鄭永仁等

摘 要：目的：驗(yàn)證中藥泡沫劑對(duì)家兔細(xì)菌性和霉菌陰道炎的作用。方法：通過(guò)家兔模型陰道給予不同濃度中藥泡沫劑和對(duì)照品，觀察樣品對(duì)家兔陰道的刺激性；以及通過(guò)家兔的細(xì)菌性陰道炎和霉菌性陰道炎模型，分別給予不同濃度中藥泡沫劑及對(duì)照樣品；結(jié)果：中藥泡沫劑對(duì)家兔陰道無(wú)明顯刺激性，對(duì)家兔的細(xì)菌性和霉菌陰道炎的有一定的治療作用。

關(guān)鍵詞：陰道炎；泡沫劑；實(shí)驗(yàn)研究

中圖分類(lèi)號(hào)：R285

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007-2349（2013）06-0057-03

中藥泡沫劑為預(yù)研的婦科用陰道殺菌劑，由中藥黃柏、黃連、重樓、蛇床子、苦參等中藥研制而成，具有抗菌、消炎、止癢及滋潤(rùn)陰道的作用，為驗(yàn)證其藥效及安全性，按照國(guó)家有關(guān)外用藥的生產(chǎn)和使用規(guī)定，特對(duì)家兔細(xì)菌性和霉菌性陰道炎和家兔陰道刺激性進(jìn)行了前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料

1.1 材料與試劑 中藥低濃度、中濃度、高濃度泡沫劑由云南海正生物科技有限公司研制提供；保婦康栓，海南碧凱藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字（Z46020058，批號(hào)：20110930；）碘伏，昆明利健消毒制品有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：衛(wèi)消字（2005）第0205號(hào)，批號(hào)：20120501.

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與實(shí)驗(yàn)環(huán)境 初成年雌性未孕新西蘭實(shí)驗(yàn)兔，體重2.6～3.0 kg，由昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（滇）2011-0004，飼料由昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（滇）2011-0005；實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d。

1.2.1 動(dòng)物飼養(yǎng)于云南中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室普通級(jí)動(dòng)物房，溫度20～26℃，相對(duì)濕度：40～70%，噪音：60<分貝，動(dòng)物照度：10～18 lx；12 h/12 h明暗交替。使用許可證：SYXK（滇）2011-0011；發(fā)證單位：昆明市科技局；飼養(yǎng)兔籠為30 cm×45 cm×40 cm的不銹鋼籠具，由蘇杭實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠生產(chǎn)。每天上下午喂家兔全價(jià)顆粒飼料并觀察，自由飲用自來(lái)水。

1.3 動(dòng)物陰道和宮頸感染用純種病菌：白色念珠菌、金色葡萄球菌、大腸桿菌、病料收集無(wú)菌女性試子等，由云南省第一人民醫(yī)院臨床微生物檢驗(yàn)室提供。

1.4 儀器 GHP-927型隔水式恒溫培養(yǎng)箱，LAZX75KBS型立式壓力蒸汽滅菌器，上海景洪實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司生產(chǎn)。THZ-D臺(tái)式恒溫振蕩器，太倉(cāng)市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠生產(chǎn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法結(jié)果

2.1 動(dòng)物模型制作與分組

2.1.1 細(xì)菌性陰道宮頸炎動(dòng)物模型[1～2] 制作動(dòng)物模型前對(duì)家兔陰道PH值檢測(cè)為7.2±0.2。把純種金色葡萄球菌、大腸桿菌經(jīng)傳代培養(yǎng)制作高濃度病菌懸浮液，用濃度為1×109 CFU/mL金色葡萄球菌、大腸桿菌混懸液0.2 mL，經(jīng)導(dǎo)管注進(jìn)家兔宮頸內(nèi)，每天1次，連續(xù)造模3天后，臨床檢查動(dòng)物外陰及陰道紅腫及出現(xiàn)分泌物情況，取陰道及宮頸分泌物經(jīng)臨床微生物檢驗(yàn)是否含染病病源菌，以外陰及陰道發(fā)生明顯水腫陰道及宮頸分泌物經(jīng)臨床微生物檢驗(yàn)含有染病病源菌，判斷陰道炎制作成功。

2.1.2 霉菌性陰道宮頸炎動(dòng)物模型[2～3] 把純種白色念珠菌經(jīng)傳代培養(yǎng)制作高濃度病菌懸浮液，用濃度為1×109 CFU/mL白色念珠菌混懸液0.2 mL用導(dǎo)管注進(jìn)家兔宮頸內(nèi)，每天1次，連續(xù)造模3天后，臨床檢查動(dòng)物外陰及陰道水腫紅腫及出現(xiàn)分泌物情況。臨床檢查動(dòng)物外陰及陰道紅腫及出現(xiàn)分泌物情況，取陰道及宮頸分泌物經(jīng)臨床微生物檢驗(yàn)是否含染病病源菌。以外陰及陰道發(fā)生明顯水腫陰道及宮頸分泌物經(jīng)臨床微生物檢驗(yàn)含有染病病源菌，判斷陰道炎制作成功。

2.1.3分組給藥與觀察

2.1.3.1 細(xì)菌性陰道宮頸炎實(shí)驗(yàn) 將造模成功的50只家兔隨機(jī)分為模型、碘伏、低濃度、中濃度、高濃度泡沫組，一共5組，另外取10只未造模雌性家兔作為空白對(duì)照組，每組每只兔每天給相應(yīng)藥物一次，連續(xù)給藥6 d，給藥劑量灌滿(mǎn)陰道和到達(dá)宮頸部及涂抹陰門(mén)周?chē)鸀闇?zhǔn)，空白對(duì)照組給予無(wú)菌生理鹽水。每日對(duì)動(dòng)物一般行為和外陰情況進(jìn)行觀察，末次給藥6 h后臨床檢查動(dòng)物外陰及陰道紅腫及出現(xiàn)分泌物情況，取陰道及宮頸分泌物經(jīng)臨床微生物檢驗(yàn)是否含染病病源菌。外陰及陰道紅腫判為陽(yáng)性（+），否則判為（-），分泌物經(jīng)臨床微生物檢驗(yàn)含陽(yáng)性菌判為陽(yáng)性（+），否則判為（-），

2.1.3.2 霉菌性陰道宮頸炎實(shí)驗(yàn) 將造模成功的50只家兔隨機(jī)分為模型、保婦康栓、低濃度、中濃度、高濃度泡沫組，一共5組，另外取10只未造模雌性家兔作為空白對(duì)照組，每組每只兔每天給相應(yīng)藥物一次，連續(xù)給藥6天，給藥劑量灌滿(mǎn)陰道和到達(dá)宮頸部及涂抹陰門(mén)周?chē)鸀闇?zhǔn)，空白對(duì)照組給予無(wú)菌生理鹽水。每日對(duì)動(dòng)物一般行為和外陰情況進(jìn)行觀察，末次給藥6 h后臨床檢查動(dòng)物外陰及陰道紅腫及出現(xiàn)分泌物情況，取陰道及宮頸分泌物經(jīng)臨床微生物檢驗(yàn)是否含染病病源菌。外陰及陰道紅腫判為陽(yáng)性（+），否則判為（-），分泌物經(jīng)臨床微生物檢驗(yàn)含陽(yáng)性菌判為陽(yáng)性（+），否則判為（-）。

2.1.4 家兔陰道刺激黏膜性試驗(yàn)[4～6] 實(shí)驗(yàn)方法按衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002年版）陰道黏膜刺激實(shí)驗(yàn)開(kāi)展。選用健康、成年，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)檢查動(dòng)物陰道口有無(wú)分泌物、充血、水腫和其它損傷情況的雌性白色新西蘭家兔24只，體重2.0 kg～2.5 k g。將動(dòng)物隨機(jī)分為：陰性對(duì)照組、低濃度受試物、中濃度受試物組、高濃度受試物組、每組6只；給藥：每日將動(dòng)物仰面固定，暴露出會(huì)陰和陰道口。將導(dǎo)管用受試液或?qū)φ找簼駶?rùn)后輕柔地插入陰道（3 cm～4 cm），緩慢噴入灌滿(mǎn)受試液，抽出導(dǎo)管，完成一次給藥，每日如上給予相應(yīng)受試樣品一次，對(duì)照組動(dòng)物用生理鹽水作同樣處理，連續(xù)用藥6 d。末次給藥后24 h，采用氣栓法處死動(dòng)物，剖腹取出完整的陰道，縱向切開(kāi)，肉眼觀察是否有充血、水腫等癥狀，供病理取材時(shí)參考，然后將陰道放入10%福爾馬林溶液中固定24 h以上，選取陰道的兩端和中央3個(gè)部位的組織制片，HE染色后，進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

病理解剖檢驗(yàn)，按陰道黏膜刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（表1）進(jìn)行評(píng)分，按陰道黏膜刺激強(qiáng)度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（表2）確定刺激性強(qiáng)度。

2.2 結(jié)果

2.2.1 中藥泡沫劑對(duì)家兔細(xì)菌性陰道炎的影響 各組動(dòng)物造模后，外陰出現(xiàn)明顯紅腫，并出現(xiàn)分泌物，而空白組未觀察到明顯變化，模型組和各給藥組動(dòng)物出現(xiàn)焦躁不安舔舐外陰的癥狀，隨著不斷給藥，各給藥組動(dòng)物的紅腫現(xiàn)象逐步減輕，但給劑量組變化不一，以高劑量較為明顯；造模后動(dòng)物食量和飲水減少，空白組飲食正常，模型組體重明顯下降，具體見(jiàn)表3。

2.2.2 中藥泡沫劑對(duì)家兔霉菌性陰道炎的影響 各組動(dòng)物造模后，外陰出現(xiàn)明顯紅腫，并出現(xiàn)分泌物，而空白組未觀察到明顯變化，模型組和各給藥組動(dòng)物出現(xiàn)舔舐外陰的癥狀，隨著不斷給藥，各給藥組動(dòng)物的紅腫現(xiàn)象逐步減輕，但給劑量組變化不一，以高劑量較為明顯，造模后動(dòng)物食量和飲水減少，空白組飲食正常，體重明顯增加，模型組體重明顯下降，具體見(jiàn)表4。

2.2.3 結(jié)論 動(dòng)物造模3天后，與空白組比較，動(dòng)物外陰及陰道出現(xiàn)了明顯的紅腫和分泌物，通過(guò)連續(xù)6 d給藥，陽(yáng)性藥組和中藥泡沫劑低、中、高劑量組動(dòng)物的紅腫和分泌物癥狀均有不同程度改善，中藥泡沫劑還表現(xiàn)出明顯的量效關(guān)系，說(shuō)明中藥泡沫劑對(duì)家兔的細(xì)菌性和變色念珠菌引起的陰道炎有一定的治療作用，中藥泡沫劑低、中濃度對(duì)家兔陰道無(wú)刺激性，高濃度為極輕度刺激性。說(shuō)明隨著濃度增加，對(duì)家兔陰道刺激性也增加，臨床使用要注意用藥濃度。

3 討論

3.1 細(xì)菌性陰道炎試驗(yàn)中 模型對(duì)照實(shí)驗(yàn)組家兔陰道上皮組織恢復(fù)和體質(zhì)較差；在培養(yǎng)鑒定過(guò)程中觀察到金色葡萄球菌大腸桿菌生長(zhǎng)占優(yōu)勢(shì)，雜菌生長(zhǎng)幾乎觀察不到，動(dòng)物出現(xiàn)焦躁不安，飲食明顯減少，體重明顯下降等癥狀；碘伏消毒液治療家兔細(xì)菌性陰道宮頸炎，家兔陰道宮頸上皮組織恢復(fù)和體質(zhì)恢復(fù)一般；在培養(yǎng)鑒定過(guò)程中觀察到雜菌與金色葡萄球菌大腸桿菌生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)相當(dāng)；低、中濃度中藥泡沫劑治療家兔細(xì)菌性陰道宮頸炎，家兔陰道宮頸上皮組織恢復(fù)和體質(zhì)恢復(fù)一般；在培養(yǎng)鑒定過(guò)程中觀察到雜菌生長(zhǎng)占優(yōu)勢(shì)，金色葡萄球菌大腸桿菌生長(zhǎng)處于弱勢(shì)狀態(tài)。高濃度中藥泡沫劑治療家兔細(xì)菌性陰道宮頸炎，家兔陰道宮頸上皮組織恢復(fù)和體質(zhì)恢復(fù)較好；在培養(yǎng)鑒定過(guò)程中觀察到雜菌生長(zhǎng)占明顯優(yōu)勢(shì)，金色葡萄球菌大腸桿菌生長(zhǎng)處于弱勢(shì)狀態(tài)，這種情況可能與中藥泡沫劑中含有黃柏、黃連、重樓、蛇床子、苦參等提取物具有一定的抑制細(xì)菌生長(zhǎng)和抗炎止癢作用有關(guān)。

3.2 霉菌性陰道炎實(shí)驗(yàn)中 模型組家兔霉菌性陰道宮頸炎，家兔陰道宮頸上皮組織恢復(fù)和體質(zhì)恢復(fù)較差，白色念珠菌陽(yáng)性的樣本，白色念珠菌生長(zhǎng)站明顯優(yōu)勢(shì)；保婦康栓治療組家兔陰道宮頸上皮組織恢復(fù)和體質(zhì)恢復(fù)稍好，白色念珠菌陽(yáng)性的樣本，觀察到雜菌生長(zhǎng)與白色念珠菌生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)相當(dāng)；低、中濃度泡沫劑組，家兔陰道宮頸上皮組織恢復(fù)和體質(zhì)恢復(fù)較模型組稍好，白色念珠菌陽(yáng)性的樣本，觀察到雜菌生長(zhǎng)與白色念珠菌生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)相當(dāng)；高濃度泡沫劑治療家兔霉菌性陰道宮頸炎，家兔陰道宮頸上皮組織恢復(fù)和體質(zhì)恢復(fù)較好；白色念珠菌陽(yáng)性的樣本，外觀觀察到雜菌生長(zhǎng)占優(yōu)勢(shì)，白色念珠菌生長(zhǎng)明顯處于弱勢(shì)狀態(tài)，這種情況可能與中藥泡沫劑中含有黃連、黃柏、苦參的有效抑制細(xì)菌和真菌的有效成分有關(guān)，另外中藥泡沫劑中含有重樓、蛇床子的提取物具有一定抗炎止癢作用，可以減輕動(dòng)物因感染造成的霉菌性炎癥所引起的瘙癢，從實(shí)驗(yàn)中可以觀察到中藥泡沫劑中高劑量組動(dòng)物焦躁不安和舔舐外陰的癥狀明顯低于模型對(duì)照組，從陽(yáng)性菌檢出率和病理檢查結(jié)果也得到印證。

3.3 通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，低濃度泡沫劑治療家兔細(xì)菌性陰道宮頸炎，家兔陰道宮頸上皮組織恢復(fù)和體質(zhì)恢復(fù)一般，療效較差；而高濃度泡沫劑對(duì)家兔細(xì)菌性陰道宮頸炎和霉菌性陰道宮頸炎作用較好，家兔陰道宮頸上皮組織恢復(fù)和體質(zhì)恢復(fù)及療效較好；說(shuō)明中藥泡沫制劑療效隨中藥提取物濃度加大而增強(qiáng)，并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系；雖然中藥泡沫劑低、中濃度對(duì)家兔陰道無(wú)刺激性，高濃度為極輕度刺激性。說(shuō)明隨著濃度增加，對(duì)家兔陰道刺激性也增加，臨床使用要注意用藥濃度。三種不同濃度消炎抗菌外用泡沫劑藥用于人體，還需考慮病源病灶環(huán)境的酸堿度及感染菌毒力強(qiáng)弱以及泡沫劑濃度高以后對(duì)陰道帶來(lái)的刺激性增加；（家兔陰道PH值均為7.2，接近中性；女性陰道PH值均為4.3，偏酸性）。家兔陰道感染細(xì)菌和霉菌陰道宮頸炎是純種菌株感染，毒力較強(qiáng)，泡沫劑給藥治療，療效相對(duì)要差一點(diǎn)；女性感染細(xì)菌和霉菌陰道宮頸炎，即使是急性感染，也有雜菌叢生，雜菌混合，病菌生長(zhǎng)相互制衡，染病菌毒力較弱，泡沫劑給藥治療，療效相對(duì)較好。

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（收稿日期：2013-04-22）