李小紅

（湘鄉(xiāng)市婦幼保健院，湖南 湘潭 411400）

ELISA-TP和TPPA梅毒血清學(xué)檢測(cè)的靈敏度和特異性分析

李小紅

（湘鄉(xiāng)市婦幼保健院，湖南 湘潭 411400）

目的 探討酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA-TP）和明膠顆粒凝集試驗(yàn)法（TPPA）行梅毒螺旋體檢測(cè)的靈敏度和特異性。方法 將270例疑似梅毒感染血液樣本列入疑似組，將300例健康體檢血液樣本列入陰性組，所有血清樣本均分別采用ELISA-TP和TPPA兩種方法檢測(cè)，比較兩組檢測(cè)靈敏度及特異性。結(jié)果 TPPA法檢測(cè)靈敏度為93.33%，明顯高于ELISA-TP法88.15%的檢測(cè)靈敏度，數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較具有顯著差異（P＜0.05）；兩種方法的檢測(cè)特異性（99.00%，99.33%）無(wú)顯著差異（P＞0.05）。結(jié)論 ELISA-TP和TPPA進(jìn)行梅毒血清學(xué)檢測(cè)各具特點(diǎn)，臨床應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況來(lái)選擇適當(dāng)?shù)臋z測(cè)方法，甚至可以聯(lián)合檢測(cè)，提高檢出率。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法；明膠顆粒凝集試驗(yàn)法；梅毒螺旋體；靈敏度；特異性

梅毒屬于經(jīng)典的性傳播疾病，嚴(yán)重危害人類健康[1]。隨著臨床醫(yī)學(xué)的不斷進(jìn)步，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)梅毒抗體的方法也逐漸增多，為梅毒陽(yáng)性的檢出和及時(shí)有效的臨床施治、控制感染等提供了便利。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA-TP）和明膠顆粒凝集試驗(yàn)法（TPPA）是兩種常見的梅毒螺旋體檢測(cè)方法[2]，本文對(duì)該兩組方法臨床檢測(cè)的靈敏度和特異性進(jìn)行分析，希望為梅毒的檢驗(yàn)提供科學(xué)依據(jù)。具體分析報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 樣本來(lái)源

血清樣本為我院實(shí)驗(yàn)室2012年1～12月間收集的疑似梅毒感染血液樣本，共270例列入疑似組，包括男性152例，女性118例；年齡最低22歲，最高53歲，平均（36.5±8.4）歲。另收集我院健康體檢查者血液樣本300例列入陰性組，包括男性166例，女性134例；年齡最低18歲，最高59歲，平均（38.2±7.8）歲。所有血清樣本均分別采用ELISA-TP和TPPA兩種方法檢測(cè)。

1.2 試劑和儀器

ELISA試劑盒由北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司提供，生產(chǎn)批號(hào)：V20100404；TPPA試劑盒由日本富士瑞必歐株式會(huì)社提供，生產(chǎn)批號(hào)：VN00201。洗板機(jī)采用美國(guó)基因公司提供的CAT5955型；自動(dòng)酶標(biāo)儀采用S/N5782。

1.3 方法

所有疑似病例均取空腹肘靜脈血，以4000r/min速度離心處理后，分離上清液，將血清樣本置入4℃環(huán)境保存，待測(cè)。

1.3.1 ELISA-TP法

參照試劑盒相關(guān)說(shuō)明，于酶標(biāo)板各條孔中分別加入酶標(biāo)抗原液，再逐個(gè)加入待測(cè)血清混勻，于37℃環(huán)境下孵育，35min后取出沖洗，注入染色劑，37℃環(huán)境下孵育15min后加入終止液，應(yīng)用波長(zhǎng)450nm酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)，讀取吸光度，并根據(jù)試劑盒說(shuō)明給出的臨界值判定陰性或陽(yáng)性。

1.3.2 TPPA法

按照試劑盒說(shuō)明書內(nèi)容，于室溫下以稀釋液分別在U型板上對(duì)各血清樣本進(jìn)行稀釋處理，再加入致敏或未致敏明膠顆粒，輕微振蕩數(shù)次，將振蕩液靜置3h后，觀察結(jié)果，對(duì)加入致敏顆粒后孔≥1∶80的樣本，列入陽(yáng)性樣本，其余為陰性樣本。

1.4 觀察指標(biāo)

分別觀察和記錄兩種檢測(cè)方法的陽(yáng)性、陰性檢出情況，計(jì)算靈敏性、特異性，并進(jìn)行比較分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所得數(shù)據(jù)均錄入軟件SPSS18.0，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，當(dāng)P＜0.05時(shí)數(shù)據(jù)間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 陽(yáng)性和陰性檢測(cè)

ELISA-TP與TPPA檢測(cè)的陽(yáng)性、陰性結(jié)果詳見表1。ELISA-TP法檢測(cè)疑似組的陽(yáng)性和陰性數(shù)分別為238例和32例，陰性組的陽(yáng)性和陰性數(shù)分別為3例和297例；TPPA法檢測(cè)疑似組的陽(yáng)性和陰性數(shù)分別為252例和18例，陰性組的陽(yáng)性和陰性數(shù)分別為2例和298例。

表1 兩種檢測(cè)方法的陽(yáng)性、陰性檢出情況比較（例）

2.2 靈敏度和特異性

ELISA-TP與TPPA檢測(cè)的靈敏度與特異性情況詳見表2。TPPA法檢測(cè)靈敏度93.33%明顯高于ELISA-TP法88.15%，，數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較具有顯著差異（P＜0.05）；兩種方法的檢測(cè)特異性（99%，99.33%）無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表2 兩種檢測(cè)方法靈敏度和特異性比較（%）

3 討 論

社會(huì)的開放和性觀念的不斷變革，婚前性行為或非婚性行為在社會(huì)上比較多見，也已經(jīng)被多數(shù)人所接受，但由于人們性衛(wèi)生和自我保護(hù)的觀念不強(qiáng)，性傳播類疾病隨之增多，嚴(yán)重危害人類健康，甚至威脅生命。作為以性傳播為主要途徑的一種感染類疾病，梅毒的發(fā)病率排在性傳播傳染病的第5位，應(yīng)受到廣泛重視[3]。

梅毒螺旋體主要分布在受感染者的腦脊液及血液當(dāng)中，梅毒感染可分為先天性及后天性兩類，先天性感染主要由母體垂直傳播，屬血液傳播，后天性感染則主要通過(guò)性傳播[4]。梅毒感染后，機(jī)體防御系統(tǒng)會(huì)產(chǎn)生抗梅毒螺旋體抗原和抗類脂抗原的特異性抗體，因而通過(guò)血液檢測(cè)，可檢測(cè)出感染者血清內(nèi)抗體，從而提示患者的染病情況，幫助臨床診斷和治療。

ELISA-TP與TPPA是梅毒螺旋體抗原檢測(cè)的常用方法。ELISA法以梅毒螺旋體基因工程抗原特點(diǎn)為基礎(chǔ)，主要應(yīng)用雙抗原夾心法，利用氧化物酶標(biāo)記基因重組的梅毒抗原來(lái)獲得檢測(cè)結(jié)果。楊小華等報(bào)道對(duì)60例血清樣本進(jìn)行檢測(cè)，ELISA法檢出陽(yáng)性率為90%，可見ELISA法檢測(cè)梅毒具有較高的檢出率[5]。TPPA主要是通過(guò)把維生素的精制菌體成分在人工載體明膠粒上包被，來(lái)檢測(cè)梅毒特異性抗體。白莉等應(yīng)用TPPA檢測(cè)梅毒的陽(yáng)性率為75.27%[6]。

在本組研究中兩種方法特異性相似，TPPA法對(duì)梅毒的檢測(cè)靈敏度顯著高于ELISA法，提示TPPA檢測(cè)法的有效性。但值得注意的是，TPPA在操作手法上相對(duì)比較繁，耗時(shí)長(zhǎng)，在半定量檢測(cè)時(shí)不利于快速獲得檢驗(yàn)結(jié)果。因此筆者建議，ELISA-TP和TPPA進(jìn)行梅毒血清學(xué)檢測(cè)各具特點(diǎn)，臨床應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況來(lái)選擇適當(dāng)?shù)臋z測(cè)方法，甚至可以聯(lián)合檢測(cè)，將TPPA作為確認(rèn)檢測(cè)的方法，從而提高臨床檢出率，盡早的確診和制定治療計(jì)劃。

[1] 李鳳玉,黃建城.多種梅毒檢測(cè)方法的比較[J].中國(guó)醫(yī)藥指南,2012, 10(17):125-127.

[2] 趙艷梅,周子昱,曹紅榮,等.徐州市無(wú)償獻(xiàn)血者梅毒ELISA與TPPA檢測(cè)結(jié)果分析[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2012,14(3):255-256.

[3] 楊波.血清學(xué)檢測(cè)梅毒抗體結(jié)果對(duì)比[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥,2012,7 (15):82-84.

[4] 張春秀,胡亞遠(yuǎn),姚藝斌.TRUST與TPPA聯(lián)合檢測(cè)的臨床應(yīng)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,30(3):278-280.

[5] 楊小華,李麗莉,趙夏豐.TP-ELISA法對(duì)梅毒檢測(cè)的診斷學(xué)評(píng)價(jià)[J].國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào),2010,16(12):1483-1485.

[6] 白莉,郁華,石林,等.728例篩查TP-ELISA陽(yáng)性再用TPPA和RPR方法檢測(cè)梅毒抗體結(jié)果分析[J].醫(yī)學(xué)美學(xué)美容,2012,9(9):122-124.

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1671-8194（2013）25-0120-02