李湘蘭 何得賓 嚴(yán)成玉 樸明杰

吉林省延邊朝醫(yī)醫(yī)院，吉林 延吉 133000

朝藥蛭龍通脈膠囊提取工藝研究

李湘蘭 何得賓 嚴(yán)成玉 樸明杰

吉林省延邊朝醫(yī)醫(yī)院，吉林 延吉 133000

目的：考察天麻有效成分提取的影響因素，研究蛭龍通脈膠囊的提取工藝。方法：采用正交試驗(yàn)設(shè)計法以天麻素的含量為指標(biāo)，對蛭龍通脈膠囊提取工藝進(jìn)行優(yōu)選。結(jié)果：蛭龍通脈膠囊最佳提取工藝為：過20目篩的天麻粗粉及組方中需要提取的中藥飲片，用6倍量70%乙醇，每次提取1h。結(jié)論：本方法工藝穩(wěn)定、專屬性好、靈敏度高，可有效控制本制劑質(zhì)量。

天麻；正交設(shè)計；提取工藝

朝藥蛭龍通脈膠囊是在朝醫(yī)四象體質(zhì)理論的指導(dǎo)下，以朝醫(yī)古方為基礎(chǔ)，通過長期臨床實(shí)踐的總結(jié)而得到的太陰人藥，用于治療太陰人缺血性中風(fēng)引起的頭痛、癱瘓、痰多、便秘等癥。天麻是蛭龍通脈膠囊中主要藥味之一，而天麻素是其活性成分含量最高的有效單體成分［1］。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)以天麻素的含量為指標(biāo)，采用高效液相色譜法進(jìn)行蛭龍通脈膠囊的最佳提取工藝的研究。

1 材料與儀器

1.1 藥材與試藥 朝藥飲片由延邊朝醫(yī)醫(yī)院提供；天麻素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供；乙腈為色譜純；其余試劑為分析純。

1.2 儀器 LC2900高效液相色譜儀，上海天普分析儀器有限公司；FA2004分析天平，沈陽龍騰電子有限公司；MP2008電子天平，沈陽龍騰電子有限公司；JC101型電熱鼓風(fēng)干燥箱，上海成順儀器儀表有限公司；微孔濾膜0.45μm，天津津騰公司。

2 天麻素HPLC分析方法的建立

2.1 色譜條件［2］色譜柱為：Diamonsil C18柱（150mm× 4.6mm，5μm）；流動相為乙腈－0.05%磷酸水（3∶97）；柱溫25℃；流速0.8ml／min；檢測波長220nm；進(jìn)樣量10μl。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 溶液的制備 對照品溶液的制備：精確稱取天麻素標(biāo)準(zhǔn)品10mg，用流動相定容于10ml棕色容量瓶中，搖勻，配成天麻素含量1mg／ml的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液備用。再從儲備液中取出2.1ml置10m l容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得濃度為0.21mg／ml的對照品溶液。供試品溶液的制備：精密稱定天麻提取物適量，用流動相定容于10ml棕色容量瓶中，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，配成天麻供試品溶液。

2.2.2 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對照溶液2、5、10、15、20、30μl進(jìn)樣。以峰面積Y和天麻素的含量X（μg）進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到回歸方程：Y＝667803X－47449 R＝0.9999（n＝9），表明天麻素在0.42～6.3μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，每次10μl，測得峰面積積分值的RSD為0.95%，表明本法精密度較好。

2.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取天麻提取物，按“2.2.1”項下制備供試品溶液，分別于0、2、4、8、10、12h進(jìn)樣。測定峰面積積分值得RSD為0.96%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱取同一天麻提取物5份，按“2.2.1”項下制備供試品溶液，進(jìn)樣，測得供試品中天麻素含量的RSD為1.02%，表明本法重現(xiàn)性好。

2.2.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知天麻素含量的天麻粉末6份，置錐形瓶中，分別精密加入對照品 （0.95－1.15）mg。按“2.2.1”項下供試品溶液的制備方法處理，進(jìn)樣，測得峰面積分值，計算天麻素回收率在98.40%～101.26%之間，平均回收率為99.32%，RSD＝0.99%（n＝6），表明天麻回收率良好。

3 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

天麻塊莖內(nèi)主要含有對羥基甲苯－P－D－吡喃葡萄糖苷，命名為天麻苷，也稱為天麻素，含量大約為0.3%，還含有D－葡萄糖苷 （即胡蘿卜苷）、對羥基苯甲醇、香莢蘭醛、維生素A類物質(zhì)、蛋白質(zhì)、多肽、淀粉、強(qiáng)心苷和鈣、鎂等物質(zhì)。天麻素為無色針狀結(jié)晶體 （C13H18O7），熔點(diǎn)為154～156℃，易溶于甲醇、乙醇和水，很難溶于乙醚和氯仿。因此采用乙醇加熱回流提?。?－5］。

3.1 提取工藝的優(yōu)化 經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)及參考相關(guān)文獻(xiàn)［6］，確定對天麻藥材采用乙醇回流法進(jìn)行提取，次數(shù)為3次，并以提取物中天麻素的含量為考察指標(biāo)，對主要影響因素采用正交表安排實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化提取工藝。主要考察乙醇濃度（A）、乙醇用量 （B）、提取時間 （D）三個因素，每個因素設(shè)三個水平，采用L9（33）正交表安排實(shí)驗(yàn)，其因素水平見表1，正交實(shí)驗(yàn)安排及結(jié)果見表2，方差分析見表3。

表1 L9（33）正交實(shí)驗(yàn)因素水平表

3.2 方法與結(jié)果 將天麻碾磨粉碎，過20目篩。準(zhǔn)確稱取定量天麻粉末，與其他藥材根據(jù)方劑中比例混合，按表1正交實(shí)驗(yàn)方案提取后，提取液過慮，干燥成粉末。放置備用。

HPLC法測定天麻素含量，供試液按“3.1”項下方法制備。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2、3。

表2 L9（33）正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 方差分析表

由表，2、3可以得出各因素作用主次為A＞B＞C，A因素對于天麻素的含量有顯著性影響（P＜0.05），而B因素、C因素對天麻素的含量無顯著性影響?？紤]到實(shí)際工藝條件，確定蛭龍通脈膠囊的提取工藝為A3B1C1，即乙醇濃度為70%，乙醇用量為6倍量，每次提取0.5h。考慮到方劑中其他藥物含量因素，最后確定提取工藝為A3B1C2，即乙醇濃度為70%，乙醇用量為6倍量，每次提取1h。

4 結(jié)論

采用高效液相色譜法測定天麻提取液中天麻素含量，該、方法準(zhǔn)確度和靈敏度較高，實(shí)驗(yàn)操作簡單，是目前較為成熟的測定方法［7、8］。

通過對蛭龍通脈膠囊中天麻提取的正交篩選，確定了本制劑的最佳提取工藝：天麻粉末過40目篩，與其他藥材根據(jù)方劑中比例混合，加入濃度為70%，乙醇用量為6倍量，每次提取1小時。結(jié)果顯示本法工藝穩(wěn)定，提取物中天麻素平均含量為0.282%。

［1］吳思鳳.淺談天麻素藥理作用及臨床應(yīng)用分析 ［J］.中醫(yī)臨床研究，2011，3（22）：93.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 （一部）.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000：44.

［3］張瑗，袁其朋.天麻中天麻素的提取工藝［J］.生命科學(xué)儀器，2009，7（6）：34－35.

［4］研陳陸，馬超英，李芬，等.天麻復(fù)方降壓膠囊中天麻有效成分提取工藝研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2009，20（4）：935－936.

［5］馬宏達(dá)，史國兵，李楊，等.天寧顆粒提取工藝研究 ［J］.中國藥師，2013，16（1）：58－60.

［6］張瑗.天麻中有效成分的提取工藝研究 ［D］.北京：北京化工大學(xué)，2008.

［7］王英峰，張建軍，茹凱，等.高效液相色譜法測定熄風(fēng)通脈顆粒中天麻素含量［J］.中國中藥雜志，2000，25（5）：282－283.

［8］莫志江，莫可元.高效液相色譜法測定天麻及全天麻膠囊中天麻素的含量［J］.中國藥業(yè)，2002，11（10）：49.

R284.1

A

1007－8517（2013）18－0022－02

2013.07.15）

吉林省中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥科技項目（2011－zd02）。