孟凡科

（山東省棗莊市立醫(yī)院輸血科，山東 棗莊 277101）

惡性血液病ABO抗原減少與ABO基因表達(dá)異常的相關(guān)性

孟凡科

（山東省棗莊市立醫(yī)院輸血科，山東 棗莊 277101）

目的 探討ABO基因異常表達(dá)與惡性血液疾病ABO抗原減少的相關(guān)性。方法 選取本院2011年5月至2013年5月收治的白血病患者28例為研究對(duì)象，并選取同期行身體檢查的健康體檢者30例為對(duì)照組，分別采用免疫組化法測(cè)定兩組患者ABO基因表達(dá)異常情況。結(jié)果 與正常體檢者相比，白血病患者ABO基因陽(yáng)性表達(dá)率顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。隨著白血病患者臨床分期的增加，患者與ABO基因異常表達(dá)率顯著增加。經(jīng)相關(guān)性分析可知，白血病患者ABO抗原減少與ABO基因異常表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論 ABO基因異常表達(dá)可能是引起白血病患者ABO抗原減少的重要因素，且隨著患者病情的增加，患者ABO基因異常表達(dá)率顯著上升。

ABO抗原；ABO基因表達(dá)；白血病

ABO血型系統(tǒng)在人類(lèi)最早發(fā)現(xiàn)的血型系統(tǒng)，近年隨著人員對(duì)ABO血型系統(tǒng)研究的深入，相關(guān)研究指出，核苷酸序列在A(yíng)BO血型系統(tǒng)中具有高度保守特點(diǎn)，基因核苷酸之間具有高度同源性[1]。但近年相關(guān)研究指出[2]，在惡性血液疾病中普遍存在紅細(xì)胞ABO抗原減少的情況，尤其是在骨髓性白血病患者中，發(fā)生ABO血型正反性定向不符合的情況也是非常普遍，但目前對(duì)于其發(fā)病機(jī)制還有深入研究。為此本文將對(duì)本院2011年5月至2013年5月收治的白血病患者ABO基因表達(dá)異常與惡性血液疾病ABO抗原減少的相關(guān)性進(jìn)行分析，旨在為同類(lèi)疾病治療提供指導(dǎo)依據(jù)，現(xiàn)對(duì)研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取本院2011年5月至2013年5月收治的白血病患者28例為研究對(duì)象，患者經(jīng)病理組織學(xué)及影像學(xué)診斷證實(shí)為白血病，所有患者均沒(méi)行手術(shù)治療且術(shù)前沒(méi)接受放化療。男性18例，女性10例，患者年齡為9～66歲，平均年齡為（39.6±3.8）歲，其中慢性期11例，加速期8例，急性變期9例。并選取同期行身體檢查的健康體檢者30例為對(duì)照組，男性17例，女性13例，年齡為8～62歲，平均年齡為（42.8±5.9）歲，兩組患者性別、年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

采用免疫熒光組化法檢測(cè)兩組ABO血液系統(tǒng)抗原及ABO基因表達(dá)情況。ABO抗原兔抗人多克隆體購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)公司，鼠抗人多克隆抗體購(gòu)于北京金橋生物技術(shù)公司。以1∶150的濃度將兔抗人多克隆體稀釋。ABO抗原采用EDTA熱修復(fù)處理20min，并采用檸檬酸緩沖液于高壓鍋中熱修復(fù)處理2min后采用冷水洗滌，并采用PBS緩沖液對(duì)樣品進(jìn)行沖洗，隨后依次在試樣板中加入一抗、二抗以及DAB進(jìn)行顯色反應(yīng)。經(jīng)蘇木精復(fù)染后采用乙醇對(duì)樣本脫水并制成中性樹(shù)膠封片，并與已知的陽(yáng)性切片進(jìn)行對(duì)比，陰性對(duì)照則采用PBS緩沖液替代一抗的樣本進(jìn)行參照。

1.3 免疫組化結(jié)果的判斷

①ABO基因表達(dá)為棕黃色顆粒見(jiàn)于細(xì)胞核內(nèi)。②在倍數(shù)為100的顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞著色情況，根據(jù)著色程度由輕至重可分別記為0、1、2、3。隨機(jī)選取5個(gè)視野點(diǎn)，采用倍數(shù)為400的顯微鏡分別對(duì)5個(gè)視野進(jìn)行觀(guān)察，每個(gè)視野進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，并計(jì)算細(xì)胞的陽(yáng)性百分比（以500個(gè)細(xì)胞作為一組計(jì)算單位），細(xì)胞陽(yáng)性百分率：1為小于10%，2為10%～50%，3為大于50%.積分計(jì)算：①與②計(jì)算所得的分值相乘。積分為0分：陰性“-”，1～3分：弱陽(yáng)性“+”，4～6分：中度陽(yáng)性“++”，7～9分：強(qiáng)陽(yáng)性“+++”。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，計(jì)數(shù)資料采用率表示；組間計(jì)量資料均值的比較采用成組設(shè)計(jì)t檢驗(yàn)，組間計(jì)數(shù)資料率的比較采用χ2檢驗(yàn)，進(jìn)一步的兩兩比較采用LSD-t法，相關(guān)性采用單因素分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 ABO的基因相對(duì)表達(dá)量分析

ABO血液系統(tǒng)基因相對(duì)表達(dá)量：對(duì)照組（0.07±0.04）、慢性期（1.14±0.21）、加速期（1.37±0.27）、急性變期（1.59±0.34），兩兩相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），具體結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 ABO的基因的陽(yáng)性表達(dá)率分析

表1 ABO的基因的相對(duì)表達(dá)量分析（）

表1 ABO的基因的相對(duì)表達(dá)量分析（）

注：①與對(duì)照組相比，P＜0.05；②與慢性期相比，P＜0.05；③與加速期相比，P＜0.05

組別例數(shù)STAT含量對(duì)照組300.07±0.04慢性期111.14±0.21①加速期81.37±0.27①②急性變期91.59±0.34①②③

表2 ABO的基因在白血病中的陽(yáng)性表達(dá)率分析[n（%）]

ABO的基因陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于對(duì)照組，且隨著白血病患者臨床分期的增加，患者與ABO基因異常表達(dá)率顯著增加。經(jīng)相關(guān)性分析可知，白血病患者ABO抗原減少與ABO基因異常表達(dá)呈正相關(guān)（r=3.986，P=0.000），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

3 討 論

在惡性血液疾病患者中ABO抗原丟失是較為普遍的現(xiàn)象，發(fā)生這一現(xiàn)象與腫瘤轉(zhuǎn)移潛能、腫瘤分級(jí)、預(yù)后不良有密切的關(guān)系。同時(shí)ABO抗原丟失的情況與疾病進(jìn)展呈一定的相關(guān)規(guī)定性，因此通過(guò)了解惡性血液疾病ABO抗原減少能有效了解惡性腫瘤進(jìn)展情況[3]。

近年相關(guān)研究指出[4]，血型基因?qū)ρ涂乖腔D(zhuǎn)移酶起到重要的作用，同時(shí)基因異常表達(dá)可導(dǎo)致轉(zhuǎn)移酶減少或活性下降，導(dǎo)致抗原轉(zhuǎn)變?yōu)锳抗原的過(guò)程被阻斷，并使得血型抗原減少。此外，當(dāng)H抗原表達(dá)能力減弱，可導(dǎo)致A抗原減少，使得編碼區(qū)中的H抗原基因出現(xiàn)丟失，從而導(dǎo)致其活性下降。通過(guò)免疫熒光組化法可以觀(guān)察到基因的表達(dá)主要集中在細(xì)胞核內(nèi)并呈棕黃色顆粒狀。本研究結(jié)果顯示，正常健康體檢者中血液系統(tǒng)中的ABO表達(dá)量為（0.07±0.04）顯著高于慢性期（1.14±0.21）、加速期（1.37±0.27）、急性變期（1.59± 0.34），兩兩相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，從而表明惡性血液疾病患者中均存在A(yíng)BO異常表達(dá)的情況。經(jīng)免疫組化法測(cè)定可知，ABO的基因陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于對(duì)照組，且隨著白血病患者臨床分期的增加，患者與ABO基因異常表達(dá)率顯著增加。經(jīng)相關(guān)性分析可知，白血病患者ABO抗原減少與ABO基因異常表達(dá)呈正相關(guān)（r=3.986，P=0.000），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），從而提示惡性血液疾病患者中ABO基因表達(dá)上調(diào)可能是引起ABO抗原減少的主要原因。

[1] 劉靜,李志強(qiáng).惡性血液病ABO抗原減少與ABO基因表達(dá)異常的相關(guān)性[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2011,(2):569-571.

[2] 劉靜,李志強(qiáng).部分惡性血液病患者紅細(xì)胞A、H抗原表達(dá)與基因啟動(dòng)子CpG島甲基化研究[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2011,3(5):169-172.

[3] 邵曉雁,歐陽(yáng)建,陳兵,等.ABO血型不合異基因造血干細(xì)胞移植治療惡性血液病[J].中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù),2008,12(3): 117-119.

[4] 吳敏華,陳活強(qiáng),蔡葵.惡性血液病引起ABO血型鑒定困難的探討[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2008,6(3):578-581.

The Abnormal Expression of ABO Gene Associated with Malignant Hematologic Diseases to Reduce the ABO Antigen

MENG Fan-ke
(Department of Blood Transfusion, Zaozhuang Municipal Hospital, Zaozhuang 277101, China)

Objective To investigate the correlation between reduced and malignant hematologic diseases ABO antigen abnormal expression of ABO gene. Methods In our hospital from 2011 May to 2013 May were 28 cases of leukemia patients as the research object, and select the same physical examination of 30 cases of healthy people as control group, respectively, were measured by immunohistochemistry in two patients with abnormal ABO gene expression. Results Compared with normal controls, significantly increased the rate of positive expression of ABO gene in leukemia patients, the difference was statistically significant (P＜0.05). With the clinical staging of patients with leukemia, abnormal expression of ABO gene was significantly higher in patients with. The results of correlation analysis, and the abnormal expression of ABO was positively related to decrease of ABO antigen in patients with leukemia. Conclusion The abnormal expression of ABO gene may be an important factors to cause reduced leukemia antigens in patients with ABO, and with the increase of the patients, the abnormal expression of ABO gene was significantly increased in patients with.

ABO antigen; ABO gene expression; Leukemia

R733.7

B

1671-8194（2013）31-0030-02