楊小艷 楊 勇 張 旭 鐘玉全

（內(nèi)江市第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科，四川 內(nèi)江 641000）

Smad7在胃癌組織中表達(dá)及其與幽門螺桿菌關(guān)系的臨床研究

楊小艷 楊 勇 張 旭 鐘玉全

（內(nèi)江市第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科，四川 內(nèi)江 641000）

目的 研究Smad7在胃癌組織中的表達(dá)及其與幽門螺桿菌的關(guān)系。方法 采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)30例胃癌、20例不典型增生、25例慢性胃炎和20例正常對(duì)照的胃黏膜組織中Smad7蛋白、TGF-β1的表達(dá)變化。結(jié)果 在胃癌和不典型增生組織中Smad7蛋白和TGF-β1表達(dá)均明顯高于慢性胃炎和正常胃黏膜組織，各組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01），幽門螺旋桿菌陽(yáng)性的患者中，Smad7的表達(dá)量顯著高于陰性者（P均＜0.05）。結(jié)論 Smad7蛋白和TGF-β1共同參與胃癌的形成，Smad7在幽門螺旋桿菌相關(guān)性胃病中發(fā)揮重要作用，Smad7高表達(dá)對(duì)于胃癌的發(fā)生發(fā)展也起著非常重要的促進(jìn)作用，抑制Smad7高表達(dá)有可能可以抑制腫瘤發(fā)展，可能成為防止腫瘤進(jìn)展的新策略。

胃癌；Smad7；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1；幽門螺桿菌

TGF-β/Smads信號(hào)通路在惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起著舉足輕重的作用，在胃癌組織中，TGF-βl及其受體的異常表達(dá)可能促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和演進(jìn)[1]，Smad7對(duì)TGF-β受體后信息調(diào)控表現(xiàn)為負(fù)性調(diào)節(jié)，其在器官纖維化方面研究比較多，而在胃黏膜各種病變組織中研究報(bào)道甚少。標(biāo)本中Smad7和TGF-βl蛋白表達(dá)，以期了解TGF-β/Smads信號(hào)傳導(dǎo)通路在胃癌發(fā)生中的作用，及Smad7在研究組織中的變化及其與幽門螺桿菌的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

30例胃癌組、20例不典型增生組、25例慢性胃炎組和20例正常胃黏膜組織（正常組）蠟塊標(biāo)本均取自內(nèi)江市第一人民醫(yī)院胃鏡室送檢至病理科的活體蠟塊。

1.2 方法

每個(gè)蠟塊連續(xù)切片6張，切片厚度3um，載玻片預(yù)先處理備用，采用SP法對(duì)二種指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，每種抗體均以已知陽(yáng)性片做陽(yáng)性對(duì)照。Smad7、TGF-βl蛋白陽(yáng)性染色表現(xiàn)為細(xì)胞漿內(nèi)均勻的棕黃色顆粒。采用雙盲法根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞百分比和陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度進(jìn)行打分，然后根據(jù)兩項(xiàng)打分之積判斷結(jié)果，≤3分為陰性，＞3分判定為免疫反應(yīng)陽(yáng)性，按每張切片的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比例及著色深淺計(jì)分，行半定量分析[2]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料用兩樣本t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 Smad7蛋白表達(dá)

Smad7蛋白表達(dá)在胃癌組及不典型增生組中的陽(yáng)性率高于慢性胃炎組及正常組，各組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別為χ2＝45.542，P＜0.01，χ2＝48.663，P＜0.01，χ2＝34.302，P＜0.01，χ2＝37.592，P＜0.01）各組中Smad7免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：胃癌組（30例）：陽(yáng)性26例，陰性4例，陽(yáng)性率86.7%；不典型增生組（20例）：陽(yáng)性17例，陰性3例，陽(yáng)性率85%；慢性胃炎組（25例）：陽(yáng)性7例，陰性18例，陽(yáng)性率28%；正常組（20例）：陽(yáng)性3例，陰性17例，陽(yáng)性率17.6%。

2.2 TGF-βl蛋白表達(dá)

TGF-βl蛋白表達(dá)在胃癌組及不典型增生組中的陽(yáng)性率高于慢性胃炎組及正常組，各組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別為，χ2＝19.985，P＜0.01，χ2＝23.325，P＜0.01，χ2＝17.369，P＜0.01，χ2＝19.583，P＜0.01），各組中TGF-βl免疫組化染色結(jié)果為：胃癌組（30例）：陽(yáng)性23例，陰性7例，陽(yáng)性率76.7%；不典型增生組（20例）：陽(yáng)性13例，陰性7例，陽(yáng)性率65%；慢性胃炎組（25例）：陽(yáng)性4例，陰性21例，陽(yáng)性率16%；正常組（20例）：陽(yáng)性3例，陰性17例，陽(yáng)性率15%。

2.3 Smad7在各組中的表達(dá)及其與幽門螺桿菌（HP）的關(guān)系

幽門螺旋桿菌陽(yáng)性的患者中，細(xì)胞漿中Smad7的表達(dá)量顯著高于陰性者（P＜0.05），且胃癌組患者中Smad7 的表達(dá)高于不典型增生組、慢性胃炎組與正常組，相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 Smad7在各組中的表達(dá)（）

表1 Smad7在各組中的表達(dá)（）

注：幽門螺旋桿菌陽(yáng)性的患者中，胃癌組及不典型增生組與其他組相比P均＜0.05

分組例數(shù)表達(dá)強(qiáng)度胃癌組HP(+) 183.78±1.62 HP(-) 123.12±0.85不典型增生組HP(+) 122.65±1.23 HP(-) 82.12±0.61慢性胃炎組HP(+) 141.81±0.53 HP(-) 111.60±0.19正常組HP(+) 60.69±0.84 HP(-) 140.55±0.47

3 討 論

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）哺乳動(dòng)物存在3種亞型（TGF-βl～3），在細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、遷移、凋亡等方面發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，其中含量最高具有生物活性的是TGF-βl，幾乎所有腫瘤細(xì)胞內(nèi)可檢測(cè)到TGF-βmRNA。

SMAD蛋白是唯一的TGF-β受體后信使分子，介導(dǎo)TGF-β信號(hào)從細(xì)胞膜傳入細(xì)胞核。TGF-β/Smads信號(hào)傳導(dǎo)是通過(guò)與受體依次結(jié)合、磷酸化實(shí)現(xiàn)的，激活特定靶基因，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和分化，若其中任何因子異常均可導(dǎo)致異常生物學(xué)效應(yīng)。Kim SH等[3]研究發(fā)現(xiàn)TGF-β和Myc基因的晚期階段呈正相關(guān)，Smad1/2/3、Smad4與早期的階段密切相關(guān)，表明TGF-β/Smads貫穿在胃腫瘤發(fā)生過(guò)程中。Lu B等[4]研究TGF-βRII，Smad4和Smad7表達(dá)與胃癌預(yù)后的臨床病理特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)TGF-β/Smads信號(hào)通路蛋白異常表達(dá)可導(dǎo)致胃癌的發(fā)生，胃癌細(xì)胞中存在著不同程度的TGF-βRII缺乏或突變，不能與TGF-β正常結(jié)合，最終引起負(fù)反饋調(diào)節(jié)，使TGF-βl表達(dá)過(guò)度，Smad7的表達(dá)與腫瘤分化程度相關(guān)，Smad4陽(yáng)性胃癌患者比陰性患者有較好的預(yù)后，Smad4的表達(dá)與患者的生存率相關(guān)。本研究表明，Smad7蛋白、TGF-βl表達(dá)在胃癌組及不典型增生組中的陽(yáng)性率高于慢性胃炎組及正常組，各組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

Smad7的高表達(dá)導(dǎo)致TGF-β信號(hào)通路發(fā)生紊亂，TGF-β對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖的抑制能力降低，從而促進(jìn)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。在胰腺癌中Smad7表達(dá)增高，并且轉(zhuǎn)染了Smad7基因的胰腺癌細(xì)胞惡性程度明顯增加[5]，其可抑制TGF-β信號(hào)通路，在反饋調(diào)控中起關(guān)鍵作用，提示Smad7表達(dá)的增高可促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。本研究結(jié)果顯示，Smad7蛋白在胃癌組織中表達(dá)顯著增高，說(shuō)明Smad7高表達(dá)對(duì)于胃癌的發(fā)生發(fā)展也起著非常重要的促進(jìn)作用。

幽門螺桿菌是胃癌的重要致病因素，Monteleone G[6]研究在HP感染患者的胃粘膜中的誘導(dǎo)和調(diào)控作用，研究表明Smad7可抑制在HP感染的活檢標(biāo)本，使有缺陷的TGF-βl，Smad3蛋白磷酸化，這與抑制性Smad7高表達(dá)有關(guān)，其可防止內(nèi)源性TGF-βl的下調(diào)。目前已知，IL1β啟動(dòng)子多態(tài)性與HP相關(guān)性胃十二指腸潰瘍相關(guān)，Datta De D 等[7]研究發(fā)現(xiàn)差分激活的Smad7的IL1B啟動(dòng)子表達(dá)下調(diào)，使Smad7的水平明顯降低。Smad7在幽門螺旋桿菌相關(guān)性胃炎中發(fā)揮重要作用，研究認(rèn)為幽門螺旋桿菌陽(yáng)性的患者中，細(xì)胞漿中Smad7的表達(dá)量顯著高于陰性者[8]。本研究結(jié)果與此項(xiàng)研究結(jié)果一致，在幽門螺旋桿菌感染的患者中，胃癌組患者中Smad7 的表達(dá)高于不典型增生組、慢性胃炎組與正常組，相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。

胃癌嚴(yán)重危害人民的身體健康，發(fā)病機(jī)制多種多樣，我們?cè)晒?gòu)建大鼠Smad7真核表達(dá)質(zhì)粒，研究外源Smad7可有效表達(dá)[9]，提示其可能參與TGF-β/Smads信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，我們將在以后作進(jìn)一步的研究。

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The Clinical Study on the Expression of Smad7 and Its Relationship with Helicobacter Pylori in Gastric Carcinoma

YANG Xiao-yan, YANG Yong, ZHANG Xu, ZHONG Yu-quan
(Department of Gastroenterology, First People's Hospital of Neijiang, Neijiang 641000, China)

Objective To study the expression of Smad7 in gastric carcinoma and the relationship with Helicobacter pylori.Methods Immunohistochemistry method was used to detect the changes of Smad7 and TGF- β1protein expression in 30 cases of gastric carcinoma, 20 cases of atypical hyperplasia, 25 cases of chronic gastritis and 20 cases of normal gastric mucosa tissues.Results Smad7 and TGF- β1protein expression in gastric cancer and atypical hyperplasia tissue were significantly higher than that in chronic gastritis and normal gastric mucosa tissues. the difference has statistical significance(P＜0.01). Expression of Smad7 cells was significantly higher in H. pylori positive patients than that of negative(P＜0.05).Conclusion The formation of Smad7 protein and TGF-β1in gastric carcinoma, Smad7 play an important role in Helicobacter pylori associated gastric disease, high expression of Smad7 in the occurrence and development of gastric carcinoma also plays an important role in promoting, inhibition of Smad7 expression may inhibit tumor development,may become the new strategies to prevent tumor progression.

Gastric carcinoma; Smad7; Transforming growth factorβ1; Helicobacter pylori

R735.2

B

1671-8194（2013）31-0053-02