李 瓊 周 洪 肖時超

（重慶市渝北區(qū)人民醫(yī)院檢驗科，重慶 401120）

兩種常規(guī)人工顛倒混勻全血質(zhì)控品方法探討

李 瓊 周 洪 肖時超

（重慶市渝北區(qū)人民醫(yī)院檢驗科，重慶 401120）

目的 探討兩種常規(guī)人工顛倒混勻全血質(zhì)控品方法的優(yōu)異。方法 用兩種常規(guī)顛倒混勻法對兩個批號（一個正常值質(zhì)控品與一個異常值質(zhì)控品）于2～8℃保存的抗凝全血質(zhì)控品在三臺全血細胞分析器上每天測一次，連續(xù)測定30d，如某1d，某一臺有異常值（即±3S或±3S以外的值）經(jīng)處理后重測，計算兩種常規(guī)顛倒混勻法批間變異系數(shù)（CV%，n=30）。結(jié)果 改良顛倒混勻法CV%值小于普通顛倒混勻法CV%值，其中血小板的變化較明顯，白細胞次之。結(jié)論 改良顛倒混勻法測質(zhì)控品優(yōu)于普通顛倒混勻法，此改良法值得臨床上推廣使用。

全血質(zhì)控品；顛倒混勻

血常規(guī)分析是臨床三大常規(guī)項目（血常規(guī)、尿常規(guī)和大便常規(guī)）分析之一，它對發(fā)現(xiàn)許多全身性疾病的早期跡象，診斷是否貧血及貧血種類，是否有血液系統(tǒng)疾病，反應骨髓的造血功能及療效觀察等有重要意義。因此找一種操作簡便、經(jīng)濟、保質(zhì)保量的方法進行血液分析質(zhì)控很重要。

全血質(zhì)控品影響因素多，實驗室的環(huán)境，儀器的性能，質(zhì)控品本身的質(zhì)量，質(zhì)控品開瓶后存放的時間，不同的混勻方法，同一方法不同的操作人等都是影響因素。

該文全血質(zhì)控品測定前是常規(guī)顛倒混勻法，一種混勻方法（這里命名為普通顛倒混勻法）是從2～8℃冰箱中取出含質(zhì)控品的試管隨意放置15～30min至室溫，帶蓋顛倒混勻至底部、管壁無沉淀物和氣泡附著，然后旋出蓋帽測定質(zhì)控品。測完后蓋上蓋帽直立放在2-8℃冰箱中。另一種混勻方法（這里命名為改良混勻法），首次測質(zhì)控品，從冰箱中取出一支含質(zhì)控品的試管置室溫（15～30℃）直立放置15～30min復溫至室溫，將含質(zhì)控品的試管置于兩掌心來回搓動8～10次，旋出蓋帽，與空氣交流2min，然后用一次性干凈塑料薄膜封閉試管口，顛倒混勻5～8次，至無沉淀物與氣泡附著在試管底、試管壁，然后測定質(zhì)控品，測完后蓋好蓋帽直立放在2～8℃冰箱中，整個過程要求含質(zhì)控品的試管直立放置。再次測同一支試管質(zhì)控品，冰箱中取出質(zhì)控品室溫（15～30℃）直立放置15～30min復溫至室溫，然后用一次性干凈塑料薄膜封閉管口，顛倒混勻5～8次，至無沉淀物附著在管底、管壁，然后測定質(zhì)控品，測完后直立放在2～8℃冰箱中，以此類推，新開質(zhì)控品同首次操作，再次測同一支質(zhì)控品同再次。兩種方法測定結(jié)果報告如下。

表1 031302U質(zhì)控品的兩種混勻方法的變異系數(shù)及差值

表2 031302Y的兩種混勻方法的變異系數(shù)及差值

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

Sysmex K4500血球儀，Medonic-sp血球儀，Sysmex xt-2000i血球儀。兩個批號的邁克質(zhì)控品，批號：031302U（正常值）、031302Y（異常值）。

1.2 兩種混勻方法下主要參數(shù)測定

紅細胞（RBC）（×1012/L），白細胞（WBC）（×109/L），血小板（PLT）（×109/L），血紅蛋白（HGB）（g/L）。

1.3 方法

用兩種常規(guī)顛倒混勻法對兩個批號于2～8℃保存的抗凝全血質(zhì)控品分別在三臺血球分析儀上每天測一次，連續(xù)測定30d，剔除異常值（即±3S或±3S以外的值）求得2種常規(guī)顛倒混勻法批間變異系數(shù)（CV%，n=30）。

2 結(jié) 果

2.1 在測定過程中有異常值（即±3S或±3S以外的值），說明某臺儀器或試劑有問題（Medonic-sp出現(xiàn)一次，經(jīng)檢查，溶血劑質(zhì)量問題，從新?lián)Q一桶同一批號的溶血劑，再測質(zhì)控品），舍去異常值，經(jīng)過處理后再做質(zhì)控品，測得值在±3S內(nèi)方用。

2.2 連續(xù)測定30d，剔除異常值（即±3S或±3S以外的值）求得兩種常規(guī)顛倒混勻法批間變異系數(shù)（CV%，n=30）及差值（d=普通方法CV%值-改良方法CV%）。見表1、表2。

3 討 論

全血分析是臨床三大常規(guī)項目（血常規(guī)、尿常規(guī)和大便常規(guī)）分析之一，對多種疾病的診斷和療效觀察均有很大的價值，如紅細胞與血紅白升高可診斷脫水性血液濃縮、繼發(fā)性紅細胞生成素增多性疾病（嚴重心、肺疾病、異常血紅蛋白病、某些腫瘤或腎臟疾病等）、原發(fā)性骨髓增生疾病等，降低可診斷造血物質(zhì)缺乏性貧血、骨髓造血功能障礙性貧血、感染及炎癥性貧血等；白細胞升高與降低可診斷反應性炎癥、異常增生性白血病的輔助診斷等；血小板升高與降低可診斷炎癥性升高、血小板增多癥、血小板減少癥。因此每天做好質(zhì)控，保證環(huán)境穩(wěn)定、儀器良好運行、試劑質(zhì)量好，使檢測結(jié)果準確性、重復性好，滿足臨床需要，不給醫(yī)師診斷帶來麻煩。因此找一種經(jīng)濟、簡便保質(zhì)保量的方法很重要。

常規(guī)顛倒混勻法具有操作簡便、不需特殊檢驗設備、操作時間短、混勻充分，由于是人工顛倒混勻，不同的操作人員用力程度和方式都有很大的差別，操作的手法不穩(wěn)定等，導致結(jié)果重復性較差，這是方法學本身的缺陷，但為了克服方法的缺陷，對此法操作進行了改良，表1、表2兩個批號結(jié)果顯示了改良顛倒混勻法批間差異均比普通顛倒混勻法小，血小板的變化比較明顯，白細胞次之。三臺儀器中Medonic-sp 和Sysmex K 4500變化比較明顯， Sysmex xt-2000i x次之。但兩種常規(guī)顛倒混勻法變異都小于衛(wèi)生部規(guī)定[1]（CLIA’88規(guī)定：RBC6%、WBC15%、PLT25%、HB7%）的總變異。

普通顛倒混勻法變異大，其原因是，普通顛倒混勻法是帶試管蓋顛倒混勻，血液殘留物附著在試管蓋內(nèi)壁與試管口上，形成凝塊，當再次用同一支質(zhì)控品做質(zhì)控測定時，凝塊就混在血液中，影響最后計數(shù)結(jié)果。另一個原因是：Medonic-sp和Sysmex K4500這兩臺三分群全血細胞分析儀檢測原理是電阻抗法，利用血細胞通過微孔時瞬間的電阻變化產(chǎn)生脈沖電流而計數(shù)，不同類型但體積相同的細胞產(chǎn)生的脈沖幅度相同，而分析儀計數(shù)時只識別顆粒產(chǎn)生脈沖幅度大小和相同幅度脈沖多少，而不能識別顆粒的性質(zhì)。故僅靠體積不能完全區(qū)分。當其體積超過該儀器設定的閾值，就會造成誤判。這就影響了白細胞、紅細胞、血紅蛋白、尤其是血小板的計數(shù)。而Sysmexxt-2000i這臺五分類血球分析儀檢測原理是鞘流電阻法、半導體激光器的流式細胞技術(shù)和核酸染色技術(shù)聯(lián)合檢測法，彌補了電阻抗法原理這一缺陷。鞘流電阻法，血液標本被前鞘液包繞，通過小孔時阻止異常脈沖產(chǎn)生，提供波形良好的細胞信號，而三分類中電阻抗法，只管脈沖大小與多少。半導體激光器的流式細胞技術(shù)，前向散射光反應細胞體積的大小，側(cè)向熒光反應RNA/DNA含量，側(cè)向散射光反應細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，從而使細胞計數(shù)的準確性與重復性提高，核酸染色技術(shù)，不僅得到白細胞五分類結(jié)果，而且根據(jù)核酸的含量得到未成熟細胞的定量參數(shù)（IG#、IG%）及細胞異常報警信息，使結(jié)果更可靠，復檢率更低。

改良顛倒混勻法變異小，原因是，改良法是去試管蓋，用一次性干凈薄膜封閉試管口顛倒混勻，測定后直立放在冰箱中，因此沒有血液殘留物附在試管蓋內(nèi)壁與試管口上。避免了血凝塊對質(zhì)控物測定的影響，此改良法值得臨床上推廣使用。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].3版.南京:東南大學出版社,2006.

R446.1

B

1671-8194（2013）31-0174-02