陳 昕，趙 雷，楊亞麗

（1.暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬深圳人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣東 深圳518020；2.河南省人民醫(yī)院 麻醉科）

結(jié)核病是嚴(yán)重危害人類健康的全球性傳染性疾病之一，近年來(lái)全世界發(fā)病率明顯上升，每年有800萬(wàn)新發(fā)病例，另有300萬(wàn)人死于結(jié)核病。快速、可靠、特異性及敏感性高的檢測(cè)方法是早期診斷、合理化療、阻斷結(jié)核傳播的主要措施。本文通過(guò)全自動(dòng)微生物快速檢測(cè)系統(tǒng)（BacT／ALERT 3D）檢測(cè)并與傳統(tǒng)的結(jié)核診斷方法涂片法進(jìn)行比較，為結(jié)核的快速診斷提供新的檢測(cè)手段。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源于2010年1月至2010年5月本院收治的結(jié)核患者336例，留取各類標(biāo)本檢測(cè)。

1.2材料與儀器BacT／ALERT 3D 儀，MB／BacT培養(yǎng)瓶，含生長(zhǎng)因子的抗生素添加劑（MAS）生產(chǎn)商：歐嘉隆公司（Organon Teknika）公司。

1.3方法

1.3.1 標(biāo)本前處理 取5～10ml標(biāo)本于50ml離心管內(nèi)，加入新鮮配制的與標(biāo)本等量的N－乙酰L關(guān)胱氨酸（NALC）－NaOH溶液，振蕩混合直到標(biāo)本完全液化，室溫放置15min后加入磷酸鹽（PBS）緩沖液至50ml，3 000g離心15min，棄上清，加入1ml PBS緩沖液振蕩成懸浮液。

1.3.2 BacT／ALERT 3D儀檢測(cè) （1）在 MAS中加入10ml reconstituein flud溶解 MAS。（2）加0.5ml溶解的 MAS到 MB／BacT培養(yǎng)瓶中，再加入0.5ml處理后的懸浮液，經(jīng)對(duì)培養(yǎng)瓶條碼掃描后放入BacT／ALERT 3D儀內(nèi)自動(dòng)檢測(cè)。

1.3.3涂片鏡檢取處理后的標(biāo)本制成涂片，恒溫電熱板充分干燥，行萋尼氏染色，OLYMPUS生物顯微鏡檢測(cè)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 13.0軟件完成統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以s表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1檢測(cè)敏感度比較336例患者在住院期間均提供多種類型的標(biāo)本進(jìn)行結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢測(cè)。不同方法對(duì)不同標(biāo)本的檢測(cè)敏感度不同，BacT／ALERT 3D儀檢測(cè)的陽(yáng)性檢出率明顯高于涂片鏡檢法（P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），見(jiàn)表1。

表1 兩種方法對(duì)結(jié)核病人不同標(biāo)本的檢測(cè)敏感度

2.2不同標(biāo)本檢出率和檢測(cè)時(shí)間比較涂片鏡檢法在標(biāo)本接受當(dāng)天發(fā)布結(jié)果報(bào)告，BacT／ALERT 3D儀陽(yáng)性檢出時(shí)間平均為14.1天，見(jiàn)表2。

表2 BacT／ALERT 3D儀不同標(biāo)本的陽(yáng)性檢出率和檢測(cè)時(shí)間

3 討論

結(jié)核桿菌的快速、準(zhǔn)確診斷一直是結(jié)核病基礎(chǔ)應(yīng)用研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢測(cè)是發(fā)現(xiàn)傳染源的主要途徑和手段，是診斷結(jié)核病和確定化療方案的的重要依據(jù)。目前，結(jié)核病細(xì)菌學(xué)診斷主要是涂片和結(jié)核菌培養(yǎng)。結(jié)核分支桿菌抗酸染色涂片法是最廣泛使用的方法之一，該方法檢測(cè)速度快，價(jià)格低廉，能檢測(cè)出含菌量較高的標(biāo)本，但是無(wú)法檢測(cè)出含菌量較低的標(biāo)本，因此其檢出率較低，無(wú)法早期診斷結(jié)核病。細(xì)菌培養(yǎng)法敏感性高并可鑒定死菌與活菌，被譽(yù)為結(jié)核病診斷的“黃金標(biāo)準(zhǔn)”［1］。但傳統(tǒng)培養(yǎng)方法培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，且每周觀察一次培養(yǎng)基表面菌落生長(zhǎng)情況，就容易造成人為的報(bào)告延誤［2］。近年來(lái)，結(jié)核病新診斷技術(shù)進(jìn)展顯著，其中BacT／ALERT 3D全自動(dòng)微生物快速培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng)的應(yīng)用可以有效提高培養(yǎng)效率，縮短培養(yǎng)時(shí)間有助于及時(shí)報(bào)告陽(yáng)性結(jié)果。

BacT／ALERT 3D是第六代嶄新的全自動(dòng)微生物快速檢測(cè)系統(tǒng)，也是血液培養(yǎng)和分支桿菌檢測(cè)系統(tǒng)的新標(biāo)準(zhǔn)。BacT／ALERT 3D全自動(dòng)微生物快速培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng)依靠CO2比色檢測(cè)裝置顯示培養(yǎng)系統(tǒng)中分支桿菌的生長(zhǎng)情況。其培養(yǎng)瓶底部有顏色感應(yīng)器，當(dāng)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)有分支桿菌生長(zhǎng)時(shí)，產(chǎn)生的CO2滲透至感應(yīng)器經(jīng)水飽和后產(chǎn)生氫離子（H＋）改變感應(yīng)器的酸堿值且顏色也跟著改變由深綠色變?yōu)辄S色，儀器自動(dòng)連續(xù)檢測(cè)，并且自動(dòng)顯示有無(wú)分支桿菌生長(zhǎng)［3］。具有自動(dòng)化程度高、污染率低、陽(yáng)性率高等特點(diǎn)。

BacT／ALERT 3D檢測(cè)法對(duì)結(jié)核分支桿菌的初代分離陽(yáng)性率比常規(guī)方法提高了7%－18%［4，5］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)核分支桿菌的陽(yáng)性檢出率平均為39.9%，明顯高于涂片法的14.7%。雖然培養(yǎng)時(shí)間仍需2－3周，但如使用分支桿菌快速培養(yǎng)管可使陽(yáng)性培養(yǎng)時(shí)間縮短至4－11天。BacT／ALERT 3D快速培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng)不僅能檢測(cè)結(jié)核分支桿菌，同時(shí)還能進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)和菌型鑒定，是一種準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速的檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的方法。

［1］Medeeins Sans Frontieres Tuberculosis and drug sensitivity testing：an overview of the current diagnostic pipeline［J］.Geneva，Switzerland：2006，10.

［2］吳龍章，蔡興珊，吳幸怡，等.四種檢測(cè)方法對(duì)結(jié)合病臨床診斷價(jià)值的探討［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，25（7）：742.

［3］胡忠義，勒安佳.結(jié)核分枝桿菌耐藥性檢測(cè)進(jìn)展［J］.臨床肺科雜志，2000，5（2）：116.

［4］張力興，李京生，劉曉雪，等.BACTEC－460－TB與常規(guī)方法分離分枝桿菌藥物敏感試驗(yàn)和菌型的初步鑒定［J］.中國(guó)防癆雜志，1992，14（2）：135.

［5］馬曙光，王 輝，王會(huì)善，等.BACTEC－460臨床運(yùn)用于結(jié)果分析［J］.中國(guó)防癆雜志，1995，17（2）：161.