趙 微 馮 沖 孟慶鑫

VEGF-C與腫瘤淋巴管生成的臨床意義

趙 微1馮 沖2孟慶鑫3

目的探討腫瘤淋巴管的生成與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF-C）表達(dá)的關(guān)系，為臨床腫瘤診斷提供科學(xué)依據(jù)。方法收集惡性腫瘤病理組織76例，采用EnVision免疫組化二步法和Weidner法對(duì)腫瘤組織中的VEGF-C和淋巴管密度（LVD）進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果LVD隨VEGF-C表達(dá)強(qiáng)度上升而升高，其中VEGF-C表達(dá)中等陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性的LVD值明顯高于陰性和弱陽(yáng)性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且LVD與VEGF-C表達(dá)呈線性關(guān)系（相關(guān)系數(shù)b=3.90，t=8.87，P＜0.05）。結(jié)論VEGF-C與腫瘤淋巴管生成有關(guān)，可以作為臨床腫瘤診斷的依據(jù)。

VEGF-C；LVD；腫瘤淋巴管生成；臨床意義

腫瘤淋巴管生成是腫瘤發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的必要條件，是目前腫瘤研究的一個(gè)新熱點(diǎn)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF-C（Vascular endothelial growth factor-C, VEGF-C）被公認(rèn)是淋巴管生成的重要調(diào)控因子。本研究檢測(cè)腫瘤患者病理組織中的VEGF-C含量及淋巴管密度（LVD），探討VEGF-C與LVD之間的關(guān)系及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集本院2001年1月～2002年12月經(jīng)手術(shù)切除惡性腫瘤病理組織76例，其中肺癌26例，直腸癌25例，乳腺癌21例，甲狀腺癌4例。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行放療、化療和免疫調(diào)節(jié)劑等藥物治療。

1.2 方法及內(nèi)容實(shí)驗(yàn)試劑包括鼠抗人D2-40單克隆抗體（1：50）購(gòu)自DAKO公司；鼠抗人VEGF-C多克隆抗體（1：80）購(gòu)自Santa Cruz公司。采用EnVision免疫組化二步法，首先對(duì)組織切片進(jìn)行脫蠟、水化、漂洗，置于TBS中阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，一抗孵育30min，色源底物溶液孵育10min，復(fù)染及封片。該法將二抗和酶聯(lián)接成一個(gè)多聚體，在組織中不含有這種多聚物，避免了組織中生物素的干擾，直接放大信號(hào)40～50倍，再與已經(jīng)結(jié)合的一抗反應(yīng)，最后顯色劑顯色。VEGF-C蛋白的陽(yáng)性表達(dá)為胞漿染成黃色顆粒，陽(yáng)性細(xì)胞在切片中呈灶性或彌漫性分布。VEGF-C表達(dá)以細(xì)胞染色強(qiáng)度和細(xì)胞陽(yáng)性百分率得分之和進(jìn)行判定[1]，隨機(jī)選擇5個(gè)顯微鏡視野計(jì)算細(xì)胞陽(yáng)性百分率[陽(yáng)性百分率（%）=陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)÷總細(xì)胞數(shù)×100%]，VEGF-C在腫瘤細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)見圖1。LVD的檢測(cè)方法按Weidner法進(jìn)行[2]，淋巴管主要分布在癌組織周圍見圖2。

圖1 VEGF-C在腫瘤細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)sp×100

圖2 淋巴管主要分布在癌組織周圍sp×100

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 13.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示；多組間均數(shù)的比較采用方差分析；多組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)；LVD與VEGF-C表達(dá)關(guān)系采用直線回歸方法進(jìn)行分析；P＜0.05表明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

LVD隨VEGF-C表達(dá)強(qiáng)度上升而升高（F= 35.94，P=0.000），其中VEGF-C表達(dá)中等陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性的LVD值明顯高于陰性和弱陽(yáng)性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；強(qiáng)陽(yáng)性的LVD高于中等陽(yáng)性，但差異尚未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），且LVD與VEGF-C表達(dá)呈線性關(guān)系（相關(guān)系數(shù)b=3.90，t=8.87，P＜0.05），見表1。

表1 VEGF-C表達(dá)與LVD的關(guān)系

3 討論

淋巴管生成與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，但其分子機(jī)制尚不清楚[3]，Hirakawa等[4]通過(guò)建立大鼠腫瘤模型，發(fā)現(xiàn)VEGF-C在腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移之前即可促進(jìn)前哨淋巴結(jié)淋巴管網(wǎng)的生成，進(jìn)而通過(guò)前哨淋巴結(jié)加速腫瘤細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，另外VEGF-C過(guò)表達(dá)可提高腫瘤細(xì)胞侵襲性。本組研究的肺癌、直腸癌、乳腺癌和甲狀腺癌的76例組織標(biāo)本中，除了早期體檢發(fā)現(xiàn)的7例乳腺癌標(biāo)本VEGF-C表達(dá)陰性外，其它標(biāo)本VEGF-C表達(dá)均呈現(xiàn)陽(yáng)性，而且VEGF-C表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性26例均為晚期癌癥患者。本項(xiàng)研究結(jié)果還顯示，LVD隨VEGF-C表達(dá)強(qiáng)度上升而升高，且LVD與VEGF-C表達(dá)呈線性關(guān)系，可見VEGF-C的高表達(dá)可促進(jìn)淋巴管生成，并與腫瘤細(xì)胞向區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，可以考慮作為臨床腫瘤診斷的輔助依據(jù)。癌組織周圍有淋巴管生成，在癌細(xì)胞的發(fā)生和發(fā)展中有重要意義，而阻止VEGF-C信號(hào)傳導(dǎo)是控制淋巴管生成有價(jià)值的治療策略。許多研究表明，淋巴管生成有多種因素參與，同時(shí)影響因素也較多，有些影響因素還需要進(jìn)一步深入的研究。隨著抗腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移治療方法不斷改進(jìn)，它將為惡性腫瘤的治療開辟新的途徑。

[1] CAO Y. Opinion： emerging mechanisms of tumour lymphangiogeneis and lymphatic metastasis[J]. Nat Rev Cancer, 2005,5(9)：735-743.

[2] 郭琳,張丹丹,王強(qiáng).VEGF-C與惡性腫瘤相關(guān)性的研究進(jìn)展[J].山東醫(yī)藥,2009,49(7)：113-114.

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R730.2

A

1673-5846(2013)01-0272-02

1 黑龍江省牡丹江醫(yī)學(xué)院解剖教研室，黑龍江牡丹江 157011

2 黑龍江省牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院物理診斷科，黑龍江牡丹江 157011

3 黑龍江省牡丹江市紅旗醫(yī)院附屬二分院物理診斷科，黑龍江牡丹江 157011