張玉朝

（河南省南陽市中心血站，河南 南陽 473004）

抑癌基因PTEN在腎透明細胞癌組織中的表達及臨床意義

張玉朝

（河南省南陽市中心血站，河南 南陽 473004）

目的 探討抑癌基因PTEN在腎透明細胞癌中的表達及發(fā)生、發(fā)展中的意義。方法 采集自醫(yī)院的腎透明細胞癌組織（60例）及正常腎組織（20例），用免疫組織化學法檢測抑癌基因PTEN的表達情況。結果 PTEN在腎透明細胞癌組織和正常腎組織中的陽性表達率分別為96.7%和5%（P＜0.05），差異顯著具有統計學意義。結論 PTEN可作為評價腎透明細胞癌發(fā)生的生物學指標。

PTEN；腎透明細胞癌；免疫組化

腎癌是泌尿系統惡性腫瘤中常見的疾病之一，研究表明，引起腎癌的因素較為復雜，抑癌基因PTEN(phosphotase and tensin homolog deleted from chromsome 10，PTEN)是較為重要的一種[1-3]，該基因編碼的蛋白具有磷酸酶的活性，在周期阻滯和細胞凋亡過程中起到非常關鍵的作用[4]。本研究運用免疫組織化學的方法，檢測腎透明細胞癌及正常腎組織中抑癌基因PTEN的表達情況，探討PTEN在該病的發(fā)生、發(fā)展中的意義及對患者預后的影響。

1 材料與方法

1.1 標本

病例樣本取自南陽市第三人民醫(yī)院2008年至2012年經手術切除并經病理學證實的原發(fā)性腎透明細胞癌組織標本60例，術前均未接受化、放療。

1.2 試劑及儀器

兔抗人PTEN多克隆抗體（上海億欣生物科技有限公司）；生物素二抗、DAB顯色試劑盒（碧云天生物技術公司），Olympus BH-2顯微鏡照相系統；Leica Q570c真彩圖像分析儀(Leica)。

1.3 免疫組化法檢測PTEN

常規(guī)石蠟包埋并切片。然后脫蠟，脫水，抗原修復，封閉30min后，滴加適當稀釋(1∶100)后的兔抗人PTEN多克隆抗體，4℃過夜，洗脫后滴加二抗，反應1h，DAB顯色、脫水、透明、封片。陽性和陰性對照的設定：用已知的陽性組織切片作為陽性對照，緩沖液代替一抗作為陰性對照。用Olympus BH-2顯微鏡照相系統進行照相后進行分析。

1.4 結果判定

陽性結果的判定標準：參考已發(fā)表文獻[5]的評分方法，陽性細胞數計分標準：陽性細胞數＜5%判定為0；陽性細胞數＞5%，但≤35%判定為1；陽性細胞數＞35%，但≤70%判定為2；陽性細胞數＞70%判定為3。著色強度計分標準：完全沒有著色判定為0，著色很弱判定為1，呈明顯的棕黃色判定為2。陽性分級標準：上述兩項積分相加，0～1分之間為(-)，2分為(±)，3分為(+)，4分為(++)，5分為(+++)：+～+++判定為陽性，- ～±判定為陰性。

1.5 統計學分析

應用統計學軟件SPSS 13.0，采用Krusca-Wallis進行非參數檢驗。P＜0.05表示差異顯著，具有統計學意義。

2 結 果

2.1 免疫組織化學染色結果

免疫組化結果顯示，正常腎臟組織中PTEN蛋白陽性表達率為5%(1/20)，明顯低于腎透明細胞癌組織96.7%（58/60）的表達率（P＜0.05），見表1、圖1。

表1 PTEN在正常腎組織、腎透明細胞癌組織中的表達

圖1 PTEN在腎透明細胞癌組織中的表達

2.2 PTEN表達與腎透明細胞癌患者臨床病理特征之間的關系

結果顯示組織的浸潤深度、淋巴結轉移、臨床分期等與PTEN的表達有較為密切的關系（表2）。

表2 PTEN基因的表達情況與腎透明細胞癌患者臨床病理特征之間的關系

3 討 論

抑癌基因PTEN又稱為MMAC1（mutated in multiple advanced cancers 1)，是研究者后來發(fā)現的一種抑癌基因，參與腫瘤細胞的浸潤及腫瘤轉移的調節(jié)等過程[6]。

本實驗用免疫組化的方法檢測了抑癌基因PTEN在腎透明細胞癌組織和正常腎臟組織中的表達情況。結果發(fā)現，與正常腎組織相比，在腎透明細胞癌患者的組織內有較強的PTEN的表達。本實驗還發(fā)現，部分腎透明細胞癌組織中還有PTEN的異常表達或者表達缺失或表達減弱現象，本研究結果顯示，PTEN在正常腎臟組織中基本無表達，說明PTEN能選擇性的表達于腎透明細胞癌組織中，具有一定的組織嗜性，分析認為其表達可能是誘發(fā)腎透明細胞癌發(fā)生的重要因素之一。進一步的分析PTEN表達情況與腎透明細胞癌之間的主要參數的關系，發(fā)現PTEN的表達與病理分期沒有明顯關系，與組織的浸潤深度、淋巴結轉移、臨床分期有明顯的關系。

綜上所述，PTEN是繼p53基因之后另外一個與腫瘤的發(fā)生密切相關的一個抑癌基因。研究其作用機制對腫瘤的診斷及其基因治療具有重要意義。

[1] Li J,Yen C,Liaw D,et al.PTEN,a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain,breast,and prostate cancer[J]. Science,1997,275 (5308): 1943-1947.

[2] Li DM,Sun H.TEP1,encoded by a candidate tumor suppressor locus,is a novel protein tyrosine phosphatase regulated by transforming growth factor beta[J].Cancer Research,1997,57(11): 2124-2129.

[3] Steck PA,Pershouse MA,Jasser SA,et al.Identification of a candidate tumour suppressor gene,MMAC1,at chromosome 10q23.3 that is mutated in multiple advanced cancers[J].Nature Genetics,1997, 15(4): 356-362.

[4] Chu EC,Tarnawski AS.PTEN regulatory functions in tumor suppression and cell biology. Medical science monitor: international medical[J].J Expe Clin Res,2004,10(10): RA235.

[5] Shimizu M,Saitoh Y,Itoh H.Immunohistochemical staining of Haras oncogene product in normal,benign,and malignant human pancreatic tissues[J].Human Pathology,1990,21(6): 607-612.

[6] Keniry M,Parsons R.The role of PTEN signaling perturbations in cancer and in targeted therapy[J].Oncogene,2008,27(41): 5477-5485.

R737.11

B

1671-8194（2013）23-0185-02