徐嬌霞 向 波 向 輝 熊 文 彭林林 張建文 王冬麗

（吉首大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 吉首 416000）

SCNN1A基因多態(tài)性與氫氯噻嗪降壓療效的相關(guān)性

徐嬌霞 向 波 向 輝 熊 文 彭林林 張建文 王冬麗

（吉首大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 吉首 416000）

目的 探討上皮細(xì)胞鈉通道α亞基（SCNN1A）基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs2228576與氫氯噻嗪降壓療效的相關(guān)性。方法 選取新發(fā)的輕中度原發(fā)性高血壓患者110例，均來自吉首市的常住苗族人群。予以氫氯噻嗪口服治療8周，對(duì)降壓療效進(jìn)行評(píng)定。用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術(shù)分析患者SCNN1A基因rs2228576多態(tài)性的分布頻率。結(jié)果 EH患者存在三個(gè)基因型（AA、AG及GG），頻率分別為（0.127，0.509，0.364）。rs2228576位點(diǎn)不同基因型與經(jīng)DHCT治療后DBP的降低幅度有關(guān)，降壓療效間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=11.522，P＜0.05），收縮壓降低幅度間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.841，P＞0.05）。結(jié)論 SCNN1A基因rs3828942多態(tài)性可能與DHCT的降壓療效有關(guān)。

上皮細(xì)胞鈉通道α亞基；基因多態(tài)性；原發(fā)性高血壓；氫氯噻嗪

原發(fā)性高血壓（essential hypertension，EH）是由遺傳與環(huán)境多因素相互作用所致的疾病，成人發(fā)病率超過20%[1]。采取正確有效的降壓治療方案，能大大降低腦血管意外事件和急性心梗等心血管疾病發(fā)生率。氫氯噻嗪（DHCT）通過抑制腎臟的遠(yuǎn)曲小管鈉離子重吸收，增加水分排出而降低血壓。DHCT是一線利尿降壓藥物，適用于輕中度EH患者。DHCT具明顯個(gè)體差異，其作用靶點(diǎn)的基因多態(tài)性與降壓療效及不良反應(yīng)密切相關(guān)，體現(xiàn)出明顯遺傳易感性。分布于腎臟集合管和遠(yuǎn)曲小管的上皮細(xì)胞鈉通道α亞基（epithelial sodium channel，ENaC）是控制鈉排除的重要細(xì)胞器。目前有報(bào)道[1-2]，SCNN1A基因單核苷酸多態(tài)性與EH發(fā)病相關(guān)，但未見有關(guān)SCNN1A基因多態(tài)性與DHCT降壓敏感性的相關(guān)報(bào)道。本研究旨在探討在吉首地區(qū)苗族EH患者中，SCNN1A基因多態(tài)性位點(diǎn)rs2228576與DHCT降壓療效的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

隨機(jī)選擇2012年1～12月來湘西州人民醫(yī)院首次確診的苗族EH患者。所選病例均符合《1999年WHO/ISH高血壓治療指南》分類標(biāo)準(zhǔn)：收縮壓（systolic blood pressure，SBP）≥140mmHg和（或）舒張壓（diastolic blood pressure，DBP）≥90mmHg，且排除繼發(fā)性高血壓。病例排除標(biāo)準(zhǔn)：SBP≥180mmHg和（或）DBP≥110mmHg，及需聯(lián)合用藥的復(fù)雜病例；單純收縮期高血壓、腎動(dòng)脈狹窄者；合并糖尿病，近1年內(nèi)有心肌梗死、充血性心力衰竭、腦卒中或部位定性心絞痛史者；肝腎功能不全者。經(jīng)過篩查共入選140例EH患者，其中30例患者因?yàn)椴荒苣褪芩幬锔弊饔玫仍蛭赐瓿呻S訪，所有受試者均簽署了知情同意書。完成數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)的患者共110例，其中男54例，女56例，年齡范圍35～68歲，平均年齡（50.0±9.2）歲。

1.2 方法

1.2.1 DHCT治療方案及隨訪：所有EH病例均予以DHCT（常州制藥廠有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：H32021683）進(jìn)行降壓治療。每日劑量：50mg/1-2次，隨訪頻率：2周/次。若第4周末，血壓≥140/90mmHg，加倍劑量。第8周后，按照衛(wèi)生部制定的心血管藥物臨床研究指導(dǎo)原則進(jìn)行降壓療效評(píng)定，DBP下降≥10mmHg并降至正常，或下降≥20mmHg者為顯效；DBP下降＜10 mmHg并降至正常，或下降10～19mmHg，或下降≥30mmHg為有效；未達(dá)到上述標(biāo)準(zhǔn)判為無效。

1.2.2 基因提取與擴(kuò)增：取100微升EDTA抗凝全血，采用北京厚生博泰試劑盒提取DNA，-20℃保存。運(yùn)用本課題組前期設(shè)計(jì)的擴(kuò)增方案[3]，引物序列為：1：5'-TCGGCTCCTCGGTGTTGT-3'，2：5'-GCCCTT ACCCATCTTGCTT-3'。引物由上海生工公司合成。PCR擴(kuò)增體系：5μL 10×PCRbuffer，5μL 2mM dNTP，3μL 25mM MgCl2，引物各1μL，0.2μL 5U/μL Taq酶，2μLDNA，加水至50μL。擴(kuò)增條件：94℃預(yù)變性4min；然后94℃變性30sec，58℃ 40sec，72℃ 50sec，30個(gè)循環(huán)。

1.2.3 基因型鑒定：運(yùn)用本課題組前期設(shè)計(jì)的方案[3]，取10μL 產(chǎn)物，加5U ×cmI內(nèi)切酶（NEB公司），2μL 10×buffer，37℃酶解3h，用2.0%瓊脂糖凝膠電泳，在凝膠成像系統(tǒng)中分析酶切產(chǎn)物基因型。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用單因素方差分析Hardy-Weinberg平衡及各種計(jì)量資料，用χ2檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)資料，用多元逐步回歸分析基因型與降壓幅度的相關(guān)，用Ridit分析等級(jí)資料。采用SPSS15.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 SCNN1A基因不同基因型一般數(shù)據(jù)比較

見表1。

表1 不同基因型患者的一般資料比較

2.2 SCNN1A基因多態(tài)性與DHCT降壓療效的相關(guān)性

吉首苗族不同基因型間DBP降低幅度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同基因型間SBP降低幅度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同基因型患者的降壓療效比較

2.3 多元逐步回歸分析

對(duì)可能影響DHCT降壓的因素校正（年齡、性別、BMI、飲酒、吸煙、心率、藥物劑量和肝腎功能等）。結(jié)果顯示：治療后DBP的降低幅度與不同基因型與有關(guān)（R2=1.021，P＜0.05）；未發(fā)現(xiàn)SBP降低幅度與基因型存在相關(guān)性。見表1。

3 討 論

藥物治療是目前治療EH的主要方式，幾十年來，雙氫克尿噻（DHCT）一直是臨床一線的重要降壓藥物。盡管DHCT運(yùn)用廣泛，但是不同個(gè)體對(duì)其降壓療效有很大差異。雖然生活環(huán)境、年齡和性別等非遺傳因素都可以影響降壓效果，但近年國(guó)內(nèi)外的研究發(fā)現(xiàn)個(gè)體的基因變異與抗高血壓藥物的療效存在密切關(guān)系[4]。水鹽代謝調(diào)控通路上的基因變異可以解釋20-80%的利尿藥降壓反應(yīng)的個(gè)體差異。故有關(guān)高血壓相關(guān)基因多態(tài)性與降壓藥物療效的研究具有重要的意義，也是降壓藥領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。

SCNN1A基因位于12號(hào)染色體短臂13區(qū)，總共有27個(gè)外顯子及內(nèi)含子，囊括3萬余個(gè)堿基對(duì)。rs2228576是指14號(hào)外顯子的A可突變?yōu)镚，在蛋白質(zhì)翻譯過程中α亞基羧基末端發(fā)生丙氨酸取代蘇氨酸。有研究證實(shí)，上皮細(xì)胞鈉通道羧基末端特定序列（即突變所在位點(diǎn)的序列）與Nedd4-2結(jié)合以及通道的泛素化參與上皮細(xì)胞鈉通道降解[2]。Samaha等報(bào)道[5]，未發(fā)生突變的上皮鈉通道其電流量高于突變型，人類上皮細(xì)胞鈉通道的內(nèi)攝降解與活性可能與該多態(tài)性密切相關(guān)。本課題組前期研究未發(fā)現(xiàn)SCNN1A基因rs2228576多態(tài)性與EH密切相關(guān)[3]。但國(guó)內(nèi)外有研究發(fā)現(xiàn)該多態(tài)性與EH相關(guān)[6-8]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，吉首地區(qū)苗族SCNN1A基因AA/AG基因型的DBP降壓療效高于GG基因型（P＜0.05）。這與本課題組前期研究假設(shè)的相互印證，即這提示該多態(tài)性可能會(huì)影響通道的表達(dá)數(shù)目以及活性。

目前，有關(guān)rs2228576多態(tài)性與原發(fā)性高血壓患病率相關(guān)性，及其影響DHCT降壓敏感性的機(jī)制尚不明了，有待運(yùn)用表觀遺傳學(xué)等理論深度剖析上述問題。

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1671-8194（2013）31-0165-02