張 昀，劉 路，李 欽

（河南大學 藥學院，河南 開封 475004）

明目顆粒劑由赤芍、蒼術、化橘紅、菟絲子、防風、甘草等十多味中藥組成，有疏肝逐瘀、活血明目等功效，經長期臨床驗證對治療視網膜黃斑變性有較好的療效。為了方便臨床應用，我們將其開發(fā)成便于攜帶和服用的顆粒劑，并對該藥進行質量標準研究，以保證臨床用藥安全、有效。通過實驗研究及參考相關文獻［1－5］，我們選擇主要有效成分對制劑中蒼術、化橘紅、防風等味藥物進行檢識，要求檢測方法專屬性強、快速、簡便、重視性好。選擇君藥赤芍制定含量測定方法，測定方法必須具有準確反映被測成分的能力，且要求重現(xiàn)性好、簡便、快速、穩(wěn)定。

1 儀器及試藥

1.1 儀器

LC－2010A 高效液相色譜儀（日本島津）；KQ－300VDE超聲提取器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110736－200422）；甲醇為色譜純；液相用水為新鮮重蒸水；其余試劑均為分析純；樣品自制。

2 方法與結果

2.1 定性鑒別

2.1.1 蒼術的薄層色譜鑒別 取本品10g，研細，置250mL圓底燒瓶中，加水100mL，用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，在提取柱下端預先放置5mL 乙醚，加熱回流6h，將乙醚部分取出，揮干乙醚，殘渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作為供試品溶液。取蒼術標準對照藥材粉末1g，同法制成對照藥材溶液。按成品方法制得的蒼術空白顆粒，按供試品的制法制成陰性對照液。吸取上述溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60℃～90℃）－乙酸乙酯（20∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以質量分數(shù)為5%對二甲氨基苯甲醛與體積分數(shù)為10%硫酸溶液的混合液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，并應顯有一相同的污綠色主斑點（蒼術素）；陰性對照色譜上無干擾。見圖1。

2.1.2 化橘紅的薄層色譜鑒別 取本品10g，研細，加甲醇20 mL，超聲30 min，濾過，濾液濃縮至1mL，作為供試品溶液。取化橘紅對照藥材粉末0.5g，加甲醇10mL，同法制成對照藥材溶液。按成品方法制得的化橘紅空白顆粒10g，按供試品的制法制成陰性對照液。吸取上述溶液各5μL，分別點于同一用5g／L氫氧化鈉溶液制備的硅膠G 薄層板上，以乙酸乙酯－甲醇－水（100∶17∶13）為展開劑，展開約3cm，取出，晾干，再以甲苯－乙酸乙酯－冰醋酸－水（20∶10∶1.5∶1）的上層溶液為展開劑，展開約8cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；陰性對照色譜上無干擾。見圖2。

2.1.3 防風的薄層色譜鑒別 取本品15g，研細，加丙酮30mL，超聲30min，濾過，濾液濃縮至干，殘渣加無水乙醇1mL使溶解，作為供試品溶液。取防風對照藥材粉末1g，加丙酮20mL，同法制成對照藥材溶液。按成品方法制得的防風空白顆粒15g，按供試品的制法制成陰性對照液。吸取上述溶液各5 μL，分別點于同一硅膠GF254 薄層板上，以三氯甲烷－甲醇（4∶1.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；陰性對照色譜上無干擾。見圖3。

圖1 蒼術薄層色譜圖

圖2 化橘紅薄層色譜圖

圖3 防風薄層色譜圖

2.2 赤芍中有效成分芍藥苷的含量測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗 色譜柱：Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：30℃；流動相：甲醇－ 水（23∶77）；檢測波長：230nm；流速：1mL／min；進樣量：10μL。在此色譜條件下，芍藥苷的保留時間約12min，理論塔板數(shù)按芍藥苷計算均不低于2000。

2.2.2 溶液的制備 ①對照品溶液的制備：精密稱取經五氧化二磷減壓干燥器中干燥36h的芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，即得。②供試品溶液的制備：取樣品顆粒50g，研細，混勻，精密稱取10g，置索氏提取器中，加乙醚50mL，水浴上回流1h，棄去乙醚液，殘渣揮干乙醚，用甲醇80mL，超聲處理40min提取，用甲醇10mL分2次洗滌殘渣，合并甲醇液，濃縮至約15mL，過中性氧化鋁柱（中性氧化鋁8g裝柱），用甲醇40mL 洗脫，收集洗脫液于50 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度即得供試品溶液。③陰性樣品溶液的制備：按處方中藥味的比例，不含赤芍，按成品工藝制成赤芍空白顆粒，再按供試品溶液的制備方法制成陰性樣品對照液。

2.2.3 供試品、對照品、陰性溶液HPLC 圖的比較分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照液，注入高效液相色譜儀，采用紫外檢測器進行檢測。根據(jù)對照品、供試品、陰性樣品的高效液相色譜圖，可以看到供試品在芍藥苷的保留時間出峰，分離度良好，而陰性樣品無干擾。見圖4、圖5、圖6。

圖4 芍藥苷標準品HPLC色譜圖

圖5 芍藥苷樣品HPLC色譜圖

圖6 芍藥苷陰性對照品HPLC色譜圖

2.2.4 線性關系考察 分別精密吸取芍藥苷對照品溶液（0.546g／L）2、5、10、15、20μL，注入高效液相色譜儀，按“2.2.1”色譜條件測定峰面積，以峰面積值為縱坐標，以進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程Y＝880598 X＋18045，r＝1.0000，結果表明芍藥苷在1.092～10.920μg范圍內有良好的線性關系。

2.2.5 精密度實驗 精密吸取供試品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，重復進樣5次，記錄峰面積，結果RSD為1.0%，說明本方法精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性實驗 精密稱取樣品10g，制成供試品溶液，12h內每間隔一段時間進樣1次，結果RSD為1.4%，表明本法穩(wěn)定性較好。

2.2.7 重現(xiàn)性實驗 精密稱取同一批號（061110）的5份樣品各10g，制成5 份供試品溶液，精密吸取10μL，注入高效液相色譜儀，結果RSD為1.3%，重現(xiàn)性良好。

2.2.8 加樣回收率實驗 精密稱取已知含量的樣品（批號061110），分別加入一定量的對照品，制成供試品溶液。精密吸取6份供試品溶液，注入高效液相色譜儀。結果表明，平均加樣回收率為97.03%，回收率的RDS為1.2%，說明供試品的制備回收率高，芍藥苷在制備過程中損失較少，符合實驗要求。

2.2.9 三批樣品測定 精密稱取樣品，按上述方法處理，測定，計算芍藥苷的含量。三批樣品測定結果分別為2.72mg／g，2.64mg／g，2.61mg／g。

3 討論

明目顆粒成分多，選用主藥蒼術、化橘紅、防風做定性鑒別，結果斑點清晰，陰性無干擾，專屬性強。芍藥苷含量測定方法中，經多種比例流動相的反復篩選，選定甲醇－水（23∶77）為流動相，樣品中芍藥苷的峰形好，與雜質峰分離度好，保留時間合適?，F(xiàn)代藥理研究表明芍藥具有調節(jié)免疫力、增加紅細胞對低滲張力的抗性，抑制血小板聚集，抗凝，抗血栓，抗動脈粥樣硬化，擴張血管等作用，芍藥苷等單萜類化合物是這些生理活性的主要物質基礎。

［1］桂蜀華，陳軍，王林，等.HPLC法同時測定銀翹柴桂顆粒中綠原酸、芍藥苷和黃芩苷［J］.中成藥，2011，33（7）：1175－1178.

［2］張小帆，王培娜，王文琳.高效液相色譜法測定不同產地丹參中丹參酮ⅡA的含量［J］.河南大學學報：醫(yī)學版，2003，22（1）：38.

［3］于開紅.視舒茶的質量控制［J］.現(xiàn)代中藥研究與實踐，2012，26（1）：64－66.

［4］馮川，劉唯芬，慕善學，等.RP－HPLC法測定清胰利膽顆粒中綠原酸和芍藥苷的含量［J］.沈陽藥科大學學報，2012，29（3）：219－222.

［5］弓曉東，談瑄忠，毛春芹，等.芍紅消積顆粒的質量標準研究［J］.中國藥房，2012，23（3）：250－252.