武曉紅，敬永生

（河南大學(xué) 藥學(xué)院，河南 開封 475004）

乙肝扶正膠囊為中藥成方制劑，收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第一冊》［1］。原標(biāo)準(zhǔn)鑒別項只有顯微鏡下觀察而無含量測定，不同廠家的藥品療效差異很大。乙肝扶正膠囊是按照中醫(yī)辯證理論，根據(jù)多年治療乙肝的臨床經(jīng)驗研制出的純中藥制劑。乙肝扶正膠囊由何首烏、當(dāng)歸、人參、丹參、虎杖、麻黃、貫眾等貴重藥材精制而成，對改善肝炎患者的自覺癥狀，降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶，恢復(fù)肝功能和表面抗原轉(zhuǎn)陰作用迅速，療效顯著。適用范圍很廣，即肝區(qū)隱痛不適，全身乏力，腰膝酸軟，氣短心悸，自汗，頭暈，納少等［2－6］。丹參為本方中的主藥，丹參酮ⅡA是丹參的主要成分［7］。我們采用高效液相色譜法測定乙肝扶正膠囊中丹參酮ⅡA的含量，測定結(jié)果表明該法快速、簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

島津LC－10A型高效液相色譜儀（LC－10A 泵；SPD－10AVP紫外檢測器；CS－Light Potrun Analysis數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)），日本島津制作所；法國UVIKON XL型紫外可見分光光度計；AE－240型電子分析天平，梅特勒－托利多儀器；HS3120超聲清洗儀，天津恒奧科技發(fā)展有限公司；102型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，山東濰坊醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司醫(yī)療器械廠；ZDHW型調(diào)溫電熱套，北京市永光明醫(yī)療儀器廠。

1.2 試劑

丹參酮ⅡA對照品（中國藥品生物制品檢定所110766－200417）；乙肝扶正膠囊（哈藥集團(tuán)三精黑河藥業(yè)有限公司，批號：070501），色譜純甲醇。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗 色譜柱：Shim－Paok CLC ODS柱（150 mm×6.0 mm）；流動相：甲醇－水（75∶25）；流速為1.0 mL／min；檢測波長270nm；靈敏度：0.01AVFS；柱溫30℃。在此條件下，丹參酮ⅡA和樣品中其他相鄰色譜峰分離度大于2.0，理論塔板數(shù)按丹參酮ⅡA峰計算不低于7000。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取丹參酮ⅡA對照品13.00mg，置250mL 棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（52μg／mL）對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 取本品20粒的內(nèi)容物研細(xì)，分別精密稱取相當(dāng)于8粒內(nèi)容物的量，置入2個100mL回流瓶中，各精密加入25.00mL甲醇，稱定重量。加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2 結(jié)果

2.2.1 陰性對照試驗 按藥品標(biāo)準(zhǔn)所載處方工藝，不含丹參，制成陰性樣品，按照供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。在2.1.1項下的色譜條件下準(zhǔn)確進(jìn)樣20μL。從圖1 上可看出，圖a對照品溶液，圖b 供試品溶液的色譜圖上，有相同保留時間（t）20min處的色譜峰，而圖c陰性對照溶液的色譜圖上未見。這表明在本試驗條件下丹參酮ⅡA的測定不受其他雜質(zhì)干擾。

圖1 HPLC圖譜

2.2.2 線性關(guān)系的考察 精密吸取對照品溶液0.50、1.00、2.00、4.00、10.00 mL，分別依次置入25 mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。分別準(zhǔn)確進(jìn)樣20μL，按2.1.1項下色譜條件測定，記錄峰面積，結(jié)果見表1，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，回歸方程為Y＝128603.8 X－2503.884，R＝0.9999（n＝5），RSD＝1.13%。在1.04～20.80μg／mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

表1 線性關(guān)系的考察

2.2.3 精密度試驗 精密吸取對照品溶液4.00mL置入25mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。得濃度為8.32μg／mL的對照品溶液，按2.1.1項下色譜條件測定，準(zhǔn)確進(jìn)樣20μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，平均峰面積為1071110.9，RSD＝0.32%，結(jié)果表明該方法精密度高。

2.2.4 重復(fù)性試驗 取同一批號樣品（批號：070501），按2.1.3項下的供試品溶液制備方法制得供試品溶液。按2.1.1項下色譜條件測定，準(zhǔn)確進(jìn)樣20μL，平行測定5 次，記錄平均峰面積372050.7，RSD＝1.46%，（n＝5）表明該方法重復(fù)性好。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗 精密吸取對照品溶液2.00mL置入50mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。得濃度為2.08μg／mL的對照品溶液，按2.1.1項下色譜條件測定，準(zhǔn)確進(jìn)樣20μL，每隔2h進(jìn)樣1次，峰面積平均值為264210.6，RSD＝1.35%，（n＝6）結(jié)果表明對照品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.6 回收率試驗 取已知含量的樣品（批號：070501）3份，分別精密量取5.00mL，置入25mL棕色容量瓶中。再分別精密取5.00mL 2.2.3項下所得8.32μg／mL的對照品溶液置入上述棕色容量瓶中。按2.1.1項下色譜條件測定，準(zhǔn)確進(jìn)樣20μL，記錄實測量。數(shù)據(jù)見表5，平均回收率為99.39%， RSD＝1.32%。結(jié)果表明回收率高，準(zhǔn)確度高。

表5 乙肝扶正膠囊中丹參酮的加樣回收率

2.2.7 供試品中丹參酮ⅡA的含量測定 分別精密吸取按2.1.3項下所得的乙肝扶正膠囊供試品溶液20μL，按2.1.1項下色譜條件測定，測得丹參酮ⅡA峰面積，以外標(biāo)法計算樣品中丹參酮ⅡA的含量，結(jié)果見表6。

表6 乙肝扶正膠囊中丹參酮ⅡA的含量測定

3 討論

丹參是乙肝扶正膠囊的主藥之一，所以丹參酮ⅡA的含量也正面反映了其質(zhì)量的優(yōu)劣。經(jīng)過多批樣品中丹參酮ⅡA的含量測定表明，HPLC 測定乙肝扶正膠囊中丹參酮ⅡA的含量，簡便，準(zhǔn)確，準(zhǔn)確度高，精密度高，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性好，適于此制劑的含量測定，可作為該產(chǎn)品的質(zhì)量控制方法。

［1］中華人民共和國國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：中國醫(yī)藥 科技出版社，2010：70－71.

［2］路金瑞，趙軍磊.丹參酮聯(lián)合西藥治療尋常痤瘡療效觀察［J］.河南大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2011，30（2）：153－154.

［3］張小帆，王培娜，王文琳.高效液相色譜法測定不同產(chǎn)地丹參中丹參酮ⅡA的含量［J］.河南大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2003，22（1）：67－68.

［4］吳德明，董茂臣，唐文君.高效液相色譜法測定乙肝扶正膠囊中丹參酮ⅡA的含量［J］.黑龍江中醫(yī)藥，2012，（2）：49－50.

［5］肖雯婧，于波濤，馬婕.高效液相色譜法測定五參安神膠囊中丹參酮ⅡA的含量［J］.西南國防醫(yī)藥，2011，12（12）：1294－1296.

［6］宋厚斌.高效液相色譜法測定降粘膠囊中丹參酮ⅡA含量［J］.中國新藥與臨床雜志2010，11（11）：874－876.

［7］孟建升，楊文文.高效液相色譜法測定五明丹膠囊中丹參酮ⅡA含量［J］.中國藥業(yè)，2012，10（19）：40－41.