古華龍　陳海雪　梁家銘　余良瑩

【摘 要】通過(guò)酸水解法測(cè)定含氨基酸水溶肥料中17種氨基酸含量，采用sykam全自動(dòng)氨基酸分析儀，水合茚三酮柱后衍生，結(jié)果表明：同一個(gè)樣品測(cè)得的氨基酸峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小，峰面積的回收率在97.8%～101.3%，用此方法測(cè)氨基酸具有良好的重復(fù)性、準(zhǔn)確性。

【關(guān)鍵詞】含氨基酸水溶肥；酸水解；氨基酸；柱后衍生

0.前言

我國(guó)是一個(gè)缺水的農(nóng)業(yè)大國(guó)，化肥的使用在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占重要地位，而傳統(tǒng)肥料存在利用率低、養(yǎng)分損失率高而且耗水量大的缺點(diǎn)，水溶肥料由于其迅速溶于水中、養(yǎng)分更易被吸收而且吸收利用率高并可應(yīng)用于滴灌、噴施、噴灌的節(jié)水特點(diǎn)，在我國(guó)農(nóng)業(yè)中有廣闊的發(fā)展前景[1]。氨基酸水溶肥作為水溶肥中的一員，其原理：氨基酸存在肥料中，易于被作物吸收的特點(diǎn)；亦有提高施肥對(duì)象抗病性，改善施肥作物品質(zhì)的功能；補(bǔ)充植物必須的氨基酸，刺激和調(diào)節(jié)植物快速生長(zhǎng)，促使植物生長(zhǎng)健壯，促進(jìn)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收；增強(qiáng)植物的代謝功能，提高光合作用，促進(jìn)植物根系發(fā)達(dá)，加快植物生長(zhǎng)繁殖[2]。目前，對(duì)于氨基酸的檢測(cè)大多采用液相色譜、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、毛細(xì)管電泳、凱氏定氮法和光譜法等方法。這些方法或試劑費(fèi)用昂貴，或分離效率低，或不能同時(shí)測(cè)多種氨基酸。運(yùn)用氨基酸分析儀能解決以上問(wèn)題，并且操作簡(jiǎn)單方便，重復(fù)性好。

1.方法原理

含氨基酸水溶肥用磺基水楊酸沉淀蛋白質(zhì)后，用EDTA絡(luò)合金屬元素釋放氨基酸，氨基酸經(jīng)離子交換色譜分離、測(cè)定。脯氨酸在440 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，除脯氨酸外，其他各氨基酸均在570nm波長(zhǎng)有最大吸收峰。因此，在440nm檢測(cè)計(jì)算脯氨酸含量，而在570nm檢測(cè)計(jì)算其它各氨基酸含量。

2.試劑與儀器

2.1試劑

6.0mol/l鹽酸溶液、茚三酮溶液、50g/L磺基水楊酸溶液、10g/L EDTA溶液、流動(dòng)相：檸檬酸鈉緩沖液A=0.2N，pH=3.45；檸檬酸鈉緩沖液B=0.2N，pH=10.85；C=超純水；D=20g/L氫氧化鈉溶液。

2.2氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液

含天門冬氨酸、蘇氨酸等17種常規(guī)蛋白水解液分析用層析純氨基酸，各組分濃度C（氨基酸）=100nmol/ml。

2.3儀器與設(shè)備

sykam全自動(dòng)氨基酸分析儀、0.45μm水洗濾膜、真空干燥箱、真空泵等。

3.實(shí)驗(yàn)方法

3.1樣品前處理

稱取試樣2g-10g（精確到0.01g），置于250mI容量瓶中。充分溶解后，加水至刻度，混勻，放置過(guò)夜后吸取上清液（或過(guò)濾后吸取濾液）2ml，于10mL離心管，準(zhǔn)確加人2mL磺基水楊酸溶液混勻，放置lh。準(zhǔn)確加人1mLEDTA-Na溶液和1mL鹽酸溶液，混勻，用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾。吸取上清液（或?yàn)V液）1ml蒸干。準(zhǔn)確加人1～5mL的樣品稀釋液溶解，使氨基酸濃度處于儀器最佳檢測(cè)范圍內(nèi)，供儀器測(cè)定用[3]。

3.2儀器條件

色譜條件： LCAK06/Na （水解氨基酸分析柱）

柱溫：：58℃～74℃梯度控溫

洗脫泵：0.45mL/min；衍生泵：0.25mL/min

檢測(cè)器：440nm/570nm雙波長(zhǎng)檢測(cè)器；反應(yīng)器溫度：130℃；進(jìn)樣體積：50μL

4.結(jié)果與分析

4.1氨基酸的色譜分析

圖1

試驗(yàn)測(cè)定17種氨基酸標(biāo)樣色譜圖見(jiàn)圖1，除PRO（脯氨酸）在440nm檢出，其余氨基酸都在570nm檢測(cè)出。連續(xù)進(jìn)6針濃度為100nmol/L的氨基酸混合標(biāo)樣，其平均分離度R=3.65，最小分離度R=1.41（Ile～Leu），18種濃度均為100nmol/L的氨基酸標(biāo)液的峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差見(jiàn)下表1。

峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.150%～0.748%，說(shuō)明此方法進(jìn)樣重復(fù)性良好。

4.2回收率實(shí)驗(yàn)

把已經(jīng)稀釋3倍的氨基酸的混合標(biāo)樣、氨基酸水溶肥進(jìn)行測(cè)定，再把標(biāo)液加入到樣品中檢測(cè)氨基酸含量，所得數(shù)據(jù)見(jiàn)下表2。

實(shí)驗(yàn)的回收率在97.8%～101.3%之間，說(shuō)明該方法具有較高的準(zhǔn)確性。

5.結(jié)論

本文中使用氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定水溶肥中氨基酸的方法具有良好的重復(fù)性，較高的回收率，而且樣品分離度好，說(shuō)明檢測(cè)氨基酸水溶肥料是可行的。

【參考文獻(xiàn)】

[1]李代紅，傅送保，操斌.水溶性肥料的應(yīng)用與發(fā)展[J].現(xiàn)代化工，2012，32（7）：12-15.

[2]張番.水溶性肥料：養(yǎng)分豐富促生長(zhǎng)節(jié)水節(jié)肥顯成效[N].中國(guó)農(nóng)資，2012-7-13（25）.

[3]NY1429-2010含氨基酸水溶肥料[S].