陳清林

（泉州市第一醫(yī)院檢驗科，福建 泉州 362000）

CMIA法與ELISA法測定乙型肝炎標志物的比較分析

陳清林

（泉州市第一醫(yī)院檢驗科，福建 泉州 362000）

目的 探討化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法（CMIA）及酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法測定乙型肝炎標志物的比較分析。方法 采用CMIA及ELISA 2種方法及相應(yīng)儀器分別檢測300份臨床血清，比較分析血清中乙型肝炎標志物的水平，對結(jié)果進行統(tǒng)計分析。結(jié)果 ELISA與CMIA法兩種方法對0.1IU/ml以下的HbsAg均具有檢出效果；HbsAg、HbsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的檢測相互符合率有差異。結(jié)論 ELISA法檢測乙型肝炎特殊模式的自動化程度較CMIA法差，CMIA法可動態(tài)觀察HBsAg 和 HbsAb的變化，對病情進行有效監(jiān)測。

乙型肝炎；乙肝病毒標志物；CMIA；ELISA

乙型肝炎病毒（HBV）感染在我國已經(jīng)流行多年，其中乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的攜帶者約占乙型肝炎（以下簡稱乙肝）患者的十分之一。乙肝的實驗室檢測對診斷/治療有重要參考價值[1]，目前國內(nèi)醫(yī)院檢驗科檢測血清乙肝兩對半大多數(shù)采用ELISA的方法，當(dāng)臨床出現(xiàn)HBsAg低濃度標本時，檢測方法的敏感度尤為重要，由于影響檢測結(jié)果的因素眾多，濃度處于灰區(qū)附近的標本檢測結(jié)果差異性大，臨床重復(fù)性差。隨著檢驗技術(shù)的不斷發(fā)展，CMI分析法以高靈敏度攻克了HbsAg低濃度不易被檢測的問題。本文將ELISA、CMI兩種方法進行比較，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本院2009年1月至2012年3月300例體檢者，其中男性192例，女性108例，年齡37～55歲，平均（38±3.9）歲。研究對象空腹，無菌情況下用無肝素真空采血管采集肘靜脈血5mL，1小時內(nèi)， 用3000r/min轉(zhuǎn)速離心10min，分離并吸取上層血清，溶血樣本棄用，即刻檢測或4℃保存3天內(nèi)檢測。檢測前樣本恢復(fù)至室溫，不可反復(fù)復(fù)溫。ELISA法測定乙肝“兩對半”試劑盒由廣州達安基因股份有限公司提供，酶標儀、洗板機由上海滬峰生物科技有限公司提供。CMI采用美國雅培全自動酶免分析儀 ARCHI-TECT-i2000及相應(yīng)配套試劑產(chǎn)品。同時將本省臨床檢驗中心提供的臨界值控制品作為質(zhì)控標準。操作方法嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.2 檢測方法

1.2.1 Elisa法

根據(jù)說明書進行上樣、孵育、洗滌、加酶標抗體、顯色、數(shù)據(jù)讀取、統(tǒng)計分析。在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

1.2.2 CMIA法

本研究CMIA法采用儀器全自動檢測，事先設(shè)置標本的位置、檢測內(nèi)容，儀器自動檢測讀取數(shù)據(jù)，根據(jù)數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

1.3 結(jié)果判讀

將本省臨床檢驗中心提供的臨界值控制品稀釋成不同濃度的標本，利用2種檢測方法進行5次檢測。ELISA法在HBsAg OD值與臨界OD值的比例超過1時顯示為陽性，HBeAb與HbcAbOD值與臨界OD值的比例≤1時顯示為陽性。HBsAg與HbsAb在CMIA法中采取定量法，使用相對光強度（RLU）與標準曲線計算出上述2種指標的濃度，HBeAg、HBcAbRLU與臨界值RLU的比值超過1時顯示為陽性，HBeAbRLU與臨界值RLU的比值≤1時顯示為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS13.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差表示。組間比較采用t檢驗，兩組間的相關(guān)性采用直線相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 ELISA與CMIA法：兩種方法對0.1IU/ml以下的HbsAg均具有檢出效果，具體如表1。

表1 2種檢測方法敏感度的比較

2.2 ELISA與CMIA法檢測時，HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb四項標志物的檢出符合率均高于95%，而HBcAb的檢出符合率僅有87.3%。具體如表2。

表2 ELISA與CMIA法檢測乙肝標志物的結(jié)果（n=300）

2.3 兩種方法精密度比較

ELISA法批內(nèi)3%～5%，批間5%～10%，而CMIA法批內(nèi)＜3%，批間＜5%。

3 討 論

ELISA檢測法是目前國內(nèi)各血液檢查最常用的方法之一，根據(jù)結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開[2-4]。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析，以了解被測標本中抗體或抗原含量。ELISA操作簡單故被廣泛運用，但其加樣、溫度、孵育時間、洗板、顯色等因素的影響，導(dǎo)致有一定的假陽性或假陰性結(jié)果，給臨床結(jié)果判讀帶來一定程度的影響[5]。

CMIA法將單克隆抗體所包被的磁性微粒，作為固相載體（如磁性微粒、樹脂、聚苯乙烯珠），使小分子顆粒與抗體結(jié)合，使抗體捕捉能力得到提高，并增強了表面積的吸咐，且能與液體在磁場中分離，使其檢測具有檢測速度快、靈敏度高、重復(fù)性好、操作簡便的優(yōu)點，對提高臨床有關(guān)疾病的診斷的速率有重要意義[6]。且該方法所使用的試劑對人體無危害、準確度高、線性范圍廣，值得臨床推廣。美國雅培全自動酶免分析儀ARCHI-TECT-i2000系統(tǒng)的自動化使人工操作誤差減少，標本間相互交叉污染率低，且儀器的自動化做到了隨機連續(xù)檢測，適于臨床檢驗即時之需，所以可檢出人群中低濃度和自然感染獲得的乙肝核心抗體。

本研究顯示ELISA及CMIA均能夠滿足臨床檢驗的需求，但是從自動化程度可知CMIA技術(shù)較為理想，但其試劑、儀器費用較高，醫(yī)療單位可根據(jù)實際情況進行檢測方法的選擇。

[1] 駱抗先.乙型肝炎基礎(chǔ)和臨床[M].2版.北京:人民衛(wèi)生出版社, 2001:56-532.

[2] Kessler HH. Comparison of currently available assays for detection of hepatitis B virus DNA in the routine diagnostic laboratory [J].Expert Rev Mol Diagn,2005,5(4):531-536.

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[4] 陳慧英,張錦鋒,岑小鵬,等.ELISA檢測乙型肝炎HBsAg室內(nèi)質(zhì)控血清的試劑和使用[J].上海醫(yī)學(xué)檢驗雜志,2000,15(4):203-205.

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R512.6+2

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1671-8194（2013）25-0213-02