李武營，胡海廷，王翠紅

（1.河南大學(xué) 學(xué)報編輯部，河南 開封 475000；2.河南大學(xué) 藥學(xué)院，河南 開封 475004）

玉美人輕身減肥片由大黃、防己、丹參等11味中藥組成，具有輕身減肥、益氣健脾、活血化瘀、寬胸去積的功效。此方收載于中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第十九冊。大黃為該制劑的君藥，含有大黃素（Emodin）和大黃酚（Chrysophanol）等有效成分［1］。標準中尚無含量測定項目。該藥中有效成分的測定文獻［2－5］報道較少。我們以大黃的主要有效成分大黃素和大黃酚為指標，采用高效液相色譜法測定其在輕身減肥片中的含量，結(jié)果獲得滿意的效果。該方法操作快捷、簡便、準確可靠、專屬性強，方法可行。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀（包括G1311C四元泵，G1329B 自動進樣系統(tǒng)，G1316A 柱溫箱，G1314FVWD 檢測器，Agilent ChemStation 色譜工作站）；色譜柱Hypersil－ODS（4.6mm×150mm，5μm）；AG135型電子天平（瑞士，梅特勒－托利多）；HS10260D型超聲波清洗機（天津市恒奧科技發(fā)展有限公司）等。

1.2 試劑

玉美人輕身減肥片（陜西華龍制藥有限公司，生產(chǎn)批號：20110401，20110601，20110701，規(guī)格：0.28g／素片）；大黃素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110756－200110）；大黃酚對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110796－200716）；甲醇（高效液相色譜專用，一級色譜純，天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司）；純凈水（樂百氏有限公司）；醋酸（天津市德恩化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品儲備液的制備

精密稱取大黃素、大黃酚對照品5.00 mg 于100mL容量瓶中，加流動相適量使溶解，并用流動相稀釋至刻度，搖勻即得50.0μg／mL的對照品儲備液。

2.2 標準溶液的制備

精密量取大黃素儲備液1.00mL于10mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻即得5.00μg／mL的大黃素標準溶液。

精密量取大黃酚儲備液2.00mL于10mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻即得10.0μg／mL的大黃酚標準溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品20片，除去糖衣，精密稱定，精密稱取2片重，置100mL容量瓶中，加流動相適量，超聲提取1h 使之完全溶解，冷卻至室溫，用流動相稀釋至刻度，靜置，取上清液，用0.22μm 微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.4 實驗條件的選擇［6－7］

色譜條件：Hypersil－ODS 柱（4.6 mm ×150mm，5μm）購自大連依利特公司；流動相：甲醇－0.1%醋酸（85∶15 ）；柱溫：室溫；流速：1.0 mL／min；檢測波長：254nm；進樣體積：20μL。在此色譜條件下，得到大黃素、大黃酚對照品溶液的HPLC 圖譜（圖1）及供試品溶液的HPLC圖譜（圖2）。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系 取“2.2”項下的5.00μg／mL的大黃素標準溶液和10.0μg／mL的大黃酚標準溶液，在“2.4”項色譜條件下，分別進樣5、10、15、20、25μL記錄色譜峰面積，以相應(yīng)峰面積（A）為縱坐標，進樣量（μg）為橫坐標。結(jié)果見表1、表2。

以峰面積Y 對進樣質(zhì)量X 進行線性回歸，得回歸方程為：

大黃素：Y＝3248 X＋0.4，r＝1.0000，n＝5。

大黃酚：Y＝4994.4 X－3.1，r＝1.0000，n＝5。

實驗結(jié)果表明，大黃素、大黃酚分別在0.025～0.125μg，0.05～0.25μg范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。

圖1 大黃素和大黃酚對照品溶液的HPLC圖譜

圖2 輕身減肥片供試品溶液的HPLC圖譜

表1 標準曲線（大黃素）

表2 標準曲線（大黃酚）

2.5.2 精密度實驗 取“2.2”項下5.00μg／mL的大黃素標準溶液和10.0μg／mL的大黃酚標準溶液，在“2.4”項色譜條件下，進樣15μL各重復(fù)9次，分別測定其峰面積，大黃素RSD為0.51%，大黃酚RSD為0.26%。

2.5.3 重現(xiàn)性實驗 取同一批樣品按“2.3”項下方法配制樣品溶液6 份，每份溶液進樣20μL，記錄色譜圖，以外標法計算，得大黃素含量的重復(fù)性RSD為0.98%，大黃酚含量的重復(fù)性RSD為0.37%。

2.5.4 穩(wěn)定性實驗 取“2.3”項下供試品溶液，在“2.4”項色譜條件下，分別在樣品制備后0、2、4、8、12h各進樣1次，連續(xù)考察12h，每次進樣20μL，記錄色譜圖，測定峰面積。結(jié)果表明，供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.5 回收率實驗 精密稱取已知含量的樣品1片重9份，再分別加入一定量的大黃素、大黃酚對照品儲備液，按“2.3”項供試品溶液制備方法及“2.4”項色譜條件下，以外標法進行測定，計算回收率。結(jié)果顯示，準確度較好。見表3、表4。

2.5.6 含量測定 取3批輕身減肥片，按“2.3”項下的方法制備3份供試品溶液，分別用0.22μm 濾膜濾過，取續(xù)濾液，按“2.4”項下色譜條件測定，由外標法計算，結(jié)果見表5。

表3 大黃素的回收率實驗（n＝9）

表4 大黃酚的回收率實驗（n＝9）

表5 樣品含量測定（n＝3）

3 討論

3.1 流動相的選擇

比較了不同比例的甲醇－水系統(tǒng)、甲醇－醋酸系統(tǒng)以及甲醇－0.1%磷酸系統(tǒng)為流動相，結(jié)果表明，用甲醇－0.1%醋酸（85∶15）作為流動相測定輕身減肥片中大黃素和大黃酚的含量較為適宜，分離效果較好，峰形尖銳，保留時間適宜，且其他成分對此無干擾，故用此為流動相。

3.2 提取方法的考察

本實驗對不同溶劑、不同溶劑體積和不同提取時間進行考察，經(jīng)實驗比較，結(jié)果表明，每片樣品加50mL甲醇－0.1%醋酸（85∶15），超聲60min能夠提取完全。實驗定其為樣品處理方法。

［1］國家藥典委員會編.衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第十九冊［S］.北京：中國醫(yī)學(xué)科技出版社，1998：135.

［2］韓紫巖，郭新社.大黃復(fù)方制劑對局灶性腦缺血模型大鼠的影響［J］.河南大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2010，29（1）：45－48.

［3］陳志桃，季火英.高效液相色譜法測定輕身減肥片中大黃素大黃酚的含量［J］.海峽藥學(xué)，2004，16（3）：49－51.

［4］張云，宋旭峰.高效液相色譜法測定輕身減肥片中大黃素與大黃酚的含量［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2002，8（5）：4－6.

［5］楊春靜.輕身減肥片中淫羊藿苷含量的高效液相色譜法測定［J］.中醫(yī)學(xué)報，2011，26（1）：64－66.

［6］國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典·1 部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：22.

［7］楊振濤，陳霞，李黎明，等.正交實驗法提取網(wǎng)果酸模中大黃素和大黃酚的工藝研究［J］.西北藥學(xué)雜志，2011，26（1）：24－25.