郭芙蓮 王秀霞 周媛媛 于會豐

（漯河醫(yī)學高等專科學校，河南 漯河 462002）

木瓜黃精膏對衰老模型小鼠體內(nèi)抗氧化的作用

郭芙蓮 王秀霞 周媛媛 于會豐

（漯河醫(yī)學高等?？茖W校，河南 漯河 462002）

目的 探討木瓜黃精膏（PRO）對衰老模型小鼠組織勻漿中MDA的含量及SOD活性的影響。方法 采用D-半乳糖注射造成衰老模型，同時給予不同劑量的PRO。40日后檢測小鼠組織勻漿中SOD活性、MDA含量。結(jié)果 PRO可顯著提高小鼠組織勻漿中SOD的活性，顯著降低MDA含量，與衰老模型組相比較有顯著性差異（P＜0.01）。結(jié)論 PRO具有較好的體內(nèi)抗氧化作用。

木瓜黃精膏；抗氧化；SOD；MDA

衰老的主要原因之一是機體在進行氧化代謝的同時，不斷地產(chǎn)生自由基，過剩的自由基可作用于血液、細胞、組織等脂類物質(zhì)，使其變成脂質(zhì)過氧化物，這些過氧化物沉積在細胞膜上，使細胞膜喪失功能，造成細胞活力下降，組織器官功能衰退，機體進入衰老狀態(tài)。衰老實際就是細胞凋亡的過程[1]，凋亡細胞內(nèi)的ROS生成增加，與此同時消除能力下降，而自由基能和DNA、脂質(zhì)體等發(fā)生反應，從而引起DNA鏈斷裂和脂質(zhì)過氧化等[2]，線粒體的功能發(fā)生紊亂進一步使ROS的生成增多，進一步升高細胞內(nèi)的脂類過氧化水平而導致機體衰老，所以維持體內(nèi)自由基清除劑水平的或適當水平抗氧化劑能夠推遲衰老、延長壽命。研究表明[3]，木瓜黃精膏（PRO）可以降低衰老模型小鼠血清MDA含量、提高SOD活性，本實驗進一步觀察PRO對衰老模型小鼠組織勻漿MDA含量及SOD活性的影響，進一步探討其抗氧化作用，為解決一些老年性疾病及衰老問題提供參考?，F(xiàn)報道如下。

表1 PRO對衰老模型小鼠組織勻漿中的MDA含量的影響（nmol/mg，n=10，）

表1 PRO對衰老模型小鼠組織勻漿中的MDA含量的影響（nmol/mg，n=10，）

*P＜0.05；**P＜0.01，與模型對照組比較

組別腦勻漿心勻漿肝勻漿腎勻漿空白對照13.244±0.67215.655±1.2045.144±0.3702.439±0.215模型對照15.292±0.34815.663±0.3346.889±0.4012.754±0.135 PRO小劑量12.945±1.08215.104±0.5454.896±0.401**2.308±0.137 PRO中劑量11.466±0.675**15.724±0.2954.581±0.137**2.195±0.093* PRO大劑量9.812±0. 184**14.291±0.099*3.365±0.217**1.716±0.109**

表2 PRO對衰老模型小鼠組織勻漿中的SOD活性的影響（nmol/mg，n=10，）

表2 PRO對衰老模型小鼠組織勻漿中的SOD活性的影響（nmol/mg，n=10，）

*P＜0.05，**P＜0.01，與模型對照組比較

組別腦勻漿心勻漿肝勻漿腎勻漿空白對照47.699±2.57439.667±2.00941.841±1.28151. 645±0.829模型對照42. 039±0.86336.528±1.38438.404±0.80949.319±0.568 PRO小劑量52. 071±0.987*43.224±1.41549.326±3.086 51.383±1.175* PRO中劑量64. 900±1.131**48 999±2.877**61.079±1.859**60.359±1.157* PRO大劑量72. 562±1.116**59. 788±1.493**67.303±2.270**67.631±0.357**

1 材料與方法

1.1 實驗動物

清潔級昆明種小白鼠50只，體質(zhì)量（23±2）g，雌雄各半，購自鄭州大學實驗動物中心。

1.2 中藥及制備

所有的中藥均從鄭州藥材公司獲得，由漯河醫(yī)學高等專科學校生藥教研室鑒定。將木瓜、黃精、大棗、荷葉等中藥按照比例委托漯河市中醫(yī)院制劑室制備，將制備好的藥膏放于生理鹽水中制成混懸液，分裝成3份，將生藥濃度分別濃縮為5g/mL、3g/mL、2.5g/mL。把配置好的藥液經(jīng)過高壓滅菌后放置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 主要試劑

D-半乳糖（上海試劑二廠），MDA試劑盒、SOD試劑盒（南京建成生物工程研究所），其余試劑都為國產(chǎn)分析純。

1.4 儀器

721-分光光度計（上海第三分析儀器廠），TGL240B離心機（上海安亭科學儀器廠產(chǎn)品，常溫冰箱（BCD-312KA 新鄉(xiāng)），BL3100型（精確度0.1 g）和BP221S型（精確度0.1 mg）電子天平，移液器（GILSON 法國），超純水儀（Milli-Qacademic 美國）。

1.5 實驗方法

1.5.1 分組及給藥

昆明種小鼠，置于室溫（22±2）℃的動物房中自由進食水，適應性喂養(yǎng)1周后將小鼠隨機分成5組，即空白組、模型組、PRO大、中、小劑量組，每組10只，雌雄各半?？瞻捉M頸后皮下注射0.5mL生理鹽水。其他各組每只皮下注射5%D-半乳糖0.5mL，每日1次，連用30d，造出衰老模型[4]。造模成功之后，空白對照組和模型對照組每只灌服等容積生理鹽水0.5mL；PRO大、中、小劑量組分別按30g/（kg· d）、15g/（kg·d）、7.5g/（kg·d）劑量灌服中藥；連續(xù)給藥40日。

1.5.2 標本制備及檢測

40日后處死小白鼠，取腦、心、肝、腎，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，以上器官的組織各取0.2 g與生理鹽水按照1∶9制成10 g/100 mL勻漿，4000 r/min取上清待測，SOD、MDA含量的測定嚴格按照試劑盒標注方法進行各種試劑的配制，其步驟嚴格按照操作規(guī)程進行，應用分光光度儀0.5cm光徑，550nm，運用分光光度儀比色的方法對各管吸光度值進行檢測。

1.6 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析

采用Excel 2003錄入和管理數(shù)據(jù)。 數(shù)據(jù)資料用均值±標準差（）表示，用SPSS 10.0軟件統(tǒng)計分析，實驗結(jié)果用χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 PRO對衰老模型小鼠組織勻漿MDA的影響。模型對照組與空白對照組比較，小鼠組織勻漿中MDA含量均顯著升高，造模成功；而PRO大、中劑量組小鼠組織勻漿中MDA含量顯著降低，與衰老模型組相比有顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01），表明PRO可以有效地減少小鼠體內(nèi)MDA的含量，并且有一定的量效關系，結(jié)果見表1。

2.2 PRO對衰老模型小鼠組織勻漿SOD的影響。模型對照組與空白對照組比較，小鼠組織勻漿中SOD含量均減少，造模成功；各劑量組小鼠組織勻漿中SOD活性均顯著升高（P＜0.05或P＜0.01），提示PRO可以提高小鼠組織勻漿中SOD活性，大劑量組尤為明顯（結(jié)果見表2）。

3 討 論

氧自由基是一類可與生物膜脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、酶、DNA等重要生物大分子相互作用，并引起機體損傷的物質(zhì)。過量的自由基會引發(fā)機體產(chǎn)生一系列疾病，如：動脈硬化、糖尿病、風濕病、心血管及大腦的局部缺血性損傷等。人體的絕大部分生理作用都需要氧氣的參與，生物學上稱“氧化還原反應”，除了正常的氧化還原反應產(chǎn)生活性氧外，其他如環(huán)境污染、紫外線等外界刺激，也可導致體內(nèi)氧自由基過剩。自由基的氧化作用能破壞細胞中的遺傳基因，損害免疫功能。自由基的不斷氧化是機體衰老和發(fā)生眾多疾病的重大原因。因此，對抗自由基的氧化作用，就成為延緩衰老、改善亞健康的重要方法。超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）是一種生命體內(nèi)的活性物質(zhì)，它能消除生物體在新陳代謝過程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)，是生物體內(nèi)清除自由基的首要物質(zhì)[5]。氧自由基清除劑SOD能夠使有毒的O2-和H2O2經(jīng)過歧化和還原后得到清除，從而阻止它們引起自由基的一系列鏈鎖反應而降低代謝產(chǎn)物MDA的生成，所以，SOD活性的大小能夠作為機體抵抗衰老的一項非常重要的指標，也可將MDA作為抗氧化、抗衰老的另一項指標。還有研究表明，木瓜能夠清除超氧陰離子自由基、1，1-二苯基-2-苦肼基自由基（DPPH·）、羥自由基，并且木瓜的提取物對于小鼠血清中的MDA有抑制作用，同時增強SOD活性[6]。光皮木瓜提取物中的多酚類物質(zhì)含量較高并有較強的抗氧化活性[7]。黃精的抗衰老作用機理[8]主要是促進蛋白質(zhì)的合成、減少細胞內(nèi)代謝廢物的含量、對抗自由基的損傷及相關酶的影響以及促進能量生成等。馬鳳巧等[9]研究了黃精對衰老大鼠海馬組織SOD活性及MDA含量影響，結(jié)果顯示，明顯提高大鼠海馬組織中SOD活性，降低MDA含量。王玉勤[10]等研究表明PSP能明顯降低大鼠血清、骨骼肌MDA含量，提高大鼠血清內(nèi)源性SOD和GSH- Px的活性及骨骼肌內(nèi)源性SOD活性。另有研究表明，荷葉生物堿鹽高劑量組可有效降低肝臟組織勻漿及血清的MDA含量，同時降低肝臟的TG、TC指標[11]。馮峰等研究表明荷葉提取物對DPPH有較強的清除作用，具有較強的抗氧化作用。由此得出結(jié)論，荷葉的提取物是一種很好的抗氧化劑，即使在較低的濃度和不需要特別精制的情況下也能夠顯示出比較強的抗氧化能力。上述研究都是單純地采用木瓜、荷葉或黃精等其中一種中藥對MDA或SOD以及抗氧化等作用的實驗研究。

本研究采用木瓜、黃精、荷葉、大棗四味中藥組方，木瓜養(yǎng)顏美容、健脾和胃；黃精益氣補脾、潤肺滋腎；荷葉抗衰老、解毒；大棗不僅營養(yǎng)豐富，而且藥用價值也很高，民間有“一日吃三棗，終生不顯老”的說法。四藥合用對衰老模型小鼠組織勻漿SOD、MDA的進行測定，結(jié)果顯示，模型對照組與空白對照組比較，小鼠組織勻漿中SOD活性降低，MDA含量升高，說明造模成功。PRO大、中劑量組小鼠組織勻漿中SOD活性顯著升高，MDA含量明顯降低，尤其是肝勻漿與衰老模型組相比有顯著性差異（P＜0.01），PRO小劑量組小鼠肝勻漿中MDA含量顯著降低，與衰老模型組相比有顯著性差異（P＜0.01），實驗結(jié)果表明PRO可以降低小鼠組織中MDA的含量及增強SOD活性，這可能是PRO抗衰老的原因之一。

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R285.5

B

1671-8194（2013）22-0081-03

河南省教育廳自然科學項目（No：2009C310008）