林穎怡 張 雪

（廣州王老吉藥業(yè)股份有限公司，廣東 廣州 510450）

HPLC法測(cè)定紫地寧血散中沒(méi)食子酸的含量

林穎怡 張 雪

（廣州王老吉藥業(yè)股份有限公司，廣東 廣州 510450）

目的 建立測(cè)定紫地寧血散中沒(méi)食子酸含量的方法。方法 采用HPLC法，色譜柱為Diamond diamonsil C18柱，乙腈-含0.1%三乙胺的0.1%磷酸溶液（1∶99）為流動(dòng)相，流速1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為273nm，柱溫為30℃。結(jié)果 沒(méi)食子酸在20.475～2047.5ng范圍內(nèi)與其峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率為100.5%，分析方法精密度（RSD）為0.4%（n=6）。結(jié)論 所用方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，能有效的控制該制劑的質(zhì)量。

紫地寧血散；沒(méi)食子酸；HPLC

紫地寧血散來(lái)源于（90）衛(wèi)藥準(zhǔn)字Z-43號(hào)。主要由大葉紫珠、地菍2味藥材組成。具有清熱涼血，收斂止血的作用，主治胃及十二指腸潰瘍或胃炎引起的吐血、便血，屬胃中積熱型者。本品種原執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)，為確保質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)能夠更好地控制質(zhì)量，本文建立了測(cè)定地菍中沒(méi)食子酸含量的方法[1]，結(jié)果表明，本方法可操作性強(qiáng)，穩(wěn)定性好，可以用于控制紫地寧血散含量的質(zhì)量。

1 儀器與試劑

島津LC-20AT VP高效液相色譜儀；SPD-M10A VP檢測(cè)器；LC-Solution色譜工作站；色譜柱：Diamonsil C18（200×4.6mm，5μm），柱編號(hào)：8022889；沒(méi)食子酸（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110831-200302）；紫地寧血散（由廣州某藥店提供，批號(hào)：J00001；G00001；G00003）；乙腈為色譜純，其他均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備

取沒(méi)食子酸對(duì)照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1mL含20μg的溶液，即得。

2.2 供試品溶液的制備

取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取約1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率50Hz）30min，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得[2]。

2.2 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱為C18柱（Diamond Diamonsil C18柱（200×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-含0.1%三乙胺的0.1%磷酸溶液（1∶99）；流速為1mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為273nm；柱溫為30℃。分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL注入色譜儀，見(jiàn)圖1。

2.3 線性關(guān)系考察

精密稱取沒(méi)食子酸對(duì)照品4.095mg，用80%甲醇定容到20mL量瓶中，濃度為204.75μg/mL（對(duì)照品溶液母液），再精密吸取上述對(duì)照品溶液母液，移入20mL量瓶中，用80%甲醇定容到刻度，即得對(duì)照品溶液，濃度為20.475μg/mL。按上述色譜條件，分別精密吸取沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液1μL、2μL、5μL、10μL及對(duì)照品溶液母液（204.75μg/mL）2μL、5μL、10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定其峰面積。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)（y），對(duì)照品的進(jìn)樣量（ng）為橫坐標(biāo)（x），進(jìn)行回歸分析，得回歸方程：沒(méi)食子酸 y＝2929.9x-14896，r＝0.9999。結(jié)果表明沒(méi)食子酸在20.475～2047.5ng范圍線性關(guān)系良好。

2.4 重現(xiàn)性試驗(yàn)

精密稱取同一批紫地寧血散（批號(hào)：J00004）樣品約1.5g，共6份，按“2.2”項(xiàng)下的制備方法制備供試品溶液并測(cè)定，6份樣品沒(méi)食子酸含量平均值為0.692mg/g（RSD=0.9% n=6）。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

圖1 HPLC色譜圖（依次為對(duì)照品、樣品、陰性）

表1 沒(méi)食子酸回收率試驗(yàn)結(jié)果

取同一供試品溶液（批號(hào)：J00004），分別于0、2、4、8、12、 24、48h依法測(cè)定樣品，結(jié)果沒(méi)食子酸含量的RSD為1.0%，表明供試品溶液在48h以內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的紫地寧血散(批號(hào)：J00004，平均含量為0.692mg/g)樣品0.75g，共6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入已知濃度的沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液(21.035μg/g)25mL，按“2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備供試液，依上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表1，平均回收率為100.5%，RSD為0.4%（n=6）。結(jié)果說(shuō)明本方法準(zhǔn)確度好。

2.7 三批樣品測(cè)定結(jié)果

按照“2.2”項(xiàng)下的制備方法制備供試品溶液，分別吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討 論

3.1 本研究結(jié)果顯示，該法具有較好的線性關(guān)系、重復(fù)性與回收率，操作方便、迅速，結(jié)果準(zhǔn)確。說(shuō)明反相高效液相色譜法測(cè)定紫地寧血散中沒(méi)食子酸含量的可行性良好。

3.2 曾分別采用熱回流和超聲浴處理法和加酸水解法進(jìn)行比較，結(jié)果顯示：超聲浴提取方法與其他提取方法并無(wú)顯著性差異，從操作簡(jiǎn)便性考慮，選擇超聲浴提取方法。

3.3 曾對(duì)提取溶劑進(jìn)行考察，取同一批號(hào)的紫地寧血散（批號(hào)：J00004）約1.5g，分別用甲醇、80%甲醇、50%甲醇、30%甲醇和水作為提取溶劑，制成供試品溶液，分別測(cè)定沒(méi)食子酸的含量。結(jié)果表明80%與50%甲醇作為提取溶劑所得結(jié)果最高，考慮到80%甲醇所得供試品溶液雜質(zhì)較少，選擇80%甲醇作為提取溶劑。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).《中國(guó)藥典》2005年版一部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:214-215.

[2] 史偉國(guó),王麗敏,劉翠娟,等.地榆不同部位沒(méi)食子酸的含量測(cè)定[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2011,34(1):14-15.

Determination of Gallic Acid in Zidiningxuesan

LIN Ying-yi, ZHANG Xue
(Guangzhou Wanglaoji Pharmaceutical Company Limited, Guangzhou 510450, China)

Objective To establish an HPLC method for the determination of gallic acid in Zidiningxuesan. Methods A Diamond diamonsil C18column was used, with the mobile phase of a mixture of acetonitrile and 0.1% solution of phosphoric acid containing 0.1% triethylamine (1∶99). The flow rate was 1.0mL/min and the detective wavelength was 265nm. The column oven was 30℃. Results The standard curves were linear from 20.475 to 2047.5ng for gallic acid. The average recoveries was100.5%, RSD of the analysis method was 0.4% (n=6). Conclusion This method was simple, accurate and reliable for quality control of Zidiningxuesan.

Zidiningxuesan; Gallic acid; HPLC

R917

B

1671-8194（2013）23-0048-02