丁 樂(lè)

（贛州市婦幼保健院，江西 贛州 341000）

高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方醋酸曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德和氯霉素的含量

丁 樂(lè)

（贛州市婦幼保健院，江西 贛州 341000）

目的 建立HPLC法同時(shí)測(cè)定復(fù)方醋酸曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德和氯霉素的含量。方法 用Hypersil CN（200mm×4.6mm，5μm）色譜柱，以水-甲醇-四氫呋喃（60∶28∶12）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為240nm。結(jié)果 醋酸曲安奈德和氯霉素的平均回收率分別為101.0%（RSD為1.23%）和100.1%（RSD為1.40%）；其濃度分別在5.02～100.40μg/mL（r=0.9999，n=5）及99.73～1994.50μg/mL（r=0.9998，n=5）范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。結(jié)論 該方法準(zhǔn)確可靠，可用于復(fù)方醋酸曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德和氯霉素的含量測(cè)定。

復(fù)方醋酸曲安奈德乳膏；HPLC；含量測(cè)定

復(fù)方醋酸曲安奈德乳膏（去氯霜）是以醋酸曲安奈德和氯霉素（圖1）為主藥，以硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、白凡士林、十二烷基硫酸鈉、羥本乙酯、甘油等為基質(zhì)制成的乳劑型軟膏，是一種糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物，外用具有抗炎、抗過(guò)敏及止癢作用，臨床上主要用于過(guò)敏性皮炎、濕疹、神經(jīng)性皮炎、脂溢性皮炎及騷癢癥等疾病的治療，效果良好。已有較多文獻(xiàn)[1-3]報(bào)道用HPLC法同時(shí)測(cè)定其中兩主藥成分的含量，但均用十八烷基鍵合硅膠作色譜柱，而此色譜柱條件下色譜峰分離度與其保留時(shí)間難以協(xié)調(diào)。本文經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)研究，采用氰基鍵合硅膠色譜柱，以水-甲醇-四氫呋喃（60∶28∶12）作為流動(dòng)相，在此色譜條件下兩主成分的峰形、分離度、保留時(shí)間均較好，得到了較為理想的結(jié)果。

圖1 分子結(jié)構(gòu)式（A：醋酸曲安奈德Triamcinolone Acetonide；B：氯霉素chloromycetin）

1 儀器與試藥

1.1 儀器

采用Agilent 1100型高效液相色譜儀（二極管陣列檢測(cè)器），自動(dòng)定量進(jìn)樣器；HP1100色譜工作站。

1.2 試藥

醋酸曲安奈德對(duì)照品（中檢所，批號(hào)：100125-201004）和氯霉素對(duì)照品（中檢所，批號(hào)：130303-201114）；復(fù)方醋酸曲安奈德乳膏（批號(hào)：20121012，20121120，20121121）及其空白基質(zhì)均由吉安市中心人民醫(yī)院提供；甲醇和四氫呋喃均為色譜純，水為重蒸水。

2 色譜條件

采用Hypersil CN（200mm×4.6mm，5μm）色譜柱，以水-甲醇-四氫呋喃（60∶28∶12）為流動(dòng)相，流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為240nm，室溫為柱溫，進(jìn)樣量為20μL。

3 方法與結(jié)果

3.1 試液的配制

①對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備：精密稱(chēng)取醋酸曲安奈德、氯霉素對(duì)照品適量，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，使制成醋酸曲安奈德、氯霉素濃度分別為0.5mg/mL、10mg/mL的溶液。②對(duì)照品溶液的制備：精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液5mL，置50mL量瓶中，用甲醇稀釋到刻度，搖勻。用移液管移取25～50mL量瓶中，加水稀釋到刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。③供試品溶液的制備：精密稱(chēng)取樣品5g（共三批，每批稱(chēng)兩份）置50mL量瓶中，加甲醇適量，置80℃水浴中加熱溶解3min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；置冰浴中冷凍2h后，過(guò)濾。精密量取放置至室溫的續(xù)濾液25mL，置50mL量瓶中，加水稀釋到刻度，過(guò)濾，取濾液作為供試品溶液。

3.2 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)

在2所述色譜條件下，照3.6樣品含量測(cè)定項(xiàng)下的方法進(jìn)行測(cè)定，對(duì)照品、樣品色譜圖見(jiàn)圖2，醋酸曲安奈德保留時(shí)間約10.322'，理論塔板數(shù)不小于5000，氯霉素保留時(shí)間約為6.438'，理論塔板數(shù)不小于3000，分離度＞3。

3.3 空白干擾試驗(yàn)

按處方配比（處方為：醋酸曲安奈德0.5g，氯霉素10g，硬脂酸87.5g，單硬脂酸甘油酯75g，甘油87.5g，白凡士林80g，十二烷基硫酸鈉10g，羥苯乙酯1g，2，6-二叔丁基-4-甲基酚0.5g，二甲亞砜1.25g，丙酮1.25g，加純化水適量使成1000g。制備方法：取單硬脂酸甘油酯、硬脂酸、白凡士林、2，6-二叔丁基-4-甲基酚于水浴中加熱融化，保持溶液85℃左右，作為油相；取十二烷基硫酸鈉、羥苯乙酯加熱水溶解，保持溶液85℃左右，作為水相。將水相緩緩加入油相中，邊加邊攪拌至乳化完全，降至40℃，加入用二甲亞砜、丙酮、甘油溶解的醋酸曲安奈德和氯霉素，攪拌至勻，冷卻即得。）配制空白基質(zhì)，照供試品溶液制備項(xiàng)下的方法制備空白樣品溶液，進(jìn)樣，得到色譜圖（圖2）。由該色譜圖可知，在醋酸曲安奈德和氯霉素相應(yīng)的位置無(wú)干擾峰出現(xiàn)。

3.4 線(xiàn)性試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用甲醇-水（50∶50）作溶劑稀釋成系列濃度的對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣20μL，記錄峰面積，以濃度（C）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析，得醋酸曲安奈德回歸方程：A=3.65+30.92C(r=0.9999) ；氯霉素回歸方程：A=134.85+10.60C（r=0.9998）。結(jié)果見(jiàn)表1，由表可知，醋酸曲安奈德在5.02～100.40μg/mL及氯霉素在99.73～1994.50μg/mL的濃度范圍內(nèi)均成良好的線(xiàn)性。

3.5 精密度實(shí)驗(yàn)

精密量取適量對(duì)照品儲(chǔ)備液，用甲醇-水（50∶50）作溶劑制成含醋酸曲安奈德25μg/mL、氯霉素500μg/mL的對(duì)照品溶液，精密量取20μL按2所述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄其峰面積，計(jì)算得醋酸曲安奈德峰面積的RSD為0.35%，氯霉素峰面積的RSD為0.11%。結(jié)果見(jiàn)表2，由表2可知，該實(shí)驗(yàn)方法精密度良好。

圖2 HPLC色譜圖（A：對(duì)照品溶液；B：空白基質(zhì)；C：樣品溶液）

表1 線(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 醋酸曲安奈德回收率情況

表4 氯霉素回收情況

3.6 回收試驗(yàn)

按處方比例配置各含醋酸曲安奈德及氯霉素為標(biāo)示量80%、100%、120%的模擬樣品九份，按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法制備供試品溶液并進(jìn)行含量測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算回收率。醋酸曲安奈德和氯霉素的平均回收率分別為101.0%（RSD為1.23%，n=9）和100.1%（RSD為1.40%，n=9）。其結(jié)果見(jiàn)表3和表4，由表可知該實(shí)驗(yàn)方法回收率良好。

3.7 樣品含量測(cè)定

取3.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液及供試品溶液，分別進(jìn)樣20μL，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算醋酸曲安奈德和氯霉素的含量，其結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 樣品測(cè)定結(jié)果

4 討 論

4.1 色譜柱的選擇

文獻(xiàn)報(bào)道所用的色譜柱均為十八烷基鍵合硅膠柱，經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該柱雖可完全分離這兩組分，但氯霉素和醋酸曲安奈德的保留時(shí)間相差較大，氯霉素幾乎無(wú)保留，而醋酸曲安奈德的出峰時(shí)間較長(zhǎng)?？紤]到氯霉素極性較強(qiáng)，為增加其保留時(shí)間，特考慮采用極性較強(qiáng)的氰基鍵合硅膠色譜柱。試驗(yàn)表明，在使用該色譜柱的條件下，兩組分不僅能很好的分離，而且保留時(shí)間恰當(dāng)，在12min內(nèi)可以完成色譜分析。

4.2 流動(dòng)相的選擇

若單純采用甲醇和水作流動(dòng)相，則氯霉素與輔料中羥苯乙酯的分離度達(dá)不到要求，隨著改性劑四氫呋喃的加入，氯霉素與羥苯乙酯能很好的分離，綜合考慮各種因素如各峰的分離度、保留時(shí)間及流動(dòng)相的黏度，故確定了本文的流動(dòng)相比例。

4.3 溶劑的選擇

本實(shí)驗(yàn)過(guò)程中曾試過(guò)選擇用甲醇-水(50∶50)作溶劑溶解樣品，但回收率較低；后改為先用甲醇溶解，再在最后一步增加水稀釋至刻度[相當(dāng)于甲醇-水（50∶50）]，一是可以排除一部分基質(zhì)的干擾，延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，二是峰形也有所改善，回收率也較好。

4.4 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

因處方中兩主成分的含量相差20倍，故選擇對(duì)醋酸曲安奈德更為敏感的240nm波長(zhǎng)為檢測(cè)波長(zhǎng)。

[1] 李莉,趙作連.李曉敏,等.HPLC法測(cè)定曲氯霜中氯霉素和醋酸曲安奈德的含量[J].中國(guó)藥事,2006,29(9):539-540.

[2] 李?lèi)?ài)英,趙作連.HPLC法同時(shí)測(cè)定曲氯乳膏中醋酸曲安奈德和氯霉素的含量[J].藥物分析雜志,2007,27(2):272.

[3] 張紅,談?dòng)钣?高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方醋酸曲安奈德乳膏中2組分的含量[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2004,24(12):795-796.

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1671-8194（2013）23-0062-03