張 婭，李春江，王 茜

（紅河州質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督綜合檢測(cè)中心，云南 蒙自 661100）

氰化物是食品安全重點(diǎn)關(guān)注的物質(zhì)之一，其是一類劇毒化合物，可經(jīng)過呼吸道、消化道以及皮膚進(jìn)入體內(nèi)，迅速作用于呼吸酶，引起組織內(nèi)窒息，從而引起組織衰竭以至機(jī)體死亡[1]。白酒中的氰化物主要來自于原料，如木薯以及其他含有氰甙類配糖體的野生植物發(fā)酵過程中水解產(chǎn)生氫氰酸。大部分氫氰酸在原料蒸煮是可揮發(fā)掉，但仍會(huì)有少量的氫氰酸殘留在白酒中[2]。

氰化物的檢測(cè)方法有很多種，如氣相色譜法[3-5]、離子色譜法[6-7]、液相色譜法[8]、離子選擇電極法[9-11]、分光光度法[12-14]等。國標(biāo)中酒的氰化物測(cè)定方法是異煙酸-吡唑啉酮分光光度法[15]，異煙酸-巴比妥酸光度法是國標(biāo)測(cè)定生活飲用水中氰化物的方法之一[16]，而硫代巴比妥酸與巴比妥酸具有相似的結(jié)構(gòu)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)異煙酸-硫代巴比妥酸光度法測(cè)定酒中氰化物進(jìn)行的研究，結(jié)果表明，在弱酸性環(huán)境和氯胺T存在的條件下，氰化物可與異煙酸-硫代巴比妥酸形成一種藍(lán)色染料，該染料在波長642nm處有一個(gè)最大吸收峰，其吸光度值與氰化物含量在一定范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，可用于微量氰化物的定量分析。將該方法用于酒中氰化物的測(cè)定，結(jié)果與國家標(biāo)準(zhǔn)方法相吻合，加標(biāo)回收率為96.6%～105.6%，方法的穩(wěn)定性和靈敏度均令人滿意。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

酒樣：采購于當(dāng)?shù)厥袌?chǎng)；氰化物：上海徐行化工廠；KH2PO4-NaOH、；NaOH、乙酸、乙酸乙酯：天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；異煙酸-硫代巴比妥酸、氯胺T：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；以上試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

氰化物標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：100μg/mL（準(zhǔn)確濃度用銀鹽法[1]標(biāo)定）；KH2PO4-NaOH緩沖溶液：0.05mol/L；異煙酸-硫代巴比妥酸溶液配制：稱取2.5g異煙酸和2.0g硫代巴比妥酸，加入1mol/L NaOH溶液30mL，溶解后鉀純水至100mL；氯胺T溶液：10.0g/L，現(xiàn)用現(xiàn)配；NaOH溶液：0.05mol/L和0.50mol/L；3%乙酸溶液的配制；乙酸溶液：10g/L；酚酞指示劑：1.0g/L；乙酸乙酯溶液：10g/L。

1.2 儀器與設(shè)備

T6新世紀(jì)型紫外可見分光光度計(jì)：北京普析通用有限公司；UV-2550型紫外可見分光光度計(jì)：日本島津公司。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取10μg/mL 氰化物標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1mL～1.0mL于25mL比色管中，加入0.05mol/L NaOH 溶液至12.5mL，放置10min，加入一滴酚酞指示劑，用乙酸調(diào)節(jié)至紅色剛好消失，再加入KH2PO4-NaOH緩沖溶液5.0mL，氯胺T溶液0.5mL，混勻，放置4 min后，加入異煙酸-硫代巴比妥酸溶液5.0mL，并用水稀釋至刻度，混勻，放置30min后，以試劑空白為參比，用比色皿，于波長642nm處測(cè)定吸光度值A(chǔ)，以氰化物含量（2cm）對(duì)A繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.2 酒樣分析

取1.0mL試樣與25mL具塞比色管中（若酒樣渾濁和有色，按照文獻(xiàn)[1]方法進(jìn)行蒸餾，取樣量為2mL），按1.3.1操作測(cè)定吸光度值。以標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量同時(shí)進(jìn)行對(duì)照分析以及加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)。氰化物含量計(jì)算公式：

式中：X為試樣中氰化物含量，mg/L；m為從標(biāo)準(zhǔn)曲線查到的試樣中氰化物質(zhì)量，μg；V為試樣的體積，mL。

2 結(jié)果與討論

2.1 吸收光譜

氰化物標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸收光譜見圖1。在該實(shí)驗(yàn)條件下，氰化物與異煙酸-硫代巴比妥酸形成的藍(lán)色染料，在波長642nm處有一個(gè)最大吸收峰，所以本方法選擇642nm作為測(cè)量波長。

圖1 氰化物標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸收光譜圖Fig.1 Absorption spectra of standard cyanide solution

2.2 酸度的影響

取不同pH值的KH2PO4-NaOH緩沖溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，溶液的pH值為5.7時(shí)的吸光度值達(dá)到最大，因此選用pH 5.7的KH2PO4-NaOH緩沖溶液進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

表1 酸度對(duì)氰化物含量的影響Table 1 Effect of acidity on cyanide content

2.3 氰化物轉(zhuǎn)化時(shí)間及氯胺T用量的影響

選用不同的氯胺T用量和氰化物轉(zhuǎn)化時(shí)間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表2和表3。從表2、表3可知，實(shí)驗(yàn)選擇氰化物轉(zhuǎn)化時(shí)間4min和0.4mL的氯胺T用量具有較大的吸光度值（A）。

2.4 異煙酸-硫代巴比妥酸用量的影響

顯色劑的用量對(duì)顯色反應(yīng)有較大影響，顯色劑用量不夠會(huì)導(dǎo)致顯色反應(yīng)不完全。不同用量的異煙酸-硫代巴比妥酸顯色反應(yīng)吸光度值（A）見表4。由表4可知，實(shí)驗(yàn)選用5mL異煙酸-硫代巴比妥酸反應(yīng)具有最大且穩(wěn)定的吸光度值。

表2 氯胺T用量對(duì)氰化物含量的影響Table 2 Effect of the amount of chloramine-T on cyanide content

表3 氰化物轉(zhuǎn)化時(shí)間對(duì)氰化物含量的影響Table 3 Effect of cyanide conversion time on cyanide content

表4 異煙酸-硫代巴比妥酸用量對(duì)氰化物含量的影響Table 4 Effect of the amount of isonicotinic acid-thiobarbituric acid on cyanide content

2.5 共存物質(zhì)的影響

酒中含有一定量的乙酸乙酯、乙酸和大量的乙醇，為確定其對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，本實(shí)驗(yàn)加入無水乙醇0.6mL，1g/L～5g/L的乙酸乙酯和乙酸。當(dāng)測(cè)定含量為6.0μg氰化物時(shí)，相對(duì)誤差在±5%范圍內(nèi)?？梢娋浦谐Ｒ娢镔|(zhì)對(duì)測(cè)定基本沒有影響，方法的選擇性較好。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線

本檢測(cè)方法氰化物含量在0～10.0μg/25mL范圍內(nèi)符合朗伯比爾定律，標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為A=0.0663c+0.0038，r=0.9997。

2.7 精密度實(shí)驗(yàn)

對(duì)1.00μg和8.00μg 氰化物標(biāo)準(zhǔn)溶液和2份白酒樣平行測(cè)定5次，測(cè)定結(jié)果的平均值分別為為1.03μg 和8.05μg，0.24mg/L和0.12mg/L，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）分別為2.1%和1.5%，2.9%和3.2%，反映該方法精密度良好。

2.8 酒樣分析

取3份酒樣按按1.3.2操作測(cè)定氰化物含量，同時(shí)與國標(biāo)法（異煙酸-吡唑啉酮法）對(duì)照，并作加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表5。

表5 酒樣中氰化物含量的分析結(jié)果Table 5 Analytical results of cyanide content in alcoholic drink

由表5可知，該方法對(duì)氰化物含量的檢測(cè)結(jié)果與國標(biāo)法吻合，加標(biāo)回收率為96.6%～105.6%，說明該檢測(cè)方法準(zhǔn)確度高。

3 結(jié)論

結(jié)果表明，在pH 5.7，氯胺T用量0.4mL，氰化物轉(zhuǎn)化時(shí)間4min，異煙酸-硫代巴比妥酸用量5mL的條件下，吸光度值達(dá)到最大。據(jù)此建立了酒中氰化物的異煙酸-硫代巴比妥酸分光光度法，用本法檢測(cè)的結(jié)果與國標(biāo)法吻合，方法精密度良好，加標(biāo)回收率為96.6%～105.6%，準(zhǔn)確度高，可以用于酒中微量氰化物的檢測(cè)。

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