徐妮為 丘繼哲 鄒 艷

（湖南中醫(yī)藥高等?？茖W校，湖南 株洲 412012）

核酸檢測在日本血吸蟲病診斷中的應(yīng)用價值分析

徐妮為 丘繼哲 鄒 艷

（湖南中醫(yī)藥高等?？茖W校，湖南 株洲 412012）

目的 對核酸檢測在日本血吸蟲病診斷中的應(yīng)用價值進行分析探討。方法 隨機抽取在 2009 年 1 月至 2012 年 4 月間我院收治的 23例經(jīng) ELISA 以及 IHA 檢測法均呈陽性日本血吸蟲患者病例，并抽取同期健康體檢者 20 例，對這兩組患者的血清采用 PCR 法和 LAMP 法對 DNA 進行檢測，并對檢測結(jié)果進行對比分析。結(jié)果 經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，兩種不同方法的檢測結(jié)果差異顯著，表現(xiàn)為 LAMP 法的陽性率高于PCR 法，且（P＜ 0.05）。結(jié)論 對日本血吸蟲患者展開核酸檢測，對于診斷而言具有重要意義，且不同的檢測方法其檢測的陽性率存在較大差異，值得臨床給予關(guān)注與重視。

核酸檢測；日本血吸蟲；診斷；臨床價值

目前在臨床上，血吸蟲病對世界上77個國家中將近2億～3億人的健康問題產(chǎn)生了嚴重的影響，經(jīng)相關(guān)流行病學研究結(jié)果顯示，在寄生蟲病流行領(lǐng)域當中，血吸蟲病發(fā)病率以及病死率一直居于首要位置?，F(xiàn)階段在我國的諸多縣市地區(qū)均存在日本血吸蟲病流行趨勢，嚴重威脅患者的生命安全以及生活健康。最近幾年以來，由于分子生物學技術(shù)得到了飛速的發(fā)展，從而為日本血吸蟲病的檢測提供了諸多較新手段，若是可以對宿主樣本中血吸蟲DNA片段進行直接檢測，理論而言宿主體內(nèi)存在有活的蟲體，具有同病原檢測等價的臨床價值[1]。本次研究中出于對核酸檢測在日本血吸蟲病診斷中的應(yīng)用價值進行分析探討的目的，對我院收治的血吸蟲患者血清分別采取不同方法進行DNA檢測，并對檢測結(jié)果進行了對比分析，現(xiàn)匯報結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究對象為我院收治的日本血吸蟲患者病例和同期健康體檢者，分別抽取23例和20例，在日本血吸蟲患者中有男12例，女11例，年齡25～74歲，平均（51.3±13.6）歲；健康組中有男12例，女8例，年齡23～75歲，平均（52.1±13.5）歲。研究對象性別、年齡差異不具有統(tǒng)計學意義（P＞0.05），存在可比性。

1.2 方法

1.2.1 研究方法

對所抽取的日本血吸蟲患者和健康體檢者分別采用PCR法和LAMP法對血清DNA進行檢測，并將兩種檢測方法的檢測結(jié)果以及疾病組和健康組的檢測結(jié)果進行對比分析。

1.2.2 檢測方法

血清DNA模板的制備：選取若干條日本血吸蟲成蟲，分別加入大批150μL的生理鹽水中，將其研磨后加入200μL的蟲體消化液，并在65℃條件下反應(yīng)1h，充分振蕩，而后采用400μL酚-氯仿-異戊醇（25∶24∶1）溶液進行抽提，采取轉(zhuǎn)速為12000r/min的離心機進行10min的離心操作，加入等體積的酚、氯仿（24∶1）溶液進行抽提，而后同樣轉(zhuǎn)速下離心10min，取上清液，而后加1/10體積濃度為2mol/L的乙酸鈉，將2.5倍體積的冷無水乙醇予以加入，在-20℃條件下保存2h，而后以上離心條件進行10min離心操作，將上清液丟掉，采用600μL濃度為70%冷乙醇對沉淀進行洗滌，以上離心條件下進行10min離心，在37℃的干燥箱中進行烘干，而后加入100μL的TE緩沖液對沉淀進行溶解[2]。

1.3 數(shù)據(jù)處理

研究中所得到的相關(guān)數(shù)據(jù)采用SPSS14.0統(tǒng)計學數(shù)據(jù)處理軟件進行處理分析，計數(shù)資料采用t檢驗，組間對比采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

經(jīng)統(tǒng)計得知，本組23例血吸蟲患者經(jīng)PCR法檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，陽性病例14例，陽性率為60.87%；LAMP法檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)陽性病例22例，陽性率為95.65%。由此可知，LAMP法的檢測陽性率高于PCR法，且兩組間差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。兩種方法對20例健康體檢者的血清DNA檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)全部呈現(xiàn)陰性，不存在明顯的假陽性病例。詳見表1。

3 討 論

現(xiàn)階段在臨床上血吸蟲病依舊為對人類健康造成嚴重危害的一種寄生蟲病，最近幾年以來由于化學藥物在疫區(qū)得到十分廣泛的應(yīng)用，血吸蟲病的低蟲荷感染致使常用的糞便涂片檢查法以及血清學診斷法陽性率逐漸降低，又由于氣候的變化以及人口流動增加等諸多因素的影響，造成血吸蟲病的發(fā)病率特別是輸入性血吸 蟲 病 的 發(fā) 生 率 正 在 呈 現(xiàn) 不 斷 上 升 的 趨 勢[3]。 然 而 現(xiàn) 階 段 經(jīng) 典 的糞檢法只能夠在血吸蟲成蟲產(chǎn)卵后的急性病變期才能夠得到準確的檢測，但是常規(guī)的免疫學檢測法諸如ELISA和COPT法的抗體陽性檢出時間相對較長，最早是在感染后4周，也就是說不管是糞檢法還是免疫學診斷方法都不能夠在血吸蟲感染的潛伏期展開準確的早期診斷，所以對于控制疾病的傳播而言新的血吸蟲病早期 快 速 診 斷 方 法 的 臨 床 意 義 十 分 顯 著[4]。 現(xiàn) 階 段 已 經(jīng) 有 相 關(guān) 的 國外文獻對采取用降落PCR技術(shù)可以在感染曼氏血吸蟲后2周的小鼠模型血清中對陽性結(jié)果予以檢測到進行了報道，另有學者則對采取PCR法自患者血清以及糞便中檢測出曼氏血吸蟲特異的DNA進行了報道了，同時指出PCR法的臨床診斷價值相當顯著，值得臨 床 給 予 關(guān) 注[5]。 本 次 研 究 中 以 動 物 模 型 實 驗 研 究 為 基 礎(chǔ) ， 進 一步應(yīng)采取PCR法和LAMP法核酸檢測法對23例日本血吸蟲患者的血清DNA進行了檢測，并對檢測結(jié)果展開了初步的評價分析，結(jié)果顯示，PCR法能夠檢測到陽性病例14例，陽性率為60.87%，然LAMP法則能夠檢測出陽性病例22例，陽性率為95.65%，這一結(jié)果顯示LAMP法的敏感性相對于PCR法具有較高的優(yōu)勢，更加重要的是LAMP法的諸多優(yōu)勢為PCR法所無法比擬的，譬如說LAMP法不需要進行長時間的溫度循環(huán)，所用的儀器相對較為簡單，操作較為簡便，且結(jié)果能夠用肉眼進行直接觀察，從而致使該方法有望成為對日本血吸蟲病進行早期快速診斷以及療效考核的一種新的有效方法，這對于及時確診，對傳染源進行阻斷，避免血吸蟲病發(fā)生快速傳播等均具有十分重要的臨床價值[6]。

表1 PCR法和LAMP法對日本血吸蟲患者和健康體檢者血清DNA檢測結(jié)果比較

綜上所述，采用核酸測定法對日本血吸蟲的診斷以及病情評估具有重要意義，且兩組不同檢測方法的檢測結(jié)果間存在十分明顯的差異，因此值得臨床對其給予高度重視。

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[2]鐘華,賴旭龍,魏榮平,等.一種從大熊貓糞便中提取DNA的改進方法[J].動物學報,2009,49(25):670-674.

[3]尹東,陳紅根,許雪萍,等.3種CAg檢測方法評價吡喹酮治療日本血吸蟲病療效的比較[J].中國臨床藥理學與治療學,2010,19 (22):177-179.

[4]孟瑋,吳忠道,余新炳,等.日本血吸蟲肺期童蟲收集方法的實驗研究[J].中國人獸共患病雜志,2009,21(12):173-175.

[5]洪佳冬,何藹,王軼,等.日本血吸蟲核酸在宿主體內(nèi)的代謝[J].中國人獸共患病雜志,2010,18(21):159-162.

[6]梁幼生,朱蔭昌,寧安,等.FA-ELISA檢測血吸蟲病人短程抗體試劑盒近期療效考核價值的研究[J].中國血吸蟲病防治雜志,2011, 13(22):269-271.

R383.2+4

：B

：1671-8194（2013）02-0063-02

湖南省教育廳科研課題（10C0268）資助