陳錫琨

（廣西南寧食品藥品檢驗所，廣西 南寧 530001）

HPLC-ELSD法測定玉屏風膠囊中黃芪甲苷的含量

陳錫琨

（廣西南寧食品藥品檢驗所，廣西 南寧 530001）

目的 建立高效液相-蒸發(fā)光散射檢測法（HPCL-ELSD）測定玉屏風膠囊中黃芪甲苷含量的方法。方法 色譜柱為phenomenex Genini (5μm，4.6×250mm，C18)；流動相為乙腈-水（75∶25）；流速為1.0mL/min，柱溫：30℃。蒸發(fā)光散射（ELSD）檢測條件：漂移管溫度為70℃，霧化管溫度為40℃。結(jié)果 黃芪甲苷在0.3038～1.519μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.9997，平均加樣回收率為98.36%，RSD為0.58%（n=6）。結(jié)論 本法簡便快捷，具有良好的精密性和穩(wěn)定性，測定結(jié)果可靠，可用于本產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

玉屏風膠囊；高效液相-蒸發(fā)光散射檢測法（HPCL-ELSD）；黃芪甲苷；含量測定

玉屏風膠囊是國家藥品標準[1]，標準編號：WS3-033(Z-033)-2003(Z)。玉屏風膠囊由黃芪、防風、白術(shù)（炒）組成，具有益氣，固表，止汗等功效，常用于表虛不固，自汗惡風，面色蒼白或體虛易感風邪等疾病。本方中的黃芪是補氣虛的主藥，而黃芪甲苷是黃芪的活性成分。該標準含量測定項目制訂時采用的是薄層掃描法，該方法對黃芪甲苷的含量控制存在諸多不確定因素，還沒有真正達到對該品種質(zhì)量的最佳可控性。筆者參考文獻[2-5]，采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法(HPLC-ELSD)對玉屏風膠囊中黃芪甲苷的含量進行測定。，結(jié)果證明該法簡便易行，重復性好，專屬性強，可用于玉屏風膠囊產(chǎn)品質(zhì)量的控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-2010AHT高效液相色譜儀(日本島津公司)；Model400型蒸發(fā)光散射檢測器(美國Sofia公司)；WML色譜工作站（威馬龍色譜科技公司），GCK3308型全自動空氣源（北京中惠普分析技術(shù)研究所）；YB-Z型真空恒溫減壓干燥箱（天津藥典標準儀器廠）；KQ-300型超聲清洗器（功率300W 55Hz）（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

黃芪甲苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供批號：0781-200511，供含量測定用)；玉屏風膠囊（生產(chǎn)廠家：江蘇吉貝爾藥業(yè)有限公司，批號：120315、120501、120506）；水為純凈水；乙腈為色譜純；其余試劑均為分析純。

圖1 色譜圖（A：對照品；B：供試品；C：陰性樣品）

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n=6）

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備

精密稱取黃芪甲苷對照品（室溫減壓干燥12h以上）0．01519g，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2mL置10mL量瓶中稀釋至刻度即得。

2.1.2 樣品的制備

取裝量差異項下的內(nèi)容物，混勻，取約0.5g，精密稱定，置250mL錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，搖勻，超聲提取30min，取出放冷至室溫，用甲醇補足重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液25mL，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘渣加水20mL溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇萃取3次，每次25mL；合并正丁醇萃取液，用氨試液洗2次，每次25mL，棄去氨水層，將正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。

表2 黃芪甲苷含量結(jié)果（mg/粒）

2.1.3 陰性樣品溶液制備

取按處方比例制備缺黃芪藥材的陰性樣品，同2.2法制成陰性樣品溶液。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

色譜柱：phenomenex Genini (5μm，4.6×250mm，C18)；流動相：乙腈-水（75∶25）；流速：1.0mL/min，柱溫：30℃。蒸發(fā)光散射（ELSD）檢測條件：漂移管溫度：70℃，霧化管溫度：40℃。分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20μL，注入高效液相色譜儀，在上述色譜條件下，供試品中黃芪甲苷與其他成份色譜峰能完全分離，對測定無干擾（圖1）。

2.3 線性關(guān)系考察

精密吸取對照品溶液5，10，15，20，25μL按上述色譜條件分別注入液相色譜儀，以黃芪甲苷對照品進樣量的自然對數(shù)值為橫坐標（x），以黃芪甲苷對照品峰面積的自然對數(shù)值為縱坐標（y），線性回歸得回歸方程，y=1.57458x×105+4.92807×105 r=0.9997，結(jié)果表明黃芪甲苷進樣量在0.3038～1.519μg范圍內(nèi)，進樣量的對數(shù)值與峰面積的對數(shù)值線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗

取2.1制備的溶液分別精密吸取10μL和20μL按2.3色譜條件分別重復進樣5次，RSD為0.87%。

2.5 穩(wěn)定性試驗

取同一份供試品溶液分別于0、2、6、12、18、24h按2.3色譜條件進樣測定，結(jié)果RSD為0.63%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重現(xiàn)性試驗

取同一批號玉屏風膠囊樣品按2.2方法制備5份供試液，依法測定含量，RSD為0.78%。

2.7 加樣回收率試驗

取已知含量的樣品（批號120506）各0.5g，精密稱定，共6份，分別精密加入黃芪甲苷對照品溶液1mL（0.3038mg），按2.2項下方法制備回收溶液，再按2.3色譜條件進行測定，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.8 樣品含量測定

按2.2項下的配制方法分別吸取對照品溶液10μL、20μL及供試品溶液20μL根據(jù)2.3項下的色譜條件對5個批號的玉屏風膠囊進行測定，按外標兩點對數(shù)法進行計算含量。結(jié)果見表2。

3 討 論

3.1 本實驗曾采用水浴加熱回流30min、60min、超聲處理30min和60min四種方法對玉屏風膠囊進行提取分析比較，結(jié)果顯示，加熱回流30min，測定結(jié)果偏低，說明時間過短影響測定成分提?。黄渌N提取方法所得的結(jié)果非常接近，（RSD=0.2%以下）。因超聲處理30min，時間短，方法簡單而選擇之。

3.2 蒸發(fā)光散射（ELSD）檢測器對無紫外吸收或紫外未端吸收物質(zhì)具有較高的檢測靈敏度，且穩(wěn)定性和重現(xiàn)性較好，解決了紫外檢測器對于黃芪甲苷末端吸收靈敏度低，其他雜質(zhì)干攏大的問題。本實驗根據(jù)蒸發(fā)光散射（ELSD）檢測器的儀器參數(shù)條件要求和通過多次實驗條件數(shù)據(jù)的選擇，采用蒸發(fā)光散射（ELSD）檢測器漂移管溫度在70℃，霧化管溫度在40℃能得到較好的色譜圖形并且基線平穩(wěn)；精密度和重復性較好?？捎糜谟衿溜L膠囊產(chǎn)品質(zhì)量的控制。

[1] 國家藥品標準(新藥轉(zhuǎn)正中藥標準)第43冊[S].2010年版.北京:國家藥典委員會,2010:75.

[2] 董紅紅,張麗增,郭小青,等.HPLC-蒸發(fā)光散射檢測法測定貞芪扶正顆粒中黃芪甲苷的含量[J].中國藥房,2008,19(6):444-446.

[3] 楊曉騰,李井濤,郭美玲.HPLC-ELSD法測定止痛化癥膠囊中黃芪甲苷含量[J].中國藥事,2012,26(7):751-752.

[4] 池志珍,黃巧文,鄭芳,等.HPLC-ELSD法測定芪仁通絡(luò)膠囊中黃芪甲苷含量[J].海峽藥學,2010,22(9):41-42.

[5] 朱克旭,李永宏,劉冰冰.HPLC-ELSD法測定芪心合劑中黃芪甲苷含量[J].安微醫(yī)藥,2011,15(11):1364-1365.

Determination of Astragloside the Content in Jade Screen Capsules by HPLC ELSD

CHEN Xi-kun
(Nanning Institute for Food and Drug Control, Nanning 530001, China)

Objective To establish high performance liquid - evaporative light-scattering method (HPCL-ELSD) astragalus armour glycosides content in the jade screen capsule。Methods Chromatographic column for phenomenex Genini (5μm, 4.6×250mm, C18); mobile phase of acetonitrile-water(75∶25); flow velocity is 1.0mL/min; column temperature is 30℃. Evaporative light scattering detection (ELSD) conditions: drift tube temperature is 70℃, spray tube temperature of 40℃. Result Astragalus armour glycosides in the 0.3038 g to 0.3038 g scope had good linear relationship r=0.9997, average sample recovery rate was 98.36%, RSD was 0.58%(n=6). Conclusion This law is simple and quick, with good precision and stability, and the determination results and reliable, and can be used for quality control of this product.

Jade screen capsule; High performance liquid-evaporative light-scattering method (HPCL-ELSD); Astragaloside; Assaying

R282.710.3

B

1671-8194（2013）23-0008-02