刁琳琳，王占聚，馮安華，劉永

(濰坊醫(yī)學(xué)院，山東 濰坊 261000)

細(xì)胞凋亡又稱細(xì)胞程序性死亡，對維持個體正常發(fā)育，保持機(jī)體組織器官中細(xì)胞數(shù)量穩(wěn)定和功能正常起著重要作用。細(xì)胞凋亡的異常將導(dǎo)致人體發(fā)生多種疾病，其中腫瘤的發(fā)生、浸潤和轉(zhuǎn)移與細(xì)胞凋亡失衡有著密切聯(lián)系?，F(xiàn)已證實白血病的發(fā)生和化療藥物導(dǎo)致的白血病細(xì)胞死亡都與細(xì)胞凋亡相關(guān)，化療藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡是白血病患者獲得緩解的主要方式［1］。目前有關(guān)白血病患者化療期間細(xì)胞凋亡率與患者預(yù)后關(guān)系的研究尚少。本文就AML 患者誘導(dǎo)緩解化療早期白血病細(xì)胞凋亡率與患者預(yù)后的關(guān)系作以探討。

1 材料與方法

1.1 材料 所有對象均來源于2011 年7 月至2012 年10 月在濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院血液科接受住院治療的初發(fā)AML 患者20 例(AML－M3 除外)，其中男11 例，女9 例，年齡從10～67 歲，中位年齡為44 歲，所有患者確診均行血常規(guī)、骨髓穿刺進(jìn)行形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等檢查，符合MICM 標(biāo)準(zhǔn)。全部確診患者在化療前均行血常規(guī)、血生化、血沉、凝血全套、乙肝五項、胸片、心電圖、腹部B 超(肝、膽、胰、脾、腎)檢查，白細(xì)胞＞100 ×109/L 的患者應(yīng)用羥基脲降至50 ×109/L以下再進(jìn)行化療，觀察其化療一療程的療效，診斷及療效判定參照文獻(xiàn)［2］。

1.2 方法 所有患者誘導(dǎo)緩解過程中采用DA 或IDA 或HA方案，具體為:(1)柔紅霉素(DNR 60 mg/ (m2·d)d1－3 靜脈滴注)或去甲氧柔紅霉素(IDA 10 mg/ (m2·d)d1－3 靜脈滴注)或高三尖杉酯堿(HHT 4 mg/ (m2·d)d1－3 靜脈滴注);(2)阿糖胞苷(Ara－c 150 mg/ (m2·d)d1－7 靜脈滴注)，所有患者于化療前1 d 及化療第2 d 各抽取外周靜脈血2 mL，肝素抗凝分離單個核細(xì)胞，PBS 液制成1 ×109/ L 單個懸浮細(xì)胞液。取試管兩支，做好標(biāo)記1(化療前1 d)和2 (化療第2 d)，在兩管中各加入10 μL PI 染液及100 μL 細(xì)胞懸液，再加入5 μLAnnexinV－FITC。輕輕混勻后室溫(20 ℃)避光處放置30 min 后，兩管中分別加入緩沖液400 μL，30 min 上流式細(xì)胞儀檢測凋亡細(xì)胞。第1 療程結(jié)束后第21 天抽取骨髓液檢查，計算第1 療程末骨髓白血病細(xì)胞減少指數(shù) (marrow blast decrease index，MBDI)，MBDI= (治療前骨髓白血病細(xì)胞數(shù)－第1 療程末骨髓白血病細(xì)胞數(shù))/治療前骨髓白血病細(xì)胞數(shù)×100%。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 兩組均數(shù)之間的比較采用t 檢驗，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 經(jīng)誘導(dǎo)治療7 d 后，完全緩解14 例，未緩解6 例。

2.2 化療第2 d 白血病細(xì)胞凋亡率與化療前1 d 細(xì)胞凋亡率的比較(見表1)。

2.3 CR 與NR 組細(xì)胞凋亡率的比較 20 例患者均隨訪至化療后第21 d，無1 例死亡，所有患者按張之南《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》評價化療療效，其中14 例(70%)達(dá)CR，6 例(30%)達(dá)NR?；熐癈R 組患后與NR 組患者白血病細(xì)胞凋亡率無明顯差異(P ＞0.05，t =0.3817)，化療后2 d CR 組細(xì)胞凋亡率明顯高于NR 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05，t=2.3138，見表1)。

表1 化療前后白血病細(xì)胞凋亡率的比較數(shù)據(jù)()%

3 討 論

誘導(dǎo)緩解治療是抗白血病第1 階段的主要方法，目的是使患者迅速獲得完全緩解(CR)，細(xì)胞凋亡是個復(fù)雜的過程，DNR、IDA、HHT、Ara－c 等大部分臨床化療藥物均能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)凋亡是化療藥物殺傷白血病細(xì)胞的重要機(jī)制，療效的關(guān)鍵是白血病細(xì)胞對化療藥物的敏感性。岑溪南等［3］對化療前、化療間、化療后的白血病患者外周血單個核細(xì)胞進(jìn)行了細(xì)胞凋亡的研究，結(jié)果表明獲得完全緩解和部分緩解的患者化療前、化療后白血病細(xì)胞均無明顯的細(xì)胞凋亡，化療前、化療期間(化療30～72 h)凋亡細(xì)胞明顯增高(11.4%～72.0%)。Annexin V 法檢測柔紅霉素及去甲氧柔紅霉素在體外誘導(dǎo)的白血病細(xì)胞凋亡時，3 h 即可檢測到凋亡細(xì)胞增加，24～48 h 凋亡細(xì)胞增加達(dá)最大值［4］。

本組資料選取誘導(dǎo)緩解化療第2 d 測白血病細(xì)胞凋亡率，在凋亡細(xì)胞明顯增高時間段內(nèi)，化療前1 d 和化療第2 d 白血病細(xì)胞凋亡率分別為(4.41 ±2.13)%和(9.31 ±2.42)%，化療期間第2 d 白血病細(xì)胞凋亡率明顯高于化療前(P ＜0.05，t=6.7973)與上述報道大體一致。CR 組與NR 組化療第2 天白血病細(xì)胞凋亡率為(10.12 ±2.23)%和(7.43 ±2.74)%。完全緩解組白血病細(xì)胞凋亡率明顯高于未緩解組，有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05，t =2.3138)，因此可以推測化療藥物在患者體內(nèi)誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡的情況與緩解有一定的相關(guān)性。隨著血液病學(xué)治療的快速發(fā)展，大劑量及多種類化療藥物的研究問世，當(dāng)今急性白血病的緩解率及預(yù)后有明顯提高，但患者能否長期生存及治愈仍是臨床治療中遇到的難點，患者的預(yù)后個體差異性較大，不僅與患者本身的基因有關(guān)，而且與患者的治療時機(jī)、病人對化療藥物的敏感性密切相關(guān)，因此臨床醫(yī)生注重早期、短時間內(nèi)使患者獲得完全緩解從而提高患者的生存及生活質(zhì)量，這就要求我們在臨床工作中有種快速、早期、簡便的方法預(yù)測化療方案的有效性以及時調(diào)整方案，提高患者的完全緩解率，避免不必要的多療程無效化療，給患者帶來生理、心理、經(jīng)濟(jì)上的傷害。曾有報道體外化療藥物誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡率與臨床化療療程結(jié)束后MBDI 之間相關(guān)，體外白血病細(xì)胞凋亡率高者，臨床CR 率亦越高［5－6］。本研究發(fā)現(xiàn)檢測白血病細(xì)胞凋亡率與MBDI 作用相似且呈正相關(guān)，同樣可以預(yù)測白血病患者預(yù)后情況?；煹? d 抽取外周血檢測白血病細(xì)胞凋亡率早期而簡便且特異性及敏感性都較高，MBDI 則需要在化療一個療程結(jié)束后抽取骨髓液才可檢測，因此本組實驗認(rèn)為通過檢測白血病細(xì)胞凋亡率結(jié)合形態(tài)學(xué)及臨床表現(xiàn)更能早期簡便可靠客觀的預(yù)測誘導(dǎo)化療療效從而及時調(diào)整化療方案。

4 結(jié) 論

AML 患者誘導(dǎo)緩解治療階段早期檢測白血病細(xì)胞凋亡率可以作為評估預(yù)后的一個早期指標(biāo)，幫助臨床醫(yī)師調(diào)整方案，提高完全緩解率及預(yù)后。

［1］Mori M，Hatake K，Tanaka M，et al.CAM－ cytarabine，aclarubicin plus macrophage colony－ stimulating factor in the treatment of acute myelogenous leukemia with trilineage dysplasia:usefulness of in vitro apoptosis in leukemic cells ［J］.Leuk Lymphoma，2001，42 (3):387－391.

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