黃永存 于 玲 王艷蘋(píng) 張 敏 孫 華 宋俊蘭 邢 建 劉 彤

肺動(dòng)脈血栓栓塞與凝血-纖溶因子關(guān)系的臨床研究※

黃永存1于 玲2王艷蘋(píng)1張 敏1孫 華1宋俊蘭1邢 建1劉 彤1

目的探討肺動(dòng)脈血栓栓塞患者與組織型纖溶酶原激活物（t-PA）和組織型纖溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）血漿水平的關(guān)系。方法選取2008年6月～2011年6月間在我院進(jìn)行住院治療的53例肺動(dòng)脈血栓栓塞患者，作為觀察組，另外選擇同期健康體檢者57例作為對(duì)照組。通過(guò)聚合鏈酶式反應(yīng)（PCR）來(lái)檢測(cè)肺動(dòng)脈血栓栓塞患者基因型及其多態(tài)性；并通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行t-PA和PAI-1血漿水平的檢測(cè)，比較兩組患者的凝血-纖溶因子水平。結(jié)果通過(guò)PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PTE患者主要有三種PAI-1基因型，主要以4G/4G和4G/5G基因型為主，并且該基因型PAI-1水平顯著高于5G/5G基因型（P＜0.05）；ELISA法檢測(cè)顯示觀察組t-PA水平（53.14±18.24）μg/L顯著低于對(duì)照組的（70.45 ±20.08）μg/L，（t=4.7207，P＜0.01）；而PAI-1水平（58.74±18.65）μg/L顯著高于對(duì)照組（48.62±15.60）μg/L（t=3.0948，P＜0.05）。結(jié)論肺動(dòng)脈血栓栓塞患者與健康者相比，顯然具備較低的纖溶狀態(tài)。

肺動(dòng)脈血栓栓塞；組織型纖溶酶原激活物（t-PA）；組織型纖溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）；聚合鏈酶式反應(yīng)（PCR）

肺動(dòng)脈血栓栓塞（PTE）是一種具有高發(fā)病率、高誤診率和漏診率、高病死率的常見(jiàn)疾病。組織型纖溶酶原激活物（Tissue plasminogen activator,t-PA）以及它的抑制物-1（Plasminogen activator inhibitor-1, PAI-1）對(duì)患者機(jī)體纖溶系統(tǒng)活性具有重要的調(diào)節(jié)功能。PAI-1血漿水平增加往往與人體心臟、血管等疾病嚴(yán)重程度相關(guān)[1-2]。本文對(duì)2008年6月～2011年6月間在我院進(jìn)行住院治療的53例肺動(dòng)脈血栓患者臨床資料進(jìn)行研究，探討肺動(dòng)脈血栓栓塞患者與組織型纖溶酶原激活物（t-PA）和組織型纖溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）血漿水平的關(guān)系。具體報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2008年6月～2011年6月間在我院進(jìn)行住院治療的53例肺動(dòng)脈血栓患者，作為觀察組，所有患者均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)制定的PTE患者診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，其中男30例，女23例，患者年齡在28～73歲，平均年齡為（52.9±8.6）歲，其中合并深靜脈血栓患者為32例。另外選擇同期健康體檢者57例作為對(duì)照組，男33例，女24例，年齡在29～71歲，平均年齡（53.6±9.7）歲。對(duì)照組均無(wú)靜脈曲張、近期手術(shù)、靜脈置管以及肺動(dòng)脈血栓家族史等。兩組患者在年齡、性別等方面均無(wú)顯著差異，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 DNA的提取和聚合鏈酶式反應(yīng)（Polymerase chain reaction, PCR）抽取53例肺動(dòng)脈血栓患者5ml外周靜脈血，枸櫞酸鈉抗凝處理，4℃條件下3000r/ min冷凍離心12min，分離血細(xì)胞和血漿（80℃）保存?zhèn)溆谩Ｊ褂梅?氯仿抽提技術(shù)從外周血白細(xì)胞中提取基因組DNA。使用PCR儀（TC-98/T/Hca，Bioer Technology）進(jìn)行PCR，反應(yīng)體系中所涉及的4條引物為：4G引物：5'-GTCTGGACACGTGGGGA-3'；5G引物：5'-GT-CTGGACACGTGGGGG-3'；上游引物：5'-AAGCTTTTAACCATGGTAACCCCTGGT-3'；下游引物：5'-TGCAGCCAGCCACGTGATTGTCTA G-3'。

PCR反應(yīng)過(guò)程為，首先進(jìn)行94℃條件下預(yù)變性5min，進(jìn)行94℃變性50s，58℃退火50s，72℃延伸1min，連續(xù)進(jìn)行32個(gè)循環(huán)，進(jìn)行72℃延伸10min后4℃水浴1h。接著進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%瓊脂糖，體積分?jǐn)?shù)0.1%的溴化乙錠）進(jìn)行恒壓（80～120V）條件下電泳40～60min。使用紫外燈進(jìn)行DNA條帶觀察，確定纖溶酶原激活物抑制物-1基因型。

1.2.2 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）進(jìn)行t-PA、PAI-1測(cè)定將兩組患者外周靜脈血進(jìn)行上述低溫離心分離的白細(xì)胞和血漿細(xì)胞，采用ELISA試劑盒進(jìn)行t-PA、PAI-1的含量水平測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0軟件統(tǒng)計(jì)包進(jìn)行分析，計(jì)量資料以計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計(jì)量資料的組間比較進(jìn)行t檢驗(yàn)，在P＜0.05時(shí)，差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PTE患者PAI-1基因型分布通過(guò)PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PTE患者主要有三種PAI-1基因型，其中4G/4G患者26例，占總數(shù)的（49.06%），4G/5G基因型為24例，占總數(shù)的（45.28%），5G/5G基因型為3例，占總數(shù)的（5.66%）。

2.2 兩組患者t-PA和PAI-1血漿水平比較經(jīng)過(guò)ELISA法檢測(cè)兩組患者t-PA和PAI-1血漿水平，其中觀察組t-PA水平（53.14±18.24）μg/L顯著低于對(duì)照組，（t=4.7207，P＜0.01）；而PAI-1水平（58.74 ±18.65）μg/L顯著高于對(duì)照組（t=3.0948，P＜0.05），具體數(shù)據(jù)詳見(jiàn)表1。

表1 兩組患者t-PA和PAI-1血漿水平比較[μg/L,(±s)]

表1 兩組患者t-PA和PAI-1血漿水平比較[μg/L,(±s)]

注：#與*分別代表觀察組相交于對(duì)照組（P＜0.01）和（P＜0.05）

組別 n t-PA PAI-1觀察組 53 53.14±18.24#58.74±18.65*對(duì)照組 57 70.45±20.08 48.62±15.60

2.3PTE患者PAI-1不同基因型與PAI-1水平關(guān)系4G/4G患者26例，PAI-1水平為（64.78±19.78）μg/L；4G/5G基因型為24例，PAI-1水平為（54.75±15.72）μg/L；5G/5G基因型為3例，PAI-1水平為（47.68 ±13.25）μg/L；4G/4G和4G/5G基因型PAI-1水平顯著高于5G/5G基因型（P＜0.05）。

3 討論

PET為來(lái)自靜脈系統(tǒng)或右心的血栓阻塞肺動(dòng)脈或其分支所致的疾病，肺動(dòng)脈血栓栓塞的臨床以及病理特征主要表現(xiàn)為肺循環(huán)和呼吸功能障礙。肺動(dòng)脈血栓栓塞患者的栓塞主要有單一部位和多部位的形式出現(xiàn)。臨床病理檢查結(jié)果顯示，單一部位栓塞相對(duì)較少，取而代之的以多部位、雙側(cè)性的血栓栓塞為主要形式[4]。肺動(dòng)脈右側(cè)以及下肺葉比較容易發(fā)生栓塞，栓塞發(fā)生后得不到及時(shí)治療可局部繼發(fā)形成血栓，最終導(dǎo)致疾病的發(fā)生。肺動(dòng)脈及其分支在遭受栓子阻塞情況上升到一定程度后，產(chǎn)生的機(jī)械阻塞作用聯(lián)合神經(jīng)體液因素、低氧情況致使患者肺動(dòng)脈收縮，肺循環(huán)阻力以及肺動(dòng)脈高壓提高；右心室后負(fù)荷增高、右心室壁張力增高嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致急性肺源性心臟病形成，右心室擴(kuò)大則會(huì)導(dǎo)致右心功能不全，最終因?yàn)榛匦难坎蛔阈纬伸o脈系統(tǒng)瘀血；右心擴(kuò)大致室間隔左移，使左心室功能受損，導(dǎo)致心排出量下降，進(jìn)而可引起體循環(huán)低血壓或休克[5]。

神經(jīng)-體液及循環(huán)內(nèi)分泌激素在調(diào)節(jié)PTE的病理生理過(guò)程中起到非常重要的作用，組織型纖溶酶原激活物（t-PA）就是一種纖溶酶原生理性激活劑[6]，在血栓纖溶過(guò)程中起到關(guān)鍵性的啟動(dòng)作用。而t-PA的作用要受到t-PA抑制物PAI的控制與調(diào)節(jié)，PAI活性較高或者含量過(guò)高則是主要導(dǎo)致血栓形成的原因之一，若出現(xiàn)活性或水平過(guò)低則容易導(dǎo)致出血。PAI-1則是PAI中最重要的一種t-PA抑制物，PAI-1對(duì)t-PA抑制作用約為整個(gè)血漿中PAI抑制作用的六成[7]。在對(duì)PAI-1血漿水平與心、肺疾病的相關(guān)關(guān)系研究發(fā)現(xiàn)，PAI-1的血漿水平增加與很多心、肺疾病嚴(yán)重程度相關(guān)，并且發(fā)現(xiàn)PAI-1也可以幫助PTE的診斷[8]。同時(shí)有研究證實(shí)PTE患者合并DVT存在纖溶活性失調(diào)，PAI-1水平性對(duì)于正常水平出現(xiàn)升高[9]。文中觀察組53例肺動(dòng)脈血栓患者中，32例并深靜脈血栓，觀察組t-PA水平（53.14±18.24）μg/L顯著低于對(duì)照組的（70.45±20.08）μg/L，（t=4.7207，P＜0.01）；而PAI-1水平（58.74±18.65）μg/L顯著高于對(duì)照組48.62±15.60）μg/L（t=3.0948，P＜0.05）。在對(duì)肺動(dòng)脈血栓患者PAI-1基因型研究發(fā)現(xiàn)，患者主要以4G/4G基因型、4G/5G基因型為主。同時(shí)發(fā)現(xiàn)4G/4G和4G/5G基因型PAI-1水平顯著高于5G/5G基因型（P＜0.05）。

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R563.5

A

1673-5846(2013)04-0308-03

1牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院一分院檢驗(yàn)科，黑龍江牡丹江 157000

2牡丹江市第二人民醫(yī)院腦科醫(yī)院，黑龍江牡丹江 157000

黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：12521587