莫曉能 龔蕊

肺癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，非小細(xì)胞肺癌是肺癌中最常見(jiàn)的類型，其發(fā)病率和死亡率逐年上升。因肺癌起病隱匿，早期可無(wú)任何癥狀，多數(shù)患者首次確診時(shí)已為晚期，失去了手術(shù)治療機(jī)會(huì)，預(yù)后較差，因此尋找一種靈敏、特異且操作簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法對(duì)肺癌的診斷及預(yù)后具有重要意義。Pax基因是一類在進(jìn)化上高度保守的基因家族，廣泛存在于從果蠅到人類的脊椎動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物中，其編碼的蛋白是一組重要的轉(zhuǎn)錄因子，它們調(diào)節(jié)很多基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，從而進(jìn)一步影響細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、浸潤(rùn)等生物學(xué)行為。Pax9是Pax基因家族的一員，研究表明，Pax9在人類涎腺腫瘤、口腔黏膜鱗狀細(xì)胞癌等多種腫瘤組織中表達(dá)增強(qiáng)［1，2］。且已有研究顯示Pax9對(duì)肺的發(fā)育具有潛在的功能，若運(yùn)用RNA干擾技術(shù)降低PAX9的shRNA水平，會(huì)降低肺癌細(xì)胞株的致癌性［3］。本研究通過(guò)檢測(cè)NSCLC患者血清中Pax9的濃度，初步探討Pax9基因在肺癌發(fā)生、發(fā)展及診斷、預(yù)后中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 35例NSCLC患者血清標(biāo)本取自2009年1月至2010年12月在我院就診并確診為NSCLC的患者，其中男19例，女16例，年齡46～78歲，平均(66.7±9.5)歲。按2009年WHO肺癌組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)和IASLC的TNM臨床分期，鱗癌21例，腺癌14例，Ⅰ期7例、Ⅱ期 12例、Ⅲ期10例，IV期6例。42例肺良性病變患者血清標(biāo)本取自我院2012年1月至2012年9月的住院患者，其中男25例，女17例，年齡42～85歲，平均(73.1±11.1)歲。30例健康者為健康體檢人員，男19例，女11例，年齡38～55歲，平均(46.7±6.1)歲。

1.2 臨床資料 所有NSCLC患者均有完整的臨床資料和隨訪資料。末次隨訪至2012年5月?？偵鏁r(shí)間為1個(gè)月至41個(gè)月(從確診時(shí)間開(kāi)始到死亡時(shí)間或末次隨訪時(shí)間)，中位生存時(shí)間為26個(gè)月。

1.3 標(biāo)本收集 所有患者及健康者均抽取空腹5 ml靜脈血置于肝素抗凝管，室溫靜置半小時(shí)后1000 rpm離心5 min，立即分裝上清液，置于-20℃ 冰箱內(nèi)保存。

1.4 方法與試劑 血清中Pax9蛋白含量的測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法，人Pax9 ELISA試劑盒購(gòu)自上海藍(lán)基生物科技有限公司，檢測(cè)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所測(cè)數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，兩組定量資料組間比較采用t檢驗(yàn)。采用Kaplan-Meier和log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行生存分析。采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行預(yù)后的多因素回歸分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清中Pax9表達(dá)水平的比較 NSCLC患者血清Pax9的濃度顯著高于肺良性病變患者和健康者(P＜0.05)(見(jiàn)表1)。

表1 各組血清Pax9表達(dá)水平的比較(，例)

表1 各組血清Pax9表達(dá)水平的比較(，例)

注:▲NSCLC組與肺良性病變組比較;▲▲NSCLC組與健康組比較

組別 例數(shù) 血清Pax9(ng/ml) P值NSCLC組35 144.6±87.4肺良性病變組 42 94.8±44.4 0.004▲健康組 30 103.3±58.3 0.032▲▲

2.2 NSCLC患者血清Pax9的表達(dá)水平與患者臨床病理特征之間的關(guān)系 結(jié)果顯示，NSCLC患者血清Pax9的表達(dá)水平與患者性別、年齡、吸煙史及淋巴轉(zhuǎn)移等臨床病理特征無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)，與腫瘤病理分型、TNM分期顯著相關(guān)(P＜0.05)。腺癌患者血清中Pax9的濃度高于鱗癌患者。血清中Pax9的濃度隨TNM分期而升高，Ⅲ-Ⅳ 期明顯高于Ⅰ-Ⅱ期。(見(jiàn)表2)。

表2 Pax9的表達(dá)與肺癌臨床病理特征之間的關(guān)系

2.3 Pax9表達(dá)與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系 根據(jù)NSCLC患者血清中Pax9的濃度平均值144.6 ng/ml將35例NSCLC患者分為低表達(dá)組(＜144.6 ng/ml)和高表達(dá)組(≥144.6 ng/ml)。Kaplan-Meier分析結(jié)果顯示:高表達(dá)組的中位生存時(shí)間為23.0個(gè)月，明顯低于低表達(dá)組的中位生存時(shí)間29.0個(gè)月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.014)(見(jiàn)圖1)。

圖1 非小細(xì)胞肺癌不同Pax9表達(dá)水平的生存分析

采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行多因素分析，引入模型的因素有性別、年齡、吸煙史、腫瘤病理分型、TNM分期、淋巴轉(zhuǎn)移和Pax9表達(dá)等，結(jié)果顯示:腫瘤TMN分期、淋巴轉(zhuǎn)移和Pax9表達(dá)對(duì)NSCLC患者預(yù)后具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(見(jiàn)表3)。

表3 多因素分析臨床病理因素對(duì)總生存時(shí)間的影響

3 討論

Pax9是Pax基因家族的一員，其編碼的蛋白由兩部分組成，一部分為成對(duì)結(jié)構(gòu)域(Paired domain，PD)，由配對(duì)盒編碼，含128個(gè)氨基酸，由兩個(gè)獨(dú)立的子域構(gòu)成:氨基末端PAI域和梭基末端RED域，PAI可直接與DNA結(jié)合，在進(jìn)化過(guò)程中保持高度保守，RED則間接參與DNA的連接，在種屬間有較大差異;另一部分為八肽域(Octapeptide，OP)［4，5］。Pax9 基因編碼的轉(zhuǎn)錄因子在胚胎發(fā)育中的作用已十分明確，它在顱面和肢體發(fā)育中起重要作用，還與牙齒的發(fā)生、分化密切相關(guān)［6］，目前已知幾種Pax9基因的突變導(dǎo)致一些牙齒發(fā)育相關(guān)的畸形，如Pax9的基因的錯(cuò)義突變83 g→C，使得Pax9成對(duì)結(jié)構(gòu)域N末端pro替代了arg，導(dǎo)致了包括少牙畸形在內(nèi)的牙齒發(fā)育畸形［7］。研究顯示，Pax9在人類多種腫瘤組織中表達(dá)異常，如Pax9與食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展及惡性程度相關(guān)，與子宮內(nèi)膜樣腺癌的組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、浸潤(rùn)程度相關(guān)［8，9］。Lee J C等研究表明Pax9一方面能夠上調(diào)BCL-2表達(dá)使caspase-3失活，從而抑制凋亡發(fā)生，另一方面可以降低bax蛋白表達(dá)，促使凋亡相關(guān)蛋白(PARP)下調(diào)導(dǎo)致caspase-3失活，抑制凋亡發(fā)生［10］。Pax9導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的機(jī)制尚未完全清楚，還有待于進(jìn)一步研究。

本研究檢測(cè)了35例NSCLC患者、42例肺良性病變患者及30例健康對(duì)照者血清中Pax9的濃度，結(jié)果顯示，NSCLC患者血清Pax9的表達(dá)水平明顯高于肺良性病變患者及健康者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，表明Pax9在肺癌發(fā)生發(fā)展中起一定作用，檢測(cè)其血清含量有助于NSCLC的診斷。同時(shí)，本研究還對(duì)NSCLC患者血清中Pax9的表達(dá)水平與其臨床病理特征的關(guān)系進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，NSCLC患者血清Pax9的表達(dá)水平與患者性別、年齡、吸煙史及淋巴轉(zhuǎn)移等臨床病理特征無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)，與腫瘤病理分型、TNM分期顯著相關(guān)(P＜0.05)。采用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析，結(jié)果顯示，高表達(dá)患者生存時(shí)間明顯低于低表達(dá)患者(P＜0.05)。同時(shí)COX回歸分析顯示，腫瘤TMN分期、淋巴轉(zhuǎn)移和Pax9表達(dá)對(duì)患者預(yù)后具有明顯意義，Pax9在血清中的高表達(dá)有可能提示肺癌患者預(yù)后不良。但Pax9在血清中的高表達(dá)影響因素較多，Pax9的表達(dá)與肺癌的關(guān)系有待于在以后的研究中進(jìn)一步證實(shí)。

［1］苗雷英，李祥偉，劉超，等.涎腺腫瘤中Pax9基因的表達(dá)及其意義.口腔醫(yī)學(xué)研究，2006(1).

［2］吳健.口腔黏膜鱗狀細(xì)胞癌Pax9基因的表達(dá)及意義.吉林大學(xué)，2005.

［3］Kendall J，Liu Q，Bakleh A，et al.Oncogenic cooperation and coamplification of developmental transcription factor genes in lung cancer.Proc Natl Acad Sci U S A，2007，104(42):16663-16668.

［4］Kozmik Z.Pax genes in eye development and evolution.Curr Opin Genet Dev，200515 (4):430-438.

［5］Lang D，Powell SK，Plummer RS，et al.PAX genes:Roles in development， pathophysiology， and cancer.Biochem Pharmacol，2007，73(1):1-14.

［6］趙計(jì)林，陳揚(yáng)熙，鮑朗，等.中國(guó)先天性缺失牙患者PAX9基因的新突變.中華口腔醫(yī)學(xué)雜志，2005(4):266-269.

［7］Jumlongras D，Lin JY，Chapra A，et al.A novel missense mutation in the paired domain of PAX9 causes non-syndromic oligodontia.Hum Genet，2004，114(3):242-249.

［8］Gerber J K，Richter T，Kremmer E，et al.Progressive loss of PAX9 expression correlates with increasing malignancy of dysplastic and cancerous epithelium of the human oesophagus.J Pathol，2002，197(3):293-297.

［9］徐傲，陳柯，郭真理，等.子宮內(nèi)膜樣腺癌中TBX2、PAX9的表達(dá)及其相關(guān)性.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2012(2).

［10］Lee J C，Sharma M，Lee Y H，et al.Pax9 mediated cell survival in oral squamous carcinoma cell enhanced by c-myb.Cell Biochem Funct，2008，26(8):892-899.