)系。

2.2.6精密度試驗

取質(zhì)量濃度為0.0224mg/mL的對照品溶液，按“2.2.1”項色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量10μL，測定蒙花苷峰面積，結(jié)果其RSD值為0.3%，說明儀器精密度良好。

2.2.7穩(wěn)定性試驗

取同一樣品（批號：051015），按“2.2.3”項方法制備供試液，分別在0、5、11、16、24h進(jìn)樣測定蒙花苷峰面積，結(jié)果其RSD為0.6%，說明溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.8重復(fù)性試驗

精密稱取供試品1.5g，共6份，按“2.2.3”項方法制備供試液，分別進(jìn)樣測定，計算求得平均含量為2.13mg/袋，其RSD為0.9%。表明本法重復(fù)性良好。

2.2.9加樣回收率試驗

精密稱取本品（已知蒙花苷含量為0.354mg/g）0.75 g，共6份，置25mL量瓶中，分別精密加入蒙花苷對照品溶液10mL（0.0224mg/mL），按“2.2.3”項方法制備供試液，進(jìn)樣10μL進(jìn)行測定。結(jié)果得平均回收率為99.7%，RSD為1.2%。

3.討論

（1）采用原夏桑菊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中鑒別（2）方法對本品熊果酸進(jìn)行鑒別時，發(fā)現(xiàn)薄層板上供試品中熊果酸對應(yīng)斑點很模糊。通過研究聚維酮（PVP）、交聯(lián)聚維酮（PVPP）、氯化鈉、甜菊糖苷等輔料陰性試液的影響，發(fā)現(xiàn)輔料甜菊糖苷對鑒別有干擾。因此，利用甜菊糖苷與熊果酸的不同性質(zhì)，用水飽和正丁醇預(yù)處理除去甜菊糖苷保留熊果酸，其他按原方法進(jìn)行。

（2）夏枯草中雖含夏枯草苷A、B，但含量甚低，不適宜作為含量測定的指標(biāo)成分。除蒙花苷外，野菊花中還含有綠原酸，但方中另一味藥桑葉也含綠原酸。故選擇野菊花的特征成分且為主要活性成分之一的蒙花苷進(jìn)行含量測定。

（3）文獻(xiàn)中的蒙花苷含量測定方法并不完全適用于本品，經(jīng)試驗摸索，確定了本文中的色譜條件，在該色譜條件下，蒙花苷色譜峰與鄰峰能達(dá)到較好的分離，符合含量測定的要求。

【參考文獻(xiàn)】

[1]聶金媛，何燕，徐孟文，羅建春.夏桑菊泡騰顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.論文網(wǎng)，2010，10.

[2]曾三平，丁野.RPHPLC法測定夏桑菊顆粒中蒙花苷的含量[J].藥物分析雜志，2008，28（2）：2109-2100.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2005年版（第一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：219.