陸新浩，趙志偉，劉 鴻，黃志勇，吳 勇，任祖伊

(1.余姚市禽畜病防治研究所，浙江余姚315400;2.義烏雙峰動(dòng)物藥業(yè)有限公司，浙江義烏322000)

大腸桿菌是水禽(鴨和鵝)養(yǎng)殖中危害最大的病原菌，且血清型復(fù)雜多變，因此很難用疫苗預(yù)防本病，治療主要依靠抗生素。

近年來(lái)，寧波及周邊地區(qū)，水禽養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大，耐藥大腸桿菌所占比例不斷增加。本試驗(yàn)對(duì)寧波及周邊地區(qū)送檢具有心包炎、肝周炎和氣囊炎病變的水禽大腸桿菌進(jìn)行分離和鑒定，分析和比較了水禽大腸桿菌對(duì)各類(lèi)抗生素的耐藥情況，可為獸醫(yī)臨床用藥提供參考，以縮短治療周期，減少治療成本，減少耐藥菌株的產(chǎn)生與擴(kuò)散。

1 材料與方法

1.1 受測(cè)菌株 分離自2011年余姚市禽畜病防治研究所家禽門(mén)診接待來(lái)自寧波及周邊地區(qū)送檢、具有肝周炎、心包炎或氣囊炎的鴨源和鵝源大腸桿菌樣本。

1.2 藥敏紙片 購(gòu)于杭州某微生物試劑有限公司，直徑為6 mm，規(guī)格詳見(jiàn)表1。

表1 藥敏紙片規(guī)格

1.3 培養(yǎng)基 麥康凱瓊脂、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、MH 瓊脂均購(gòu)自杭州某微生物試劑有限公司。具體按使用說(shuō)明配制。

1.4 細(xì)菌培養(yǎng) 無(wú)菌采集心包液、肝臟等病變部位病料，劃線接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，37℃培養(yǎng)18 h。形成直徑1～2 mm 光滑乳白色菌落。

1.5 細(xì)菌鑒定 結(jié)合臨床癥狀與細(xì)菌選擇性培養(yǎng)進(jìn)行鑒定。即從血平板分離到的疑似大腸桿菌挑取單個(gè)菌落接種麥康凱平板，37℃培養(yǎng)18 h 形成直徑1～2 mm 紅色菌落，染色鏡檢屬革蘭氏陰性桿菌，判為大腸桿菌陽(yáng)性。

1.6 藥敏試驗(yàn) 將分離到的大腸桿菌用生理鹽水稀釋后涂布MH 板，采用紙片擴(kuò)散法，培養(yǎng)12 h 后量取17 種抗生素對(duì)分離菌株的抑菌圈大小。

1.7 判定標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)每種藥物對(duì)大腸桿菌的敏感區(qū)間判定。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 細(xì)菌分離鑒定 從患有心包炎、氣囊炎和肝周炎病變的病鴨和病鵝樣本通過(guò)選擇性培養(yǎng)、染色鏡檢等步驟鑒定，分離菌株為大腸桿菌。

2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 詳見(jiàn)表2。

表2 大腸桿菌分離株對(duì)18 種抗生素的敏感性實(shí)驗(yàn)

由表2(R:耐藥，I:中度敏感，S，高度敏感)可見(jiàn)，分離株對(duì)四環(huán)素、林可霉素、氟苯尼考和復(fù)方新諾明耐藥嚴(yán)重，耐藥率均達(dá)85% 以上，分別為98.4%、98.1%、87.5%、94.1%;對(duì)阿米卡星、阿莫西林(棒酸)、亞胺培南、多粘菌素敏感，敏感率在60%以上。整體看，氨基糖苷類(lèi)、多肽類(lèi)、β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素都還保持較好的敏感率。

3 小結(jié)與討論

據(jù)生產(chǎn)實(shí)踐，抗生素的使用是產(chǎn)生耐藥性的主要原因之一。從表2檢測(cè)結(jié)果可以看出，獸醫(yī)臨床常用的抗生素都產(chǎn)生了不同程度的耐藥，以磺胺類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)、酰胺醇類(lèi)、林可胺類(lèi)和部分喹諾酮類(lèi)耐藥率最高，其中5 種抗生素耐藥率超過(guò)了85%，頭孢類(lèi)、多肽類(lèi)、喹諾酮類(lèi)、大環(huán)內(nèi)脂類(lèi)和氨基糖苷類(lèi)耐藥率次之;而少用或禁用的藥物，如亞胺培南等依舊保持較好的敏感率。試驗(yàn)表明，大腸桿菌對(duì)只能抑菌的抗生素如氟苯尼考、林可霉素、萘啶酸、復(fù)方新諾明比對(duì)能殺菌或高濃度殺菌的抗生素耐藥情況更為嚴(yán)重，可能與藥物不能有效殺滅病原菌，變異產(chǎn)生的耐藥基因在細(xì)菌的復(fù)制中被不斷的傳遞與增強(qiáng)有關(guān)。

使用抗生素促使大腸桿菌產(chǎn)生耐藥基因，耐藥基因的存在進(jìn)而減弱抗生素的治療作用，如此反復(fù)過(guò)程中，耐藥基因不斷增多擴(kuò)散以至現(xiàn)有的抗生素逐代被淘汰。如有一例種鵝大腸桿菌卵黃性腹膜炎病例，初時(shí)口服主要成分為鹽酸洛美沙星的藥物，效果顯著，很快控制病情。月余后復(fù)發(fā)，之后病情纏綿，時(shí)有個(gè)別死亡，畜主不舍淘汰，幾乎用藥不斷。3個(gè)月后，試用多種抗生素均不能有效控制死亡，最后逐步淘汰。

長(zhǎng)期、超量使用同種抗生素是產(chǎn)生耐藥性的主要原因之一，大腸桿菌是危害養(yǎng)禽業(yè)的常見(jiàn)疾病之一。水禽飼養(yǎng)環(huán)境粗獷，易誘發(fā)大腸桿菌病。養(yǎng)殖戶(hù)長(zhǎng)期使用抗生素預(yù)防和控制本病，使大腸桿菌對(duì)許多抗生素都產(chǎn)生了耐藥性，往往發(fā)病后用藥難以取得良好效果，延長(zhǎng)了治療周期，使病原菌產(chǎn)生耐藥的幾率增大。

實(shí)踐證明，預(yù)防是最有效的治療手段，良好的飼養(yǎng)環(huán)境能很大程度上減少大腸桿菌病的發(fā)生率。